皂角籽中总黄酮的体内抗氧化作用研究

冯 洁，杨 敏，杨立轩，韦 妮，黄继杰，莫 庸，凌秀孟，周世友，黄锁义，2

（1.右江民族医学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室，广西 百色 533000）

皂角籽系豆科皂荚是植物皂角(Gleditsiasinensis Lam.)的种子[1]，含有生物碱、黄酮及甙类、皂甙、挥发油及油脂、氨基酸和蛋白质等[2]。目前，天然黄酮类抗氧化剂在保健、医药、食品、化妆品等领域的应用日益广泛，已成为新的研究热点之一,抗氧化活性研究已成为保健食品和药品评价的重要内容[3-5]。

自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，会损害机体的组织和细胞，引起慢性疾病及衰老[6]。体内过量的自由基，与衰老、肿瘤、心血管疾病、免疫功能低下等多种疾病的关系密切[7]。化学合成抗氧化剂伴随有肾毒性、潜在致突变、致畸等安全问题，因此开发利用有天然抗氧化活性的植物，成为食品科学研究发展的方向[8]。

黄酮类化合物具有多种生物学作用，如抗炎抑菌、抗氧化、降血糖、降血脂、抗癌、抗肿瘤及增强免疫力等，安全无毒，已在医药、食品加工等方面得到广泛应用[9-10]。

超声波提取对药材的破碎过程是一个物理过程，能保证被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，同时提高了药材破碎的速率，缩短了药材破碎的时间，可以极大提高药材的提取效率[11-12]。超声技术应用于提取皂角籽中黄酮类物质的研究尚未见报道，为此，本实验用超声波乙醇浸提法提取皂角籽中的总黄酮，对产品进行鉴别，并研究总黄酮的体内抗氧化作用。

1 实验材料

1.1 材料

皂角籽。普通级小白鼠，50 只雌性各半，质量18～22g［动物许可证号：SCXK（桂）2012-0003］。

1.2 试剂盒

过氧化氢酶（CAT）试剂盒、总超氧化物歧化酶（T-SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒及考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒等。

2 实验部分

2.1 皂角籽总黄酮提取液的制备

准确称取皂角籽10g，粉碎，称取皂角籽粉末约6g，加入95%乙醇80mL，超声波提取2.5h，抽滤。滤渣再加95%乙醇80mL，超声波提取2.5h，抽滤。合并2 次滤液，减压回收乙醇，至滤液仅剩5～7mL，放置于100mL 容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得到皂角籽黄酮提取液。

2.2 动物分组及给药

取小鼠50 只，质量18～22g，雌雄各半，随机分为正常组、阳性组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10 只。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别按灌胃量0.15、0.3、0.6g·kg-1，每天灌胃1 次。阳性组给予维生素C，灌胃量为0.03g·kg-1，正常组给予生理盐水。各组均连续给药14d。

2.3 血清及肝、脑组织匀浆的制备

实验末次给药24h 后，眼球采血，血液室温放置30 min 后，3500 r·min-1离心15min，分离上层血清备用。眼球取血后，颈椎脱臼法处死，迅速剥离肝脏和脑组织，用预冷的生理盐水冲洗数次，制成10%的组织匀浆，3500r·min-1离心10min，取上清液备用。

2.4 抗氧化指标的测定

小鼠血清的T-SOD、MDA，脑组织、肝组织的T-SOD、MDA、CAT、GSH-Px 及蛋白含量的检测，均按相应的试剂盒说明书进行操作。

2.5 统计学方法处理

用SPSS 22 软件进行统计学处理，多组间比较采用单因素方差分析，当P＜0.05时，为有统计学意义。

3 实验结果

3.1 皂角籽总黄酮提取液对小鼠血清中T-SOD 活性和MDA 水平的影响

与正常组相比，阳性组、中剂量组、高剂量组均有统计学意义，低剂量组与正常组无统计学意义。结果(表1)表明，皂角籽总黄酮提取液可以提高小鼠血清中的T-SOD 活性，降低体内过氧化产物MDA 的水平，给药剂量为0.6g·kg-1时尤为明显。

表1 皂角籽总黄酮提取液对小鼠血清中T-SOD 活性和MDA水平的影响

3.2 皂角籽总黄酮提取液对小鼠肝组织中T-SOD、

CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影响

与正常组相比，皂角籽总黄酮提取液能提高小鼠肝组织中的T-SOD、CAT、GSH-Px 活性，降低MDA 水平。其中，高剂量组各项检测结果有统计学意义，阳性组的MDA、T-SOD，以及中剂量组的MDA、T-SOD、GSH-Px 均有统计学意义，实验结果见表2。

3.3 皂角籽总黄酮提取液对小鼠脑组织中T-SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影响

与正常组相比，皂角籽总黄酮提取液能提高小鼠脑组织的T-SOD、CAT、GSH-Px 活性，降低MDA 水平。其中，高剂量组的各项检测结果有统计学意义，阳性组的CAT、GSH-Px，以及中剂量组的T-SOD、CAT 有统计学意义，结果见表3。

表2 皂角籽总黄酮提取液对小鼠肝组织中T-SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影响

表3 皂角籽总黄酮提取液对小鼠脑组织中T-SOD、CAT、GSH-Px 活性和MDA 水平的影响

4 结论

本实验的结果表明，与正常组相比，中、高剂量组的皂角籽总黄酮提取物能够提高小鼠血清中的T-SOD 活性，降低体内过氧化产物MDA 的水平。与正常组相比，高剂量的皂角籽总黄酮提取物能提高小鼠体内肝、脑组织中的T-SOD、CAT、GSH-Px活性，降低MDA 水平，表明皂角籽具有较强的体内抗氧化作用。本实验结果可为今后皂角籽的深入开发和临床应用提供数据参考。