miR-483-5p表达水平与肝癌患者相关病理学参数的关联性分析

程兰芳

肝癌是临床常见肝脏肿瘤疾病，病程进展迅速，恶性程度高，发病率与病死率均较高，临床治疗应以切除为主[1]。但早期症状不明显，尽早诊断肝癌是治疗关键所在，寻找早期诊断标志物具有重要意义[2]。微小RNA(miR)属于内源性非编码RNA，表达异常会反映肝癌发生发展过程，能调控下游靶基因，发挥生物学功能，其中miR-483-5p血清表达水平能对肝癌诊断具有指导作用[3]。本研究选取我院肝癌患者98 例， 旨在探讨miR-483-5p表达水平与其相关病理学参数的相关性。现报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2018年9月至2019年9月我院肝癌患者98例，其中男52例，女46例；年龄39～65岁，平均年龄(52.69±5.98)岁；肿瘤直径1.4～6.8 cm，平均直径(4.78±0.89)cm；淋巴结转移：有42例，无56例；分化程度：低31例，中26例，高41例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期23例，Ⅲ期26例，Ⅳ期29例。所有患者均经病理学组织活检确诊为肝癌，均为原发病灶，均签署知情同意书；排除接受过化疗或放疗、合并其他肿瘤者。

1.2 方法 ①取患者肿瘤组织、距癌组织边缘＞5 cm癌旁组织，保存于液氮中待测；取肝癌组织200 mg，剪成小块进行研磨，期间不断加入液氮，在癌组织中加入1 mL RNAiso混匀及200 μL三氯甲烷，混匀后于4 ℃下进行离心分离取上清液350 μL，加入异丙醇500 μL，混匀并静置10 min，离心后加入无水乙醇750 μL，涡旋混匀，离心倒掉上清，静置后进行风干，加入DEPC 20～30 μL将RNA沉淀进行溶解，采用Nanodrop及电泳检测RNA 纯度及质量，并利用反转录试剂盒(日本TaKaRa公司)得到cDNA。②miR-483-5p表达水平检测，采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR法)检测，反 应 体 系：10 μLSYBR premix ex taq Ⅱ＋0.8 μL 10 μmol/L上下游引物＋6 μL Rnase-Free H2O ＋2 μL cDNA ＋0.4 μL ROX Reference DyeⅡ，充分混匀；采用SYBER Green法，反应条件：预变形30 s 95 ℃、变性5 s 95 ℃、延伸30 s 72 ℃，共循环40次，最终进行延伸7 min 72 ℃；共设置3个复孔，取平均值，内参为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因，采用ΔΔCt法计算miR-483-5p表达水平，ΔΔCt＝ΔCtmiR－483－5p－ΔCtGAPDH。③根据肝癌组织中miR-483-5p表达水平的中位数，将98例肝癌患者分为高表达、低表达，各49例；并收集肝癌患者年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移、分化程度、TNM分期等相关病理学参数，分析其相关性。

1.3 观察指标 癌组织、癌旁组织中miR-483-5p表达水平。miR-483-5p表达与病理学参数关联性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0对数据进行分析，计数资料以率表示，行χ2检验，计量资料以(±s)表示，行t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-483-5p 表达水平 肝癌组织中miR-483-5p表达水平(15.01±3.14)log10 copies/mL高于癌旁组织(2.92±1.02)log10 copies/mL，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 miR-483-5p表达与病理学参数关联性(表1)肝癌组织中miR-483-5p表达水平与性别、年龄、肿瘤直径无相关性(P＞0.05)，与淋巴结转移、分化程度、TNM分期有相关性(P＜0.05)。

表1 miR-483-5p表达与病理学参数关联性[n(%),n＝49]

3 讨论

肝癌是在临床患病率、病死率在我国分别占第3、4位，严重威胁患者生命安全，但由于其起病不明显，确诊时多为晚期，易错过最佳治疗时机，导致患者预后效果不佳，1年内生存率极低[4]。

目前临床常采用超声、CT、血清甲胎蛋白(AFP)、肝脏特异性蛋白检查，但诊断敏感度、准确度均有不足之处，临床上仍需要寻找肝癌早期准确诊断标志物[5]。miRNA是肿瘤领域新型研究热点，其在血清中变化异常情况与肿瘤发生、发展、预后、复发等多过程具有密切联系，在肿瘤早期诊断应用过程中具有良好发展前景[6]。李茶香等[7]学者研究表明，miR-483-5p在肝癌组织的表达与肿瘤分化程度、预后等密切相关。本研究结果显示，肝癌组织中miR-483-5p表达水平高于癌旁组织(P＜0.05)，说明miR-483-5p表达水平在肝癌组织中明显升高。miR-483-5p最早发现于人胚胎肝脏中，参与胶质母细胞瘤、膀胱癌等多种肿瘤细胞发生发展，能发挥抑癌基因功能，在肝癌患者中表达量亦有升高，与癌旁正常组织相比，肝癌组织中miR-483-5p表达水平更高[8]。本研究结果还显示，肝癌组织中miR-483-5p表达水平与淋巴结转移、分化程度、TNM分期有相关性(P＜0.05)，说明miR-483-5p表达水平与肝癌患者病理学参数具有相关性。随着肝癌病情发展，分化程度增强、TNM分期升高、淋巴结发生转移，体内抑癌基因表达增加，miR-483-5p表达水平随之升高，能准确反映病情发展程度[9-10]。因此，在肝癌早期进行miR-483-5p水平检测，通过其表达水平高低判断肝癌病理学发展进程，于早期进行准确诊断，并采取积极治疗，从而有效避免肝癌发展至晚期，能挽救更多患者生命，具有重要意义。

综上所述，miR-483-5p表达水平在肝癌组织中较高，且与病理学参数淋巴结转移、分化程度、TNM分期有关，有助于肝癌的临床诊断与治疗。