脐血MONO和PMN表面TREM-1及CD64的表达与胎膜早破及新生儿感染的关系

任秋伟，李艳芳，黄雪梅，薛燕

（南阳医学高等专科学校第一附属医院产科，河南 南阳 473000）

早产儿是产科较为常见的情况,目前国内早产儿出生率约为8%，其发生主要是宫内感染，即使存活的早产儿也可能出现脑瘫、言语功能障碍、智力障碍等伤残，严重的会出现脑室周围-脑室内出血以及脑室周围白质软化形成脑损伤,对新生儿生长发育和生活质量产生严重影响[1]。目前认为寻找早期具有特异性诊断指标为胎膜早破和新生儿感染对改善患儿预后具有积极意义,表面髓样细胞触发受体1（TREM-1）属于免疫球蛋白超家族成员，可以放大病原微生物炎症反应,促进炎症因子释放，因此感染早期存在明显的关联性；中性粒细胞表面CD64属于具有同高亲和性受体结合的IgG抗体Fc片段,在人体发生感染后会出现上调，目前对于上述三种细胞因子在胎膜早破和新生儿感染之间的联系临床鲜有报道[2]。本研究分析了脐血单核细胞（MONO）和中性粒细胞（PMN）表面髓样细胞触发受体1（TREM-1）及白细胞分化抗原64（CD 64）的表达与胎膜早破及新生儿感染的关系，以期为临床提供指导和依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2018年12月于我院就诊的足月胎膜早破患者102例（观察组）,其中破膜时间＜24h者 43例，24～36h者 37例，＞36h者22例；围产期发生新生儿感染32例。纳入标准：⑴胎膜早破诊断符合《妇产科学》中的标准，新生儿感染诊断符合《实用新生儿学》中的标准；⑵初产头位单胎妊娠；⑶患者及家属知情同意。排除标准：⑴合并有妊娠期高血压、妊娠期糖尿病等并发症；⑵胎儿有畸形等异常；⑶合并有肝肾功能障碍、恶性肿瘤、免疫系统疾病等基础性疾病。同时选取正常足月分娩产妇102例作为对照组，观察组和对照组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表 1。

表1 观察组和对照组一般资料比较

1.2 实验方法 胎儿分娩后留取脐血3ml，2000rpm离心10min分离血清待检,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定脐血中脐血单核细胞（MONO）和中性粒细胞（PMN）表面髓样细胞触发受体1（TREM-1）及白细胞分化抗原64（CD64）变化，试剂由苏州卡尔文生物科技有限公司提供,按照试剂盒说明书操作。

1.3 统计学处理 采用SPSS19.0软件进行统计分析，计量资料采用（x±s)表示，两组间比较使用t检验,多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验；计数资料比较使用χ2检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 两组脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达比较 观察组脐血MONO表面TREM-1、CD64平均荧光强度，PMN表面TREM-1、CD64平均荧光强度明显高于对照组（P＜0.05）。见表2。

表2 两组脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达比较

2.2 观察组不同破膜时间者脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达比较 随破膜时间延长，脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达明显升高（P＜0.05）。 见表 3。

表3 观察组不同破膜时间者脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达比较

2.3 观察组有无新生儿感染者脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达比较 观察组发生新生儿感染者脐血MONO表面TREM-1、CD64平均荧光强度，PMN表面TREM-1、CD64平均荧光强度明显高于无新生儿感染者（P＜0.05）。见表4。

3 讨论

胎膜早破是临产前出现的胎膜破裂,也是产科最为常见的并发症之一,其发生同生殖道感染关系密切,也是导致围生期产妇和胎儿死亡的重要原因,一旦处理不当会造成早产儿脑损伤或者死亡，严重的影响了家庭和谐[3]。目前研究发现感染时导致胎膜早破的重要原因,尤其是生殖道感染通过病原菌通过阴道或者宫颈传播到胎膜,女性在妊娠期孕激素增多，细胞免疫被抑制，抵抗能力减低，因此在阴道内有助于细菌生长,上皮细胞的糖原累及增多，乳酸形成增加，阴道内的pH值降低，酸性环境会导致病原体生存适宜,减少了细胞表面的负电荷并造成上皮角质细胞糖基被去除,病原体会形成黏附，阴道内的微生态环境被破坏，造成了感染的发生[4,5]。目前胎膜早破胎儿脑损伤的形成机制尚不完全明确,考虑一方面是由于早产儿脑血管的调节功能不完善导致，由于早产儿脑白质动脉发育慢，分支少,因此存在持续性的缺血会导致脑白质弥散性损伤,同时侧脑室周围的血脑屏障连接不紧密会导致脑室周围细胞被细胞因子激活,穿过发育不成熟血脑屏障激活星形细胞与小胶质细胞,诱发脑白质受损与神经元的炎症反应[6]；另一方面炎症反应因子也是影响脑损伤重要的因素,但是具体机制目前尚未研究明确,同时早产儿如果血液循环存在大范围波动会对脑循环产生压迫也是发脑损伤的重要原因[7]。此外在早期生殖道感染发生后局部和循环中具有较高浓度的炎症因子,细胞因子具有细胞信号转导蛋白、参与调节造血、炎症反应和免疫细胞增殖和分化作用,细胞因子可以结合到特定细胞表面受体，诱导细胞内信号机制，造成转录因子表达下调，促进炎症反应或抗炎反应[8]。近年来随着医学的飞速发展越来越多的研究开始关注早期诊断胎膜早破早产儿脑损伤以期为临床提供早期的诊疗依据,传统的羊水细菌培养以及病理检查等方法可以作为可靠依据，但是培养的时间较长，且假阴性病例较多，而且胎膜病例检查则需要产后开始，对于早期诊断意义不大[9]。

表4 观察组有无新生儿感染者脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达比较

本研究分析了脐血单核细胞（MONO）和中性粒细胞（PMN）表面髓样细胞触发受体1（TREM-1）及白细胞分化抗原64（CD64）变化情况，表面髓样细胞触发受体1可以介导人体信号转导并触发增强感染后细胞因子的级联反应,有学者报道在细菌感染发生后TREM-1的诊断敏感性与特异性均高于非感染性疾病，TREM-1激活后造成了人体p44与p42磷酸化反应,传递TREM-1信号并激活核转录因子，造成炎症因子释放增加，其参与了中性粒细胞抗凋亡反应过程,异常调控会导致细胞的数量与功能改变，造成免疫紊乱，最终引发了胎膜的破裂[10]。此外有学者指出了胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎后人体对于细菌产生应答反应,中性粒细胞表面的TREM-1激活，表达上调，而且伴随破膜时间延长母血、脐血及新生儿外周血中性粒细胞TREM-1表达程度均显著升高,因此有学者认为通过调控TREM-1表达能够为炎症反应调节指导临床新的治疗方向提供新的依据[11,12]。CD64是白细胞分化抗原的一种，属于免疫球蛋白超家族成员,在脐血单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞表面存在，一般在中性粒细胞表面呈现低表达状态,一旦感染发生后即表现出过度表达，而且CD64属于具有高亲和力受体结合的IgG抗体片段，CD64是连接细胞免疫与体液免疫的关键因素,在细胞吞噬清除免疫复合物、抗原递呈与释放炎症介质发挥重要作用，尤其在感染早期阶段对于发现感染具有重要价值[13,14]。但是也有学者认为CD64在部分自身免疫性疾病中也呈现高表达状态，因此单独测定CD64进行细菌感染和自身免疫疾病的鉴别上还存在一定争议,因此建议通过联合检测提升早期新生儿感染预判的准确性与可靠性[15]。

本研究显示,观察组脐血MONO表面TREM-1、CD64平均荧光强度，PMN 表面 TREM-1、CD64平均荧光强度明显高于对照组,说明在胎膜早破新生儿中存在TREM-1、CD64高表达状态。随破膜时间延长,脐血MONO和PMN表面TREM-1、CD64的表达明显升高,说明破膜的时间对于TREM-1、CD64会产生影响,破膜时间越长表达强度越高。观察组发生新生儿感染者脐血MONO表面TREM-1、CD64平均荧光强度，PMN 表面 TREM-1、CD64平均荧光强度明显高于无新生儿感染者,说明发生新生儿感染后会造成脐血MONO、PMN表面TREM-1、CD64平均荧光强度表达升高。

综上所述，脐血MONO和PMN表面TREM-1及CD64表达与胎膜早破、破膜时间及新生儿感染有关。