富血小板纤维蛋白(PRF)促进犬脱位再植牙牙周膜性愈合

王得利，林洋洋，西玉立，王海艳，林 娜，徐 颖，石 屹

(1.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011；2.牡丹江红旗医院，黑龙江 牡丹江 157011)

当受到外力作用的影响，牙齿从牙槽当中完全脱出，牙周膜和牙髓都被损伤，这也被称作是完全性牙脱位。这种情况比较常见，受到多种因素影响，最终的预后效果不佳[1]，是临床上研究的比较多的内容。而牙齿脱位再植手术则是治疗这一疾病的主要方式，牙根表面细胞活性的情况则是会影响到该疾病的治疗效果[2]。富血小板纤维蛋白未添加任何生物制剂，也是从自体血当中提取，过程简单，成骨能力比较强，避免在伦理道德上导致的争议以及交叉感染带来的风险等，现在这种方法已经在研究当中有所开展了。而本次所开展的也是关于犬牙脱位再植牙牙周膜性愈合当中采用富血小板纤维蛋白(PRF)的试验，内容为：

1 资料和方法

1.1 动物和分组结果

需要纳入年龄为1-2岁的成年杂种犬，性别不限。实验牙位选择上下颌的切牙。因为前牙牙槽之间的间隔比较薄弱，为了避免拔牙窝彼此之间出现交通情况，对植入脱出牙效果产生影响，采用间隔选取的方式，如图1所示。分别从实验犬的上颌和下颌各选择3颗牙齿，每只犬选择6颗牙齿，10只犬，共纳入研究的犬牙有60颗。将这些犬脱出牙进行随机分组，分为10组。

实验牙位的选取

小组划分情况，以犬牙体外放置时间为标准，第一组不加移植物，脱位后立刻再植；第2-4组体外放置时间为0.5h，第二组不添加，第三组添加PRP，第4组添加PRF；第5组到第7组放置1h，第五组不添加，第六组和第七组分别添加PRP和PRF，第八组到第十组放置时间为2h，第八组不添加，第九组和第十组分别添加PRP和PRF。

1.2 方法

(1)犬脱位牙模型制备：选择使用硅橡胶在实验犬的上下颌前牙区采用印模的方式来制取。在上下颌的前牙区，借助于钛链行唇弓的方式来制备，模型制备好之后备用。

(2)制备犬PRP/PRF的方法：以400 g/min的速度离心10 min，制备PRF凝胶，采用实验二筛选的方法制备PRP。

(3)脱位牙再植及固定：按照分组分别复合PRP或者PRF再植。采用浓度为35%的磷酸来酸蚀14-24，34-44的牙唇面，涂布进口粘结剂。对于松牙可以采用预成型钛链和流动树脂结合的方式来进行固定。

(4)组织学检测：将脱牙再植入之后，到八周时需要采用重度麻醉的方式把犬给处死，对于犬的牙龈、牙齿以及牙槽骨等进行截取，可以采用多聚甲醛来完成内固定。组织块需要采用常规的石蜡包埋方式，每隔500μm沿着牙体长轴进行专门的切片，切片的厚度为5μm，采用HE染色的方式进行染色。

1.3 统计学分析

借助于奥林巴斯BX50的方式来观察组织学检查的结果，还需要采用DP25系统完成相关的拍照工作。得到的拍摄照片，需要采用PS来完成制图，得到全景图。试验当中得到的数据使用SPSS21.0统计学软件完成数据分析，不同组别之间的对比采用Kruskal-Wallis H非参数秩和检验，组间比较采用t值进行检验，最终以检验水准α=0.05，以P<0.05为有显著性差异。

2 结果

表1为10组犬的脱位再植牙牙周膜性愈合结果，如下所示：

表1 10组犬脱位再植牙周膜性愈合情况

从表格当中的数据可以了解到每组的一些基本情况：

第1、2小组的牙周膜结构正常。在第一小组当中，观察位点未看到炎性吸收或炎性改变情况，牙周膜表现都很正常。第二组的正常牙周膜结构和第一组相比明显更少，且差异显著。在第二组的样本当中出现炎性反应，具体表现为出现了较深的吸收陷窝，纤维结构消失。

第3组和4组未发生炎性改变或吸收，差异无统计学意义。这两组的牙周膜样结构胶原纤维都比较致密，方向性很明显。和第二组相比比较高，都可以看到骨质沉积现象。

第4组和第7组牙周膜样结构的方向性明显，和第一组相比无差异。第五组的正常牙周膜和第一组，第三组和第四组之间结果比较，明显更低，差异比较明显。第五组的牙周膜结构胶原纤维排列的比较松散。第六组和第七组未出现炎性吸收和炎性改变情况，没有出现和牙根表面垂直的sharpy’s结构。

第八组和第五组相比，其炎症性吸收以及炎性改变均无明显差异。而且第八组的牙周膜样结构排列比较松散，方向也没有规律。

第9组和第10组的表面吸收情况差异不大，无统计学意义，主要是表面吸收和修复性的。

3 讨论

牙外伤是脱位牙出现的主要原因，一般需要在某种特定的介质当中进行保存，比如HBSS平衡液和生理盐水等，以确保牙周膜组织活性得到保障[3]。如果脱位牙保存的不合适或者没有及时就诊，便会导致牙周膜的组织受到严重的破坏，最终植入的效果也会受到不利影响[4]。在已有的研究文献当中已经得到了证实，认为把脱位牙在5分钟之内进行再植，牙周愈合的效果较好。但是如果植入时间是半小时以后，植入的效果会相对较差。

在PRP中所包含的一些因子利于组织再生和恢复，一旦激活之后，在短时间之内，生长因子便会大量释放，对于细胞和周围的组织会产生效应，大量流失生长因子，牛凝血酶通常情况下会是其激活剂，很容易让机体出现免疫排斥[5-6]。而富血小板纤维蛋白(PRF)出现在2000年，仍然保留着PRP作为血小板浓缩制品所具备的一些优点，属于富血小板衍生出来的相关物质。其具备的优点有不需要添加任何的生物制剂，都是完全来自于自体血，制备的过程很简单，成骨的能力也很强，避免出现交叉感染以及免疫排斥的情况。在已有的相关研究当中，结果证实了PRF的结构为膜状，而且十分坚硬，制备的整个过程也很简便，以较快的速度制备且安全性较高。其生长因子并不是短时间大量释放，而是缓慢释放，适用性比较强。

在本次研究当中，从结果中可以看出，在第一组当中观察到的不少位点出现牙周膜性愈合的情况，其主要原因是因为它们和牙体脱离的时间比较短，牙根组织以及相关细胞并没有出现很显著的损失，代谢也处于相对正常的水平。把这些脱位的牙齿植入之后，会出现很少的病理吸收，最终的治疗效果也是十分理想的。但同时结果也发现在第一组中也出现了表面吸收这种情况，原因可能是牙根表面受损，致使此种情况的出现。在没有添加植入组的脱位牙，放置了0.5小时或者1小时之后，牙周膜性愈合的情况与第一组相比更低。另外，PRF以及PRP会对归巢的肝细胞分化和增殖起到促进作用，参与到牙周膜结构的修复当中。研究显示，虽然PRP和PRF都可以让患者的牙周膜性愈合效果得到显著改善，但是PRF的整体效果更优一些。另外也发现了，当牙齿脱位2个小时之后，即便是使用了PRF，最终的愈合也达不到理想的效果，所以必须要把握好再植牙的时间。

综上所述，富血小板纤维蛋白对于脱位再植牙的牙周膜性愈合效果更明显，当脱位时间超过了2h之后，牙周膜性愈合即便使用PRF和PRP也很难愈合，实验结果提示应当选择合适的植牙时间。