地中海贫血产前筛查模式对重型地中海贫血患儿诊断的影响

余小燕 朱津 杨嘉慧 朱晓洁 梁慧演

地中海贫血为慢性溶血性疾病,是最常见的常染色体隐性遗传病,是由于珠蛋白合成受抑所引起的溶血性贫血,依据珠蛋白合成异常主要分为α-地中海贫血(简称α 地贫)和β-地中海贫血(简称β 地贫)。夫妻双方携带同型地中海贫血基因有1/4 概率出生重型α 地中海贫血(巴氏水肿胎)或重型β 地中海贫血患儿。若胎儿存在重型α 地中海贫血则不能存活,并且在临床治疗中,对于中间型与重型β 地中海贫血患者的相对治疗方式较少［1,2］；若孕妇存在地中海贫血高风险因素,则需要进行必要的产前诊断,以此达到控制重型地中海贫血患儿的出生［3,4］。本文在地中海贫血的高发地区,通过采用规范的地中海贫血产前筛查模式,增强筛查效果并尽早实施地中海贫血产前诊断。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2017年1月～2019年1月对在本院产科门诊就诊的8258例孕妇进行地中海贫血筛查。孕妇年龄19～45 岁,平均年龄(32.66±5.22)岁；孕周12～26 周,平均孕周(17.99±3.21)周。通过规范的地中海贫血产前筛查模式对存在地中海贫血高危因素的孕妇进行遗传咨询,检出155例夫妻同型地中海贫血,通过惠州市中心人民医院产前诊断伦理委员会批准,所有孕妇及其家属均签署知情同意书,实施地中海贫血产前诊断干预模式,在选择的原则下终止妊娠32例。其余随访时间为产后1年左右,随访与产前诊断结果相符。

1.2 方法

1.2.1 地中海贫血筛查的具体方式 初次筛查采用XS-1000i 全自动血常规分析仪行血液学指标筛查,将血红细胞参数MCV/MCH 联合血红蛋白电泳的方式进行,血红蛋白电泳检测采用法国Sebia Cappilarys 2 型全自动毛细管电泳分析仪及厂家的配套试剂及校准品。α 地中海贫血诊断标准：MCV＜82 fl 或MCH＜27 pg,并且存在血红蛋白A2(HbA2)＜2.5%或者血红蛋白F(HbF)＜4.0%：β 地中海贫血诊断标准：HbA2＞3.5%或者HbF＞4.0%［5］。孕妇检测为阳性则再实施基因检测,同时对丈夫实施地中海贫血筛查、基因检测,若孕妇还存在高风险妊娠因素则予以产前诊断干预模式。

1.2.2 基因检测 孕妇筛查为阳性的外周血、羊水细胞、脐血与绒毛组织提取的基因组DNA,采用潮州凯普公司试剂PCR+膜导流杂交法进行α 地中海贫血3 种常见的缺失型和3 种非缺失型突变及17 种常见β 地中海贫血基因突变类型进行检测。检测操作均按照试剂盒说明书进行操作,扩增条件为：95℃预变性10 min,进行35 个循环扩增,在每个循环中包括有98℃变性45 s、62℃退火90 s、72℃延伸3 min,循环结束后72℃延伸5 min［6］。

2 结果

2.1 HbA2 在患者中的筛查结果 1024例血常规MCV降低和MCH 降低的筛查患者中,889例血红蛋白电泳异常行地中海贫血基因检测,与基因检测结果比对,符合率分别为：α 地中海贫血55.59%,β 地中海贫血97.25%。见表1。

表1 HbA2 筛查与基因检测结果对比(n,%)

2.2 地中海贫血基因产前诊断统计情况 155例孕妇行产前诊断,实施羊膜腔穿刺术145例,确诊重型地中海贫血25例；实施脐血穿刺术5例,确诊重型地中海贫血巴氏水肿胎5例；实施绒毛活检5例,确诊重型地中海贫血巴氏水肿胎2例。见表2。

表2 地中海贫血基因产前诊断结果(n)

3 讨论

地中海贫血会严重威胁人类的身体健康,属于发生率极高的遗传性疾病,其携带同型基因夫妇有1/4的概率孕育重型地中海贫血胎儿,给家庭与社会带来沉重的经济负担［7］。其中广东和广西地区为地中海贫血高发区,广东省人口平均地中海贫血基因携带率达16.83%。目前地中海贫血没有比较有效的临床治疗方式,因此,对高发地区进行防控干预是关键,尽早干预临床价值更高。地中海贫血产前筛查模式主要通过血常规联合血红蛋白电泳筛查及基因检测确诊的产前地中海贫血筛查策略［8］,规范的产前筛查可及早发现地中海贫血高危因素的孕妇并进行遗传咨询,评估孕育重型地中海贫血患儿的几率及选择实施介入性产前诊断。本中心对MCV 及MCH 值降低的血常规患者进行血红蛋白电泳检测,通过HbA2 值异常情况与地中海贫血基因检测结果对比发现,HbA2 值降低对于α 地中海贫血检出的符合率为55.59%,具有较高的漏检率；但对于β 地中海贫血检测符合率则达97.25%,对诊断具有重要的参考价值。且数据分析与南方医院李莉艳等［9］研究结论一致,表明血红蛋白电泳HbA2 联合MCV 和MCH 结果的筛查模式对β 地中海贫血的诊断具有较高的价值,可有效的降低对于β 地中海贫血筛查的漏诊以及误诊现象。α 地中海贫血的筛查则可通过联合超声监测指征,开展遗传咨询确定是否尽早进行产前诊断。

本中心实施产前诊断羊膜腔穿刺术145例,确诊重型地中海贫血25例；5例脐血穿刺术全部为重型地中海贫血巴氏水肿胎；5例绒毛活检,确诊2例重型地中海贫血巴氏水肿胎。根据国家卫健委和省妇幼保健院的地中海贫血防控项目指示,地中海贫血须及早、有效防控。现行地中海贫血产前诊断技术包括羊膜腔穿刺、脐血穿刺以及绒毛活检。其中以羊膜腔穿刺为主导技术,适合中期妊娠的产前诊断进行,穿刺时间为17～24 周；脐血穿刺适合孕26 周后,且错过前期羊膜腔穿刺的高危因素孕妇；绒毛活检宜在早期妊娠中(孕11～13+6周)进行。妊娠早期在超声的引导下穿刺到胎盘的绒毛组织,由于胎盘绒毛的体积较大,穿刺取材更便捷,同时无需反复穿刺,减少流产的风险。同时,绒毛细胞与胎儿组织同源,具有相同的遗传性,通过绒毛的检测可客观地反映胎儿的情况。随着高分辨率超声筛查的逐步开展,绒毛活检技术也在逐渐受到重视［10］。相比羊膜腔穿刺和脐血穿刺,在早孕期进行绒毛活检可更早诊断结果,在更小孕周引产,有效降低孕妇及家属的心理负担及经济负担,实现高效的地中海贫血基因产前诊断［11］。

地中海贫血虽是严重影响人类健康的遗传性疾病,但其通过有效的筛查方法和及早进行专业的遗传咨询和产前诊断可有效避免中重型地中海贫血患儿的出生。为了防止部分地中海贫血的漏诊及误诊现象,地中海贫血产前筛查应环环相扣,不断完善追踪随访制度,选择最优的产前筛查模式,提高穿刺及基因检测技术,尽早实施产前诊断防控干预,最大程度阻断重型地中海贫血患儿的出生［12］。