血清PTX3、肺癌组织中LOXL2蛋白表达与NSCLC患者预后的关系

马妮萨

（河南科技大学第一附属医院集中采血室，河南 洛阳 471003）

流行病学研究证实,我国部分地区非小细胞肺癌（NSCLC）的发病率可达284~569/10万人左右[1]。临床上NSCLC的发生，能够导致患者无瘤生存时间和总体生存时间的下降,导致患者短期内病死风险的上升[2]。在揭示NSCLC的病情进展机制的过程中，可以发现细胞生物学相关因子的改变，能够影响到肺泡上皮细胞的异型性,影响到癌细胞的发生和转移过程，进而促进NSCLC的病情进展。正五聚蛋白3（PTX3）是上皮细胞炎症、免疫和肿瘤相关因子，其能够通过影响到炎症性细胞的浸润，加剧氧化应激性反应的激活,进而促进上皮细胞的异常病变，提高恶性肿瘤的发生风险[3]；赖氨酰氧化酶样蛋白2（LOXL2）的表达改变，能够通过影响到金属基质蛋白酶的活性,加剧癌细胞间质成分的分解，进而为癌细胞的浸润和转移等提供基础[4]。部分研究者探讨了PTX3在生殖系统肿瘤或者消化系统肿瘤患者中的表达情况，认为PTX3的表达上升与相关肿瘤的发生有关[5],但缺乏对于PTX3、LO XL2的表达与肺癌患者临床病理特征的关系研究。为了揭示PTX3、LOXL2的表达与NSCLC的病情关系,从而为临床上NSCLC患者的病情评估提供参考,本研究选取我院2013年1月至2014年12月收治的90例NSCLC患者,探讨了PTX3、LO XL2的表达及其与患者病情的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2013年1月至2014年12月收治的90例NSCLC患者为NSCLC组、同期健康体检对象90例为对照组。

NSCLC组，年龄 48~77岁，平均 63.6±8.2岁，男54例、女36例，病理学分化程度：高分化23例、低分化34例、中分化33例；病理学类型：鳞癌29例、腺癌61例；肿瘤病灶大小：≥5cm 27例、<5cm 63例；TNM分期：Ⅰ期25例、Ⅱ期32例、Ⅲ期27例、Ⅳ期6例；发生淋巴结转移48例。对照组，年龄 46~77岁，平均 62.9±10.0岁，男 51例、女39例。2组研究对象的年龄、性别比较，差异无统计学意义，P>0.05。

纳入标准：⑴NSCLC患者的诊断标准参考《外科学》人民卫生出版社第八版中的标准；⑵均为首次检出肺癌的患者，在获取患者肺癌组织、癌旁组织、血清样本前，患者未接受放化疗及免疫治疗；⑶患者年龄≤79岁；⑷本研究获得医学伦理委员会的批准、研究对象的知情同意。

排除标准：⑴转移性肺癌；⑵其他部位恶性肿瘤；⑶风湿类、结缔组织疾病；⑷伴有其他类型疾病。

1.2 免疫组化染色方法及判断标准 采用石蜡进行连续性切片,脱蜡至水后采用H2O2室温下孵育10min，磷酸盐缓冲液冲洗 3 次，每次 3～5min，8%的蛋白粉封闭液（商品名：BSA购自南京博奥生物科技公司），封闭2h，倒去封闭液后加入一抗（兔来源 浓度 1：1000～1500），4℃冰箱过夜，磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3～5min，加入二抗（鼠来源 1：400～500），室温孵育 20～30min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3～5min，加入辣根酶或碱性磷酸酶的标记物，室温孵育10min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，每次3～5min，滴加显色剂（DAB购自南京博奥生物科技公司），复染，脱水，封片。

免疫组化结果判定：LOXL2蛋白的阳性着色表达于细胞核，呈黄色、棕黄色、褐色表达，⑴根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；⑵根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例≤10%为1分、阳性细胞所占比例11%～50%为2分、阳性细胞数51%～75%为3分、阳性细胞数所占比例＞75%为4分，两种积分相乘总分＜3分为阴性、≧3分为阳性。总分＜3分：“-”表达；为 3～5 分，“+”表达。

1.3 ELISA检测 采集患者的静脉血3ml,加入PT X3单抗,标本和标准品中的PTX3会与单抗结合,PBS液体洗涤5min。按照1：500的比例加入羊标志的一抗 5ml，4℃放置过夜，PBS缓冲液洗涤 3次，每次 5min，加入鼠来源的二抗（1：1000）2ml，室温放置2h，PBS液体洗涤5min。加入显色底物,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450nm处测OD值。

1.4 统计学方法 符合正态分布的计量数据表述采用（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料采用χ2检验；多因素分析采用Cox比例风险回归模型；P＜0.05为差异有统计学意义，统计软件采用SPSS16.0版本。

2 结果

2.1 NSCLC组织中LOXL2蛋白表达比较 NSCLC癌组织中的LOXL2蛋白阳性表达率76.67%显著的高于癌旁组织的15.56%，差异具有统计学意义（P＜0.05）；见表 1。

2.2 NSCLC患者血清PTX3水平比较 NSCLC癌患者血清PTX3水平显著的高于对照组，差异具有统计学意义，（P＜0.05）；见表 2。

表1 NSCLC组织中LOXL2蛋白表达比较

表2 NSCLC患者血清PTX3水平比较（x±s）

2.3 NSCLC患者LOXL2蛋白表达与患者临床病理学特征的关系 NSCLC癌患者癌组织中的LOXL2蛋白表达与患者TNM分期、是否发生淋巴结转移有关（P＜0.05）；见表 3。

表3 NSCLC患者LOXL2蛋白表达与患者临床病理学特征的关系[n（%）]

2.4 NSCLC患者血清PTX3水平与患者病理学特征的关系 在不同分化程度、病理学类型、病灶大小、TNM分期、淋巴结转移的NSCLC癌患者血清PTX3水平差异均无统计学意义 （P＞0.05）；见表4。

2.5 Cox比例风险回归分析 90例NSCLC患者，获得随访的有81例，3年生存率为23.33%（21/90）,采用Cox比例风险回归模型分析显示：TNM分期增高、发生淋巴结转移、LOXL2蛋白阳性表达与患者的不良预后直接相关，是独立性危险因素，P＜0.05；见表 5。

表4 NSCLC患者血清PTX3水平与患者病理学特征的关系（x±s）

3 讨论

长期吸烟、环境污染或者家族性的遗传易感基因的携带，均能够促进NSCLC的发生，特别是在合并有显著的相关家族史的患者中，NSCLC的发病率可进一步的上升[6]。临床上NSCLC的发生不仅能够导致患者短期内高肿瘤负荷临床表现的出现，同时还能够导致患者远期生存转归的恶化[7]。现阶段临床上缺乏对于NSCLC患者病情转归的可靠性评估指标,虽然血清中CA125等能够在NSCLC的临床预后评估过程中发挥作用。但单纯依靠CA125评估NSCLC患者临床预后转归的灵敏度不足45%，评估的一致性率不足30%[8]。而本研究对于NSCLC患者体内不同生物学指标的探讨，不仅能够揭示NSCLC的病情进展机制，同时还能够为临床上NSCLC的临床预后的评估提供血清学方面的参考。

表5 Cox比例风险回归分析结果

PTX3是炎症调控性相关指标，其能够通过影响到上皮细胞的核异型性,提高炎症性因子和氧化应激性因子对于上皮细胞的浸润,进而导致上皮细胞核异常裂变的发生。基础方面的研究还认为，PTX3的表达上升能够导致上皮细胞基因错配修复能力的下降，导致癌细胞核转录过程的显著激活[9]；LOXL2是氧化酶家族成员，其能够通过促进上皮-间质过程转化，进而加剧上皮细胞的浸润和转移，提高癌细胞的浸润深度。LOXL2的表还能够通过促进金属基质蛋白酶-9的激活,提高了癌细胞间质成分的降解,导致癌细胞间粘附能力的显著下降，促进了癌细胞的转移过程[10]。部分研究者探讨了PTX3的表达与肺癌患者的病情关系,认为PT X3的表达上升与NSCLC患者的病情进展密切相关[11]，但缺乏对于LOXL2的表达与NSCLC的病情关系研究。

本研究对于NSCLC患者体内LOXL2、PTX3的表达分析研究可见,在病例组患者中，LOXL2、PT X3的表达浓度均显著的上升，高于正常对照组人群，差异较为显著，提示了LOXL2、PTX3的表达均能够参与到NSCLC的病情进展过程。通过汇集不同的相关文献,笔者认为这主要由于LOXL2、PT X3的下列几个方面的作用机理有关[12-15]：⑴LOXL2的表达上升能够提高snail蛋白的激活,提高了其诱导的上皮间质转换过程,促进了癌细胞的浸润和侵袭过程；⑵PTX3的表达上升，能够通过提高氧化应激性因子对于癌细胞的浸润,导致癌细胞核异型性的突变。黄诚文等[9]研究者也认为，在肺癌患者病灶组织中，PTX3蛋白的表达阳性率可平均上升30%以上,特别是在具有显著的恶病质或者肿瘤消耗性表现的患者中，PTX3蛋白的表达阳性率可进一步的上升。在探讨LOXL2、PTX3的表达与肺癌患者临床病理特征的关系过程中,可以发现在临床分期较晚或者合并有显著的淋巴结转移的患者中，LOXL2的表达浓度均显著的上升,提示LO XL2的表达与肺癌患者的临床病理特征密切相关，这主要由于LOXL2的表达上升能够提高癌细胞对于临近正常肺泡组织的浸润,导致癌细胞的扩散和累及范围的增加。但本研究中并未发现PTX3的表达与肺癌患者临床病理特征的关系,存在不同的临床结论，考虑可能与PTX3蛋白的检测方法或者肺癌患者的基础性病情的差异有关。危险因素分析研究也可见，TNM分期增高、发生淋巴结转移、LOX L2蛋白阳性表达与患者的不良预后直接相关，进一步提示了LOXL2蛋白的表达与肺癌患者临床预后的关系,临床上可以通过随访LOXL2蛋白的表达情况，进而评估肺癌患者的临床转归。

综上所述，在NSCLC患者中，LOXL2、PTX3的表达均明显上升，LOXL2的表达与NSCLC的临床病理特征或者临床转归密切相关。