HPLC法快速测定五种含厚朴制剂中和厚朴酚与厚朴酚的含量

王丽琼，吴 丽

(乐山市食品药品检验检测中心，四川 乐山 614000)

厚朴为兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮，性味苦、辛、温。厚朴是中药制剂中的常用配方，主治燥湿消痰，下气除满，用于湿滞伤中，脘痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳[1-3]。药品质量直接关系到人民的生命安全，当今社会，药品检验检测备受重视，随着社会经济的持续、快速发展，具有快速、准确等优点的快检技术应用日益广泛[4]。中成药包含几味到几十味中药材，以特征成分反应中药材的质量是比较直观、快速和准确的方法。厚朴主要成分为木脂素、生物碱、挥发油等[5-7]，其中特征性成分为木脂素类(和厚朴酚与厚朴酚)，可作为厚朴的指标性成分应用于快检技术中。参阅相关文献[8-12]，和厚朴酚与厚朴酚的含量测定方法多为HPLC法，但不同品种使用不同色谱条件，费时、耗力，不符合快检要求。本文选用五种含厚朴制剂(木香顺气丸、清肝利胆胶囊、香连化滞丸、泻痢消丸和泻痢消片)，现行质量标准和相关文献无此五个品种中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定内容，本文建立一个HPLC色谱条件同时测定五种制剂中和厚朴酚与厚朴酚的含量，一方面提高五种含厚朴制剂质量标准，另一方面为药品快检提供参考。

1 仪器与试药

1260高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器和OpenLAB CDS工作站(安捷伦公司)；XSE205 DualRange电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司，十万分之一)；CQ-100B超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂)；ULPZY-250DROMB优普系列纯水设备(成都超纯科技有限公司)；ULUP-II-10T优普系列超纯水器(成都超纯科技有限公司)。

和厚朴酚对照品(110730-201614，99.3%)、厚朴酚对照品(110729-201513，98.8%)均购自中国食品药品检定研究院。含香附制剂信息，见表1。甲醇(河北百灵威超精细材料有限公司，色谱纯)，甲醇(成都市科隆化学品有限公司，分析纯)，磷酸(重庆川东化工(集团)有限公司，分析纯)，试验用水为纯化水和超纯水。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Welch Ultimate LP-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液(75∶25)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：290 nm；进样量：10 μL。取混合对照品溶液、五种含厚朴制剂样品溶液、对应五种不含厚朴的阴性对照溶液进样分析，根据保留时间和DAD检测器扫描的紫外光谱图定性。混合对照品溶液和五个品种样品溶液中和厚朴酚与厚朴酚的峰顶点紫外光谱图，见图1、图2，光谱一致；混合对照品溶液、五个品种样品溶液和五个品种阴性对照溶液色谱，见图3、图4，和厚朴酚、厚朴酚与相邻峰分离度符合要求，阴性对照无干扰。

图1 和厚朴酚紫外光谱

图2 厚朴酚紫外光谱

图3 混合对照品和五种含厚朴制剂高效液相色谱

图4 五种阴性对照液相色谱

2.2 混合对照品溶液的制备

取和厚朴酚对照品13.26 mg和厚朴酚对照品29.68 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液；精密量取混合对照品储备液5 mL，置于100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取样品，粉碎(清肝利胆胶囊：直接取内容物，混匀；香连化滞丸(大蜜丸)：切碎，加适量硅藻土，研匀)，取适量(样品量见表1)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 mL甲醇，称定重量，超声处理1 h，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得。

2.4 阴性对照溶液的配制

按五种制剂的处方配制对应不含厚朴成分的五种阴性对照溶液。

2.5 定量限

取线性标准曲线的最低点溶液，稀释至适宜浓度，进样分析，根据S/N=10，得定量限分别为和厚朴酚0.06 μg·mL-1，厚朴酚0.08 μg·mL-1。

2.6 线性与范围

精密吸取混合对照品溶液1 mL和5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；精密吸取混合对照品储备液1 mL、2 mL、5 mL，分别置于3个对应10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；加上混合对照品溶液共6个线性点，浓度分别为和厚朴酚：1.32，6.58，13.17，26.33，52.67，131.67 μg·mL-1，厚朴酚2.93，14.66，29.32，58.65，117.30，293.24 μg·mL-1。取上述6种溶液，按“2.1”进样分析，记录峰面积。以浓度(μg·mL-1)为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，线性回归，得和厚朴酚回归方程为Y=15.400 9X+0.354 6，R2=1.000 0；厚朴酚回归方程为Y=15.442 0X-5.070 9，R2=0.999 8。和厚朴酚在1.32～131.67 μg·mL-1质量浓度范围内呈良好线性关系；厚朴酚在2.93～293.24 μg·mL-1质量浓度范围内呈良好线性关系。

2.7 仪器进样精密度

取混合对照品溶液，按“2.1”进样分析，连续测定6次，记录峰面积。结果，RSD(n=6)为和厚朴酚0.9%，厚朴酚0.5%，表明仪器进样精密度符合要求。

2.8 重复性实验

五种含厚朴制剂各取一批，照“2.3”方法制备供试品溶液，每批平行6份，分别进样分析。结果见表2，表明重复性良好。

2.9 加样回收率

五种制剂各取一批，样品量分别为表1中对应量的一半，每个制剂6份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入混合对照品储备液1 mL，按“2.3”提取，照“2.1”分别进样分析五种含厚朴制剂共30份溶液，计算和厚朴酚与厚朴酚的加样回收率。结果见表2，和厚朴酚平均加样回收率为98.6%～99.6%，RSD0.8%～1.7%；厚朴酚平均加样回收率为98.7%～100.1%，RSD0.5%～1.6%，结果较好。

2.10 溶液的稳定性

取“2.3”项下的五种制剂样品溶液，室温放置，分别于0、2、4、8、12、24 h进样10 μL，记录峰面积。结果见表2，样品溶液在室温条件下放置24 h内稳定性较好。

表2 重复性、加样回收率和稳定性结果

注：A.和厚朴酚；B.厚朴酚。

2.11 含量测定

取五种含厚朴制剂共11批，照“2.3”制备供试品溶液，照“2.1”进样测定，采用外标法分别计算和厚朴酚与厚朴酚的含量，最后结果以和厚朴酚与厚朴酚含量之和计，结果见表3。

表3 样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

3.1 检测波长的选择

根据图1和图2紫外光谱图，可见和厚朴酚与厚朴酚在290 nm处同为波峰，可作为测定波长。

3.2 样品处理方式的选择

胶囊剂直接取内容物，片剂和水丸粉碎处理，大蜜丸加适量硅藻土研匀分散。超声提取法是简单有效的提取方式，考察了浸泡过夜对和厚朴酚与厚朴酚提取效率的影响，结果显示无差异，采取直接超声提取。考察超声时间(30 min、40 min、50 min、60 min和80 min)及溶剂体积(25 mL、50 mL、100 mL)，最后确定为甲醇50 mL，直接超声60 min。

4 结语

中药材的次生代谢产物主要由植物的种类和生境决定[13-14]，也受到植物物候期及其代谢节律的调控，导致同一厂家不同批次样品中和厚朴酚与厚朴酚含量不一致。中成药的质量还与剂型和生产工艺有关，本文五种制剂中包含片剂、胶囊剂、丸剂(水丸和大蜜丸)，中成药丸剂多采用饮片或部分饮片提取浓缩后，与适宜辅料或其余饮片细粉，以水、炼蜜为黏合剂制成，经过浓缩后，主要成分含量提高。本文所涉及的品种，含量按照质量分数(mg·g-1)计算，和厚朴酚与厚朴酚含量丸剂比片剂高。根据临床用药剂量折算，和厚朴酚与厚朴酚含量总和也是丸剂大于胶囊剂和片剂，并且含量差异大，差异是几倍甚至几十倍。因此，为了保障药品质量，指导临床合理用药，很有必要对厚朴进行质量控制。本实验采用HPLC法测定五种含厚朴制剂中和厚朴酚与厚朴酚的含量，经过方法学验证，方法专属性强，重复性好，准确度高，样品溶液稳定，可作为含厚朴制剂质量分析方法，方法简单、快速，超声直接提取，二元流动相等度洗脱，出峰时间快，同一色谱条件同时分析多种制剂，可推广于药品快速检验应用中。