雄激素受体在人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌和三阴性乳腺癌中的表达水平与临床指标的关系

李青颖，赵莉莉，李军红，杨海军，贾漫漫，王富强，宋文凭，王新伟，孙献甫，乔江华，申培红

(1.郑州大学附属肿瘤医院 a.病理科;b.防癌办公室;c.肿瘤科;d.乳腺外科，河南 郑州 450001；2.河南大学第一附属医院 乳腺甲状腺外科，河南 开封 475000；3.郑州大学附属洛阳市中心医院 病理科，河南 洛阳 471000；4.安阳肿瘤医院 病理科，河南 安阳 455000)

乳腺癌是多数国家最常被诊断的癌症，也是癌症患者死亡的主要原因[1]。三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)占所有类型乳腺癌的20%～25%，TNBC恶性程度高，侵袭性强，易发生远处转移，无法从内分泌治疗或者分子靶向治疗中获益[2]。需要寻求新的治疗靶标和治疗药物。在15%～25%的浸润性乳腺癌中观察到人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER2)过表达与肿瘤高分级、高细胞增殖率、P53突变及拓扑异构酶Ⅱa扩增等相关，HER2过表达增加了癌细胞的侵袭性和复发的风险，常提示预后不良[3]。针对HER2受体的多种生物制剂改善了患者的预后，但根据现有数据显示单药应用的有效率较低且部分患者存在抗药性，因此需要寻求新的治疗靶标及组合方式。研究发现，雄激素受体(androgen receptor，AR)在乳腺癌中广泛表达，已成为预测乳腺癌预后的新型标志物和治疗靶标之一[4]。本研究旨在分析AR在HER2+乳腺癌和TNBC中的表达水平与临床指标的关系。

1 资料和方法

1.1 一般资料回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院、河南大学第一附属医院、安阳肿瘤医院和郑州大学附属洛阳市中心医院2018年1月至2019年12月收治的经外科手术且经病理分子科确诊的345例HER2+乳腺癌和TNBC。纳入标准：(1)手术前未接受任何治疗(内分泌治疗、新辅助化疗、放疗等)；(2)患者入院后接受“乳腺癌改良根治术+腋窝淋巴结清扫术”治疗；(3)经病理分子科检查确诊为浸润性乳腺癌；(4)不伴有其他重要器官严重病变者，如心肺功能不全等；(5)有完整的病理及临床资料。排除标准：未经病理分子科检查的病例，病理、临床资料不完善的患者及缺乏本研究所需指标的患者。345例患者年龄35～74岁，平均(46.05±3.28)岁，包括HER2+乳腺癌患者267例，TNBC患者78例。

1.2 收集指标应用免疫组化检测AR、Ki67在HER2+乳腺癌和TNBC患者中的表达情况。统计所有患者的肿瘤直径、区域淋巴结转移及远处转移的情况后行病理TNM分期，根据病理TNM分期(2017年AJJCC乳腺癌分期，第八版)[5]，将其分为Ⅰ期，Ⅱ期，Ⅲ期及Ⅳ期。分析AR在HER2+乳腺癌和TNBC患者中的表达与年龄、脉管内癌栓、组织学分级、肿瘤直径、区域淋巴结转移、Ki67及TNM分期的关系。

1.3 检测方法

1.3.1免疫组化染色 使用100 g·L-1中性甲醛固定24 h，采用streptavidin-peroxidase(SP)免疫组织化学法进行染色。采用常规石蜡包埋切片4 μm后脱蜡水化，使用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，将玻片置入枸橼酸抗原修复液中进行热抗原修复，然后将玻片浸入体积分数为3%的过氧化氢中，室温孵育一抗及二抗，接着滴加二氨基联苯胺(DAB)显色液，采用苏木精复染，然后将玻片依次置入体积分数为70%、80%、95%、100%的酒精中进行水化盐酸酒精酸化，最后行中性树胶封片。每次试验均设有阳性对照，即已知的乳腺癌组织切片，而以PBS代替一抗作为阴性对照。所有的抗体[雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)、HER2、AR、P53、Ki67]及工作液均购自福州迈新生物公司。

1.3.2结果判断标准 由医院病理分子科2名具有高级职称的医生独立双盲观察免疫组织化学染色的切片，对每张组织切片随机选取5个高倍镜(×400)视野并观察细胞的染色强度。乳腺癌肿瘤组织中AR、ER、PR和Ki67均表达于细胞核，当细胞核中出现阳性着色(细胞核内呈棕黄色)且着色细胞≥10%即AR为阳性，反之则为阴性；当细胞核中出现阳性着色(细胞核内呈棕黄色)且着色细胞≥1%即ER和PR为阳性，当细胞核中出现阳性着色(细胞核内呈棕黄色)且着色细胞<1%即ER和PR为阴性；当细胞核中出现阳性着色(细胞核内呈棕黄色)且着色细胞≥20%即Ki67为高表达属于阳性，阳性细胞数<20%为低表达属于阴性。对于HER2的判定，阳性即在肿瘤区域内观察到>10%的侵袭性肿瘤细胞膜均一、完整、强染色，反之则为阴性。

1.4 统计学方法采用SPSS 24.0统计软件处理数据。定性资料以率(%)表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AR与临床病理参数的关系HER2+乳腺癌患者AR阳性表达率与组织学分级、区域淋巴结转移及Ki67表达水平有关(均P<0.05)。HER2+乳腺癌患者AR阳性表达率与年龄、脉管内癌栓、肿瘤直径及TNM分期无关(均P>0.05)。TNBC患者AR阳性表达率与年龄和Ki67表达水平有关(均P<0.05)。TNBC患者AR阳性表达率与脉管内癌栓、组织学分级、肿瘤直径、区域淋巴结转移及TNM分期无关(均P>0.05)。见表1。

表1 AR在HER2+乳腺癌和TNBC中的表达与临床病理参数的关系

注：AR—雄激素受体；HER2—人表皮生长因子受体2；TNBC—三阴性乳腺癌。

2.2 AR在HER2+乳腺癌和TNBC中的表达HER2+乳腺癌的AR表达率为76.78%(205/267)，AR在TNBC中的表达率为39.74%(31/78)。HER2+乳腺癌的AR表达率高于TNBC者，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

AR在60%～80%的乳腺癌中广泛表达，逐渐成为预测乳腺癌患者预后的新型标志物和潜在的治疗靶标[6]。AR与ER、PR、糖皮质激素受体及盐皮质激素受体同属类固醇激素受体超家族，被认为是激素受体调节转录因子。AR与青春期第一特征和第二特征、性欲、肌肉力量水平以及成年人的生育能力等相关，并且参与前列腺癌和乳腺癌的发生[7]。AR基因位于1个由180 kb基因编码的919个氨基酸的染色体长臂Xq11-12上，包含8个外显子并且该受体具有3个功能结构域：外显子1编码氨基末端域(NTD)，外显子2和3编码DNA结合域(DBD)，外显子4编码铰链区，连接DBD与配体结合结构域(LBD)，余外显子编码LBD。AR是信号通路的关键组成部分，作为调节基因表达的转录因子发挥关键作用，可控制许多生理和病理过程的特定基因表达[7]。雄激素进入细胞质后与AR结合导致热激蛋白解离，激活的AR二聚体随后移位至细胞核，与靶基因的启动子和增强子区域中的雄激素响应元件结合导致DNA转录的上调或下调。根据组织类型的不同致使细胞分裂、分化、凋亡、增殖和血管生成[8]。

既往研究显示，AR在HER2+乳腺癌中的表达率约为76.7%[9]，AR在TNBC中的表达率为12%～60%[10]。本研究结果显示，HER2+乳腺癌患者的AR表达率为76.78%，AR在TNBC中的表达率为39.74%，HER2+乳腺癌的AR表达率高于TNBC者。这与上述研究结果[9-10]相符。在本研究中，HER2+乳腺癌患者AR阳性表达率与组织学分级、区域淋巴结转移及Ki67表达水平有关。AR阳性表达率与组织学分级呈负相关，即组织学分级越高，AR阳性表达率越低，这与张静等[11]研究结果一致。在本研究中，区域淋巴结无转移者AR阳性表达率高于淋巴结转移者，这提示AR阳性表达情况可能和预后相关。本研究发现HER2+乳腺癌患者AR阳性表达率与Ki67表达水平有关，这与其他研究结果[12]类似。本研究中TNBC患者AR阳性表达率与年龄有关，年龄越大AR阳性表达率越高，这与贾秀鹏等[13]研究结果一致。本研究结果表明，TNBC患者AR阳性表达率与Ki-67表达水平有关。这预示AR阳性表达的乳腺癌患者的肿瘤细胞增殖活性相对降低，提示可能有较好的预后，与Qi等[14]研究观点一致，但与Gerratana等[15]研究结果相反。Gerratana等[15]研究发现，AR阳性表达情况与较高的Ki67指数相关。总之，多数HER2+乳腺癌和TNBC患者表达AR。

HER2+/ER-/AR+乳腺癌MDA-MB-453细胞基因表达谱的整体AR染色质结合图谱与ER+乳腺癌中的ER高度重叠。这提示AR在驱动细胞增殖中可能承担了与ER相似的致癌作用，AR信号通路具有增殖作用[16]。AR拮抗剂可有效减少细胞增殖。HER2信号传导是HER2+乳腺癌患者主要的致癌驱动因素。目前临床研究正在积极探索AR拮抗剂与抗HER2治疗联合使用是否具有更好的疗效。TNBC分子亚型中的管腔雄激素受体亚型(LAR)以AR信号转导为特征，对AR拮抗剂具有独特的敏感性，AR拮抗剂的使用似乎是治疗此类疾病的合理选择，加上AR的激活导致AR介导的促凋亡基因和抗凋亡基因的转录调节进而降低了对LAR亚型的化疗功效，因此AR拮抗剂与化疗联合使用似乎也是有效的方案[17]。Gucalp等[18]探讨了比卡鲁胺在AR阳性和ER/PgR阴性的转移性乳腺癌中的作用，这是第1个有关抗雄激素治疗晚期乳腺癌的临床试验，最终结果确定了AR作为靶标的潜力效应。Bonnefoi等[19]和Traina等[20]研究也观察到AR阳性的TNBC患者从抗雄激素治疗中获益。

综上所述，HER2+乳腺癌患者AR阳性表达率与组织学分级、区域淋巴结转移及Ki67表达水平有关，TNBC患者AR阳性表达率与年龄和Ki67表达水平有关。HER2+乳腺癌和TNBC的AR阳性表达率均较高，AR可能成为HER2+乳腺癌和TNBC的新型治疗靶标。