miR-138、miR-338在阿尔茨海默病中的表达及诊断价值

杨江 ，朱凯 ，段瑞娟 ，叶成伟

（1.金华市人民医院，浙江 金华 321000；2.金华市婺城区罗店镇中心卫生院，浙江 金华 321000）

阿尔茨海默病主要临床表现为认知功能减退、进行性记忆力下降、语言障碍、行为及人格改变等[1]。miRNA在神经功能障碍类疾病的发生及发展中发挥着重要作用[2]，其中，微小 RNA-138（miR-138）可通过促进tau磷酸化进而参与阿尔茨海默病的发展[3]。 Qian 等[4]研究发现，微小 RNA-338-5p（miR-338-5p）在阿尔茨海默病患者中表达水平下调，且与病情发展密切相关。基于此，本研究通过测定阿尔茨海默病患者血清miR-138和miR-338表达情况，并与健康人群进行比较，分析其诊断价值。以期为阿尔茨海默病的临床治疗提供有价值的参考依据。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年9月-2019年12月在金华市人民医院神经内科确诊并接受治疗的阿尔茨海默病71例为阿尔茨海默病组，同期选取在本院行常规检查的体检健康者65例为对照组。阿尔茨海默病组纳入标准：（1）符合阿尔茨海默病的相关诊断标准[5]，即符合痴呆标准，且痴呆隐匿起病、缓慢进行性恶化，并除外其他因素导致的痴呆；（2）患者及家属选择在研究期间本院接受治疗；（3）临床资料完整。排除患有严重肾、心脏功能不全或患有恶性肿瘤等严重疾病者。两组性别、年龄、体质量指数（BMI）比较差异均无统计学意义（P>0.05），详见表1。本研究经本院伦理委员会批准通过，所有样品采集均取得受试者及家属知情并签署同意书。

表1 两组一般资料比较

1.2 方法 （1）仪器及试剂盒。离心机 （型号：KH30RF）购自湖南凯达科学仪器有限公司；实时荧光定量PCR仪（型号：V115896）购自美国Applied Biosystems公司；总RNA提取试剂盒（批号：20310）购自北京甘棠飞华生物科技有限公司；逆转录试剂盒 （批号：K1621）购自杭州主诺生物技术有限公司；实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）试剂盒（批号：WE0129-DBI）购自北京百奥莱博科技有限公司；miR-138和miR-338以及内参U6引物由北京宝日医生物技术有限公司合成；本研究中其他化学药品均购自江苏汉诺斯化学品有限公司。（2）样本检测。于清晨抽取所有受试者空腹状况下的静脉血5mL，离心分层后收集上层血清，置于-70℃冰箱中保存待测。采用qRT-PCR法检测受试者血清miR-138和miR-338的表达水平。用总RNA提取试剂盒并严格按照说明书顺序提取总RNA，然后经逆转录得到cDNA。以逆转录合成的cDNA为模板进行qRT-PCR检测。PCR反应条件为：94℃，2 分钟；94℃，30 秒；60℃，30 秒；74℃，35秒，共 40个循环。血清 miR-138、miR-338及内参U6的正反向引物序列见表2。采用2-△△Ct法计算血清miR-138和miR-338相对表达量。

表2 引物序列

1.3 观察指标 （1）miR-138、miR-338表达水平。比较阿尔兹海默病组及对照组的miR-138、miR-338表达水平。（2）诊断价值。分析miR-138、miR-338以及两者串联联合诊断对阿尔兹海默病的诊断价值。

1.4 统计学处理 利用SPSS 22.0进行统计学分析，计量资料以（±s）表示，行 t检验。 用 ROC 曲线评估血清miR-138和miR-338水平对阿尔茨海默病的诊断价值。

2 结果

2.1 miR-138、miR-338的表达 阿尔茨海默病组血清miR-138表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；血清miR-338表达水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表3。

表3 两组血清 miR-138、miR-338表达水平（±s）

表3 两组血清 miR-138、miR-338表达水平（±s）

组别 n阿尔茨海默病组 7 1对照组 6 5 m i R-1 3 8 m i R-3 3 8 1.3 3±0.5 2* 0.6 4±0.2 1*0.9 1±0.4 6 1.1 6±0.5 3

2.2 诊断价值分析ROC结果显示，与单独检测血清miR-138、miR-338表达水平相比，血清miR-138、miR-338串联联合诊断阿尔茨海默病的AUC为0.888诊断价值最高，此时对应灵敏度和特异性分别为87.3%、76.9%。详见表4、图1。

表4 血清miR-138、miR-338表达水平对阿尔茨海默病的诊断价值

图1 血清miR-138、miR-338对阿尔茨海默病的诊断价值

3 讨论

阿尔茨海默病是一种认知和行为功能障碍的疾病，主要由tau蛋白过度磷酸化和β-淀粉样蛋白异常沉积造成神经元纤维缠结、老年斑形成以及神经元缺失等造成[6]。

miRNA为真核生物中广泛存在的一类非编码单链小分子RNA，它能以特定方式调节基因的表达，参与机体多种生物学过程[7-8]。随着对基因组研究的深入，人们发现miRNA在多种疾病，尤其是癌症及神经功能障碍性疾病的发生及发展中发挥重要作用[9]。有研究发现，miRNA在阿尔茨海默病的发生及发展中起重要作用[10]。miR-138和miR-338是人体内广泛存在的非编码小RNA[11-12]，郭金鼎等[13]研究结果发现miR-138可能参与健侧颈7移位术后脑功能重塑的调节过程，进而调控神经修复术的效果。Nguyen等[14]研究发现，过表达miR-338可诱导人间充质样干细胞分化为少突胶质细胞，进而用于神经退行性疾病细胞治疗的来源。本研究显示，阿尔茨海默病组血清miR-138表达水平高于对照组，miR-338 表达水平显著低于对照组（P＜0.05），可能与脑功能重塑及少突胶质细胞分化功能有关。分析诊断价值可见，血清miR-138和miR-338诊断阿尔茨海默病的AUC分别为0.782、0.850，提示血清miR-138和miR-338可作为评估阿尔茨海默病发生的指标。进一步分析发现，两者联合检测阿尔茨海默病的AUC为0.888，提示两者串联联合诊断价值高于单独诊断。

阿尔兹海默病的诊断是一种排他性的诊断，须结合患者的病史和临床症状。生物学标志物miR-138及miR-338水平的检测可以为阿尔兹海默病诊断提供实验室指标方面的支持，两者联合检测其灵敏度和特异度均较高，有助疾病早期确诊。