海南部分城区菜市场淡水鱼及禽类感染菲律宾毛细线虫的调查

王彬瑾，李制一，张凝，李斯，林桂芬，周利民，范志刚

1.海南医学院基础医学与生命科学学院病原生物学教研室，海南 海口 571199；

2.海南职业技术学院，海南 海口 570100；

3.海南医学院科学实验中心，海南 海口 571199

菲律宾毛细线虫(Capillaria philippinensis)又称肠毛细线虫，可感染人体导致肠毛细线虫病(intestinal capillariasis)[1]。2010年，海南省儋州市发现一例感染菲律宾毛细线虫病例[2]。2015 年4 月至2016 年9 月海口市区菜市场淡水鱼肠的调查未发现菲律宾毛细线虫[3-5]。为了解海南其他市县的相关情况，2016 年11～12 月本课题组结合本省主要河流南渡江、昌化江、万泉河等的流经地区和出海口情况选取采集点，对琼海市、陵水黎族自治县(陵水县)、乐东黎族自治县(乐东县)城区菜市场的淡水鱼及活禽肠道内感染菲律宾毛细线虫情况进行了调查。

1 材料与方法

1.1 样本采集 从海南省琼海市、陵水县、乐东县城区菜市场采集鳙鱼、罗非鱼和鸭类样本。鳙鱼、罗非鱼、鸭类的市面售卖价分别为25～30元/尾、4～10元/尾、60～70 元/只。新鲜样本进行相应处理，淡水鱼采集其鱼肠(含肠道内容物)，禽类采集其粪便。采集的样本分别装于干净封口袋，标明种类、编号，放置冰盒中带回实验室当天检查。

1.2 检查方法

1.2.1 鱼肠及肠道内容物检查 采集的鱼肠样本用镊子反复刮取2～3次得到分离的肠道内容物与鱼肠，分离出的肠道内容物、鱼肠按照编号分别置于相应的培养皿、烧杯中。适量生理盐水加于装有肠道内容物的培养皿中，混合均匀，直接涂片并记为“粪便”组；50 目钢筛过滤含有生理盐水的肠道内容物混合液，滤液2 000 r/min离心10 min，取离心沉淀物进行生理盐水涂片，记为“粪便离心”组。烧杯中的鱼肠用外科手术剪纵向剖开，观察并记录剖开的肠壁有无病变或穿孔，刮取鱼肠肠壁黏膜及附着物，用适量生理盐水将刮取的物质与鱼肠一同浸泡于相应编号烧杯中放置3 h，浸泡液2 000 r/min离心10 min，取离心沉淀物进行生理盐水涂片镜检，记为“肠壁”组。鱼类的不同涂片组别是指“粪便”组、“粪便离心”组和“肠壁”组。

1.2.2 活禽粪便检查 操作步骤与1.2.1 鱼肠及肠道内容物检查的“粪便”组和“粪便离心”组操作相同，故不重复说明。鸭的不同涂片组别为“粪便”组和“粪便离心”组。

1.3 统计学方法 应用Excel 整理数据并进行χ2检验，对比不同地区菜市场间淡水鱼及活禽感染寄生虫的概率，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基本情况 琼海、陵水、乐东城区菜市场共采集淡水鱼鱼肠(含肠道内容物)177 份(包含野生罗非鱼23尾：琼海市大路镇文岭水库收集14尾，陵水县收集9尾)，活禽粪便82份，共计259份，未检出菲律宾毛细线虫，但发现其他寄生虫(寄生虫)感染。

2.2 淡水鱼及禽类肠道内寄生虫的检出情况 在对样品进行检查的过程中，寄生虫的检出率为10.39%。其中鳙鱼、鸭、罗非鱼肠道中寄生虫的检出率由高到低分别为21.1%、10.4%、5.94%，差异有统计学意义(χ2=9.723，P＜0.05)。

2.2.1 不同涂片组别的检出情况 同物种不同涂片组别中，鳙鱼的粪便组、粪便离心组和肠壁组寄生虫检出率分别为3.95%、7.89%和9.21%，差异无统计学意义(χ2=1.748，P＞0.05)；罗非鱼的粪便组、粪便离心组和肠壁组寄生虫检出率分别为2.97%、2.97%和0，差异无统计学意义(χ2=3.061，P＞0.05)；鸭的粪便组和粪便离心组寄生虫检出率分别为2.60%和7.79%，差异无统计学意义(χ2=2.110，P＞0.05)。同一涂片组别不同物种中，不同物种的粪便组之间寄生虫检出率差异无统计学意义(χ2=0.246，P＞0.05)，不同物种的粪便离心组之间寄生虫检出率差异无统计学意义(χ2=2.600，P＞0.05)，鱼肠组不同物种之间寄生虫检出率差异有统计学意义(χ2=9.686，P＜0.05)，见表1。

2.2.2 不同地区的检出情况 同地区不同物种中，琼海市鳙鱼、罗非鱼和鸭肠道中寄生虫检出率分别为16.2%、1.52%和0，差异有统计学意义(χ2=8.526，P＜0.05)；陵水县鳙鱼、罗非鱼和鸭肠道中寄生虫检出率分别为22.2%、4.00%和29.2%，差异无统计学意义(χ2=5.586，P＞0.05)；乐东县鳙鱼、罗非鱼和鸭肠道中寄生虫检出率分别为28.6%、40.0%和2.00%，差异有统计学意义(χ2=15.682，P＜0.05)。同物种不同地区中，鳙鱼不同地区之间寄生虫检出率差异无统计学意义(χ2=1.250，P＞0.05)，罗非鱼不同地区之间寄生虫检出率差异有统计学意义(χ2=23.242，P＜0.05)，鸭不同地区之间寄生虫检出率差异有统计学意义(χ2=13.217，P＜0.05)，见表2。

表1 不同涂片组别不同物种肠道内寄生虫的检出情况

表2 不同地区不同物种中寄生虫的检出情况

3 讨论

菲律宾毛细线虫主要流行于东南亚地区，可以影响肠道吸收功能，造成液体、蛋白质和电解质流失，导致低蛋白血症和低钾血症等[1]。2010年海南省报道第一例菲律宾毛细线虫病例[2]。2015 年至2016 年课题组采集海口市区的大量样本展开相应调查，以了解海口市菲律宾毛细线虫的感染情况，结果未发现菲律宾毛细线虫的感染[3-5]。根据海南省各市县分布情况及河流分布特点，本次调查以东线万泉河入海口琼海市、西线昌化江流经地乐东县及两地居中点陵水县作为采集点，以小样本量抽样的方式进行调查。调查结果与李斯等[5]海口市区菜市场淡水鱼菲律宾毛细线虫感染情况的相关报道一致，未发现菲律宾毛细线虫。本课题组2016年9月至2018年10月在海口继续进行大样本量调研也没有发现菲律宾毛细线虫。这可能与调查地点菜市场的淡水鱼主要来自人工养殖鱼塘有关[3]。本调查采集对象主要为菜市场的淡水鱼禽，而2010 年报道的海南儋州菲律宾毛细线虫病病例的起因为患者生食泥鳅[2]。这可能也是调查未检出菲律宾毛细线虫的原因之一。因此，琼海、陵水、乐东城区菜市场淡水鱼及禽类与海口市区菜市场的淡水鱼一样不存在菲律宾毛细线虫感染市民的风险。

本调查结果与王延等[3]、但彩虹等[4]海口市区菜市场菲律宾毛细线虫感染情况调查中检出其他寄生虫的结果相似，发现了其他寄生虫的感染。本调查显示琼海、乐东地区鳙鱼的寄生虫检出率、罗非鱼的寄生虫检出率及鸭的寄生虫检出率之间的差异均具有统计学意义。海南岛有三大主要淡水河流，分别为南渡江、昌化江、万泉河。万泉河的南北支流于琼海市合口咀汇合，昌化江流经乐东县并且为乐东境内两大河流之一。不同流域的内部环境多样复杂，河流中所栖居的生物也不尽相同。这可能是造成其检出率差异的原因之一。本调查还显示鳙鱼的肠壁寄生虫检出率高于罗非鱼的检出率。因此，不同地区居民食用不同淡水鱼禽可能感染寄生虫的风险将有所不同。文献显示，国内不同地区淡水鱼感染寄生虫的概率有所不同，人们生食(或半生食)淡水鱼将存在感染寄生虫的风险[6-9]。近年来人们对食材的口感、新鲜度有了更高追求，在鱼类食材的处理方面，不少当地居民选择将其制成鱼类刺身、鱼生粥等菜肴后食用；而对家禽类食材的常见处理，海南多数家庭偏爱于将其煮至快熟的半生状态后斩件、斩块食用(简称白斩)。这些饮食行为和习惯将增加居民感染寄生虫的风险。因此，当地居民应提高防范意识，将淡水鱼禽煮熟煮透后食用，当地防疫部门也应当做好相应的预防宣传、定期检疫等工作。

为了明确琼海、陵水和乐东是否是菲律宾毛细线虫的自然疫源地，本课题组之后将根据实际情况前往当地水库、河流及湿地等地区对野生淡水鱼、泥鳅、水禽及候鸟等进行调研。