化妆品中性激素检测方法的改进

2018-01-14仇朝红宋薇香

中西医结合心血管病杂志(电子版) 2018年25期

仇朝红，宋薇香

（1．青海省药品不良反应监测中心，青海西宁 810007；2．青海制药厂有限公司，青海西宁 810001）

我国化妆品卫生规范规定采用高效液相色谱法测定性激素，系统用流动相甲醇-水（60:40）测定雌三醇保留时间为2～3分钟，易被干扰，雌酮和己烯雌酚分离效果不佳，选用乙腈-水（60:40）为流动相七种标准混合测定时分离效果好[1-2]。

1 仪器与试药

Waters 2695-2487高效液相色谱仪，H1850R台式高速冷冻离心机，Sartorius CP225D电子天平。雌酮对照品、雌二醇对照品、雌三醇对照品、己烯雌酚对照品睾丸酮对照品、甲基睾丸酮对照品、黄体酮对照品。甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱参考条件

色谱柱：Phenomenex C18柱，250×4.6 mm，10 μm；检测波长：二极管阵列检测器（雌性激素-204 nm，雄性激素-245 nm），流动相：乙腈：水=60：40，流速：1.0 ml/min；进样量：10 μL。

2.2 雌激素标准溶液

雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200 g，用少量甲醇溶解，移至100 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。

2.3 雄激素标准溶液

睾丸酮、甲基睾丸酮各0.600 g，用少量甲醇溶解，转移至100 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。1 mL此溶液含以上两种雄激素6.00 mg。移取此标准溶液10.0 mL置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。

2.4 孕激素标准溶液

黄体酮0.600 g，用少量甲醇溶解，转移至100 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。1mL此溶液含孕激素6.00 mg。移取此标准溶液10.0 mL置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度。

2.5 加样回收率试验

精密称取样品（检品编号201370115）2.0 g，置具塞刻度管中，共三份，分别精密加入七种性激素对照品0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL，按样品方法处理，精密量取10 μL，注入液相色谱仪。三份样品量均为0（μg）：

2.5.1 黄体酮

（1）对照品加入量7.2288 μg，实测值6.9542 μg，实测加入值6.9542 μg，回收率96.20%；（2）对照品加入量7.2288 μg，实测值7.0365 μg，实测加入值7.0365 μg，回收率97.33%；（3）对照品加入量7.2288 μg，实测值7.2654 μg，实测加入值7.2654 μg，回收率100.50%。平均回收率98.01%。

2.5.2 雌二醇

（1）对照品加入量160.750 μg，实测值159.31 μg，实测加入值159.31 μg，回收率99.10%；（2）对照品加入量160.750 μg，实测值158.61 μg，实测加入值158.61 μg，回收率96.20%；3：对照品加入量160.750 μg，实测值161.23 μg，实测加入值161.23 μg，回收率100.29%。平均回收率98.53%。

2.5.3 雌三醇

（1）对照品加入量160.264 μg，实测值159.326 μg，实测加入值159.326 μg，回收率99.41%；（2）对照品加入量160.264 μg，实测值158.345 μg，实测加入值158.345，回收率98.80%；（3）对照品加入量160.264 μg，实测值160.12 μg，实测加入值160.120 μg，回收率99.91%。平均回收率99.37%。

2.5.4 己烯雌酚

（1）对照品加入量160.28 μg，实测值157.316 μg，实测加入值157.316 μg，回收率98.15%；（2）对照品加入量160.28 μg，实测值158.344 μg，实测加入值158.344 μg，回收率98.79%；（3）对照品加入量160.28 μg，实测值159.140 μg，实测加入值159.140 μg，回收率99.28%。平均回收率98.74%。

2.5.5 雌酮

（1）对照品加入量为160.712 μg，实测值159.316 μg，实测加入值159.316μg，回收率99.13%；（2）对照品加入量160.712 μg，实测值158.344 μg，实测加入值158.344 μg，回收率98.52%；（3）对照品加入量160.712 μg，实测值160.144 μg，实测加入值160.144 μg，回收率99.64%。平均回收率99.09%。

2.5.6 甲基睾丸酮

（1）对照品加入量12.10 μg，实测值11.34 μg，实测加入值为11.34 μg，回收率93.71%；（2）对照品加入量12.10 μg，实测值10.25 μg，实测加入值10.25 μg，回收率84.71%；（3）对照品加入量12.10 μg，实测值10.99 μg，实测加入值10.99μg，回收率90.82%。平均回收率89.75%。

2.5.7 睾丸酮

（1）对照品加入量12.00 μg，实测值11.84 μg，实测加入值11.84 μg，回收率98.66%；2：对照品加入量12.00 μg，实测值10.65 μg，实测加入值10.65 μg，回收率88.75%；3：对照品加入量12.00 μg，实测值为10.69 μg，实测加入值10.69 μg，回收率89.08%。平均回收率92.16%。

2.6 检测限

性激素-雌三醇：检测限为0.025 μg；性激素-雌酮：检测限为0.05 μg；性激素-雌二醇：检测限为0.025 μg；性激素-睾丸酮：检测限为0.0025 μg；性激素-己烯雌酚：检测限为0.0125 μg；性激素-甲基睾丸酮：检测限为0.0025 μg；性激素-黄体酮：检测限为0.003 μg。

2.7 样品测定

分别称取两批样品各2.0 g，置100 mL锥形瓶中，加入饱和氯化钠溶液50 mL，硫酸2 mL，振荡溶解后转移至100 mL分液漏斗。以环己烷30 mL分三次萃取，离心分离。合并环己烷并在水浴上馏除。用甲醇溶解残留物，转移到10 mL具塞比色管中，用甲醇稀释到刻度。混匀后，经0.45 μm滤膜过滤，分别取样10 μL注入高效液相色谱仪，结果均未检出性激素。