一种闽产青红酒粗多糖和总黄酮的测定

周美兰 许 景 阚永军 赵 立 胡 娟,3*

1.福建省中医药研究院，福建 福州 350003；2. 福建省宏盛闽侯酒业有限公司，福建 福州 350108；3. 福建中医药大学附属第二人民医院，福建 福州 350003

青红酒，是以福建独有的古田红曲做为糖化发酵剂，选用上好的糯米，配以秘制药白曲，精酿而成，色呈琥珀，口感柔顺绵长。青红酒，被誉为闽派黄酒的正宗，含有丰富的葡萄糖、糊精、氨基酸、维生素和多种酯类物组成；酒精度为13%左右，刺激性小，适量常饮，有促进食欲、舒筋活络、生津补血、调养身体、解除疲乏的功效，是一种老少皆宜的饮用酒。

立足于福建红曲和道地药材综合利用，以中华老字号企业的百年酿造经验，采用闭合式生产模式。以黄精等药食同源中药为原料，选用道地多花黄精，有机圆糯米及古田红曲、秘制药白曲，由国家级高级酿酒师、中医药专家组成的团队精心配方研制。在保留传统酿造工艺基础上，优化本产品工艺，萃取原料之精华发酵而成。酒色橙黄清亮，酒味醇厚，香气雅致，口感柔和甘甜，酒与黄精完美融合，有补气养阴、健脾、润肺，益肾之功效。产品上市获得消费者赞誉。青红酒样品图片见图1。

糖类是黄精化学组成中含量最多的重要活性部分，黄精多糖含量最大，约占11.74%；黄酮具有较高的药用价值，并且为黄精属植物的活性成分之一[1]。多糖是一类非特异性免疫增强剂，而且有降血糖、降血脂、降血清过氧化脂质和降低胆固醇浓度、抗血凝等作用[2-4]；黄酮具有消除疲劳、降血脂、降血糖、保护血管、防动脉粥样硬化、扩张毛细血管、抗衰老和抗菌作用、活化大脑细胞和其他脏器细胞的功能等多种功效[5]。

本文采用醇沉提取酒中多糖、以D-葡萄糖为对照品，苯酚一硫酸显色，490 nm波长处测定黄精青红酒中粗多糖含量[6]；采用聚酰胺层析法提取酒中黄酮[7]，以芦丁为对照品，360nm波长下测定吸光度，计算总黄酮含量。为产品配方及工艺的质量控制奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公司，型号：UV-3200)；水浴锅(上海精宏实验设备有限公司，型号：DK420S)；离心机(湖南液仪实验室YI仪器开发有限公司，型号：L-530低速离心机)；电子天平(梅特勒-特利多，型号：AE240S)

1.2 材料与试剂 无水乙醇(西陇化工有限公司，批号16010902)；苯酚(国药，20150716)；D-无水葡萄糖(成都曼思特生物科技有限公司，MUST-11020603)。聚酰胺粉(国药集团化学试剂有限公司，批号20150924，规格：100-200目500 g)；芦丁(成都曼思特生物科技有限公司,规格：对照品 A0103-20 mg)；乙醇(西陇化工有限公司，批号16010902，规格：AR500 mL)；甲醇(国药集团化学试剂有限公司，批号20150824，规格：AR5 L)；苯(西陇化工有限公司，批号1601131，规格：AR500 mL)。

供试品：1号黄精青红酒，将黄精浸泡于青红酒中；2号黄精青红酒，将黄精与红曲米一起投料发酵。同一工艺，同一批次取3个样品。

2 方法与结果

2.1 供试品中粗多糖测定

2.1.1 试剂 配制取无水葡萄糖对照品2.57 mg于25 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，得浓度为0.103 mg/mL的对照品溶液。取苯酚2.50 g加50 ml纯水溶解即得5%的苯酚溶液。

2.1.2 吸收曲线的绘制 对浓度10 μg/mL葡萄糖对照品溶液，在200-800 nm波长范围进行全波长扫描。以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，绘制出曲线，此曲线即为葡萄糖的吸收光谱曲线。葡萄糖最大吸收波长为490 nm，如图2所示。

2.1.3 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0.3 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，分别置15 mL具塞试管中，各加水补至2.0 mL，精密加入5%苯酚溶液l.0 mL，摇匀，再精密加浓硫酸5.0 mL，摇匀，置沸水浴中加热2 min，取出，流水冷却到室温，以相应试剂为空白，采用紫外-可见分光光度法，在490 nm的波长处测定吸光度，结果见表1。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=53.32x-0.021，r=0.9984。

表1 无水葡萄糖标准溶液浓度和吸光度的关系

2.1.4 黄精青红酒中粗多糖测定 取10 mL受试样品加无水乙醇35 ml，置于4℃冰箱中静置4 h，离心(4000r/ 10min)，倒去上清液，收集沉淀，加纯水5 mL溶解，加无水乙醇20 mL，反复溶解沉淀3次。收集沉淀，将沉淀用水溶于200 mL容量瓶中，摇匀，即得供试溶液。

精密量取黄精青红酒供试溶液0.5 mL，加水补至2 mL，置于具塞试管中，按标准曲线的制备项下的方法，自“2.1.1项下，精密加入5%苯酚试液1.0 mL”起，依照测定吸光度，以葡萄糖标准曲线计算试样中总多糖的含量。结果见表2。

表2 黄精青红酒中粗多糖测定结果

2.2 供试品中总黄酮测定

2.2.1 对照品溶液配制 称取2.52 mg芦丁，加甲醇溶解并定容至50 mL，即得50.4 μg/mL的芦丁标准溶液。

2.2.2 吸收曲线的绘制 对浓度10 μg/mL芦丁对照品溶液，在200～800 nm波长范围进行全波长扫描。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，绘制出曲线，此曲线即为芦丁的吸收光谱曲线。芦丁在紫外光区最大吸收波长为360 nm，如图3所示。

2.2.3 标准曲线的绘制 吸取0、1.5、2.0、3.0、4.0、4.5 mL芦丁标准溶液于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，于360 nm测定吸光度值,见表3。以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为：y= 0.0328x+ 0.0171，r=0.9983。

2.2.4 黄精青红酒中总黄酮测定量取试样50 mL各3份，置于蒸发皿中70℃浓缩至约10 mL，转移至25 mL容量瓶，加无水乙醇定容至刻度，摇匀后，超声提取20 min，离心(4000 r/min,10 min)，吸取上清液2.0 mL，于蒸发皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱(1 cm×25 cm)。先用20 mL苯洗，弃去苯液，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25 mL。取上述溶液离心，于波长360 nm测定吸光度值。依照测定吸光度，以芦丁标准曲线计算试样中总黄酮的含量。结果见表4。

表3 芦丁标准溶液浓度和吸光度的关系

表4 黄精青红酒中总黄酮测定结果

3 讨论

由表3可以看出，两种不同工艺制备的黄精青红酒，1号供试品浸泡黄精酒每100 mL粗多糖平均含量为14.89 mg，2号供试品发酵黄精酒每100 mL粗多糖平均含量为76.28 mg，是1号样品的5.1倍；由表4可以看出，1号供试品浸泡黄精酒每100 mL总黄酮平均含量为16.28 mg，2号供试品发酵黄精酒每100 mL总黄酮平均含量为72.16 mg，是1号样品的4.4倍。

发酵黄精酒中的多糖和黄酮均高于浸泡黄精酒，同时发酵黄精酒的口感和色泽均优于浸泡黄精酒。因此无论是从功效成分，还是从外观和味道，发酵黄精酒工艺均优于浸泡黄精酒工艺。

4 结论

本文采用醇沉法提取多糖简单易行，聚酰胺柱层析法已广泛用于黄酮类成分分离纯化，以提高提取物黄酮成分的含量；两种提取分离方法的应用，可避免酒干扰色对测定的影响。通过测定青红酒中粗多糖和总黄酮等功效成分含量，有利于对产品配方及工艺进行质量控制。