T-SPOT.TB对风湿免疫病患者活动性肺结核诊断准确性的影响因素分析*

2020-04-20沈广萍

国际检验医学杂志 2020年7期

赵静，刘轩，沈广萍，王静

(内蒙古医科大学附属医院风湿免疫科，内蒙古呼和浩特 010050)

结核杆菌T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)是通用酶联免疫斑点试验检测结核杆菌感染特异性T细胞以诊断结核病的技术，其已成为检测结核病的重要手段。风湿免疫病是一类以皮肤、关节、血管等损害为特点的常见病，主要包括痛风、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。该病患者治疗中常应用的糖皮质激素和免疫抑制剂可影响结核菌素皮肤试验结果，有学者认为T-SPOT.TB受机体免疫情况、糖皮质激素、免疫抑制剂的影响较小，更适合于风湿免疫病患者的肺结核检测[1-2]。但同时也有学者认为淋巴细胞绝对值、中性粒细胞绝对值/淋巴细胞绝对值、是否合并肺外结核等因素与T-SPOT.TB诊断准确性有关[3-4]。因此关于T-SPOT.TB对风湿免疫病患者活动性肺结核诊断准确性的研究尚无统一结论。本实验基于此点，探讨风湿免疫病患者T-SPOT.TB诊断准确性的影响因素，旨在提升T-SPOT.TB在风湿免疫病患者诊断活动性肺结核中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料回顾性分析2017年5月至2019年5月本院就诊的100例疑似伴发活动性肺结核的风湿免疫病患者的临床资料、临床诊断结果、T-SPOT.TB检查结果。纳入标准：(1)患者符合类风湿性关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮等相应风湿免疫性疾病诊断标准[5]，并有咳嗽、咳痰、午后低热、咯血等症状，胸部影像学检查疑似活动性肺结核[6]；(2)年龄>18岁。排除标准：(1)严重感染、人类免疫缺陷病毒感染、恶性肿瘤、严重肝肾功能不全；(2)妊娠妇女；(3)临床资料缺失。纳入患者中包含类风湿性关节炎44例，骨关节炎6例，系统性红斑狼疮26例，痛风18例，强直性脊柱炎8例。本实验设计已由医院伦理学委员会审核。

1.2仪器与试剂 HealForce培养箱、T-SPOT.TB试剂盒(均购自英国Oxford Immunote Ltd公司)，酶联免疫荧光斑点分析仪(购自德国AID公司)，淋巴细胞分离液、Gibco AIM-V(购自上海复星长征医学科学有限公司)，Gibco RPMI 1640细胞培养液(购自广州硕恒生物科技有限公司)。

1.3方法分析T-SPOT.TB对风湿免疫病患者伴发活动性肺结核的诊断效能，对比假阳性患者与真阳性+真阴性患者的临床资料，以及假阴性患者与真阳性+真阴性患者的临床资料，分析T-SPOT.TB检查假阳、假阴结果产生的相关因素。

1.3.1患者活动性肺结核确诊方法参考《WS 288-2017肺结核诊断》[6]，结合患者症状和肺部影像学检查、细菌学检查、病理学检查结果，排除其他肺部疾病后诊断为活动性肺结核。

1.3.2样本准备取患者外周静脉血8 mL与BPMI 1640不完全培养液混匀，分离得出单个细胞层后置于离心管中，加入10 μL细胞悬液和0.4%细胞稀释液40 μL。将制备好的细胞混合液加入细胞计数板中并行活细胞计数。在培养板中加入AIM-V无血清培养液50 μL、抗原A和抗原B 50 μL，设立50 μL的对照组，将培养板放置于5% CO2培养箱中孵育20 h，温度设置为37 ℃。

1.3.3斑点计数舍弃培养板孔中液体，在孔内加入新鲜酶标抗体溶液50 μL，于2～8 ℃下孵育1 h。加入底物溶液50 μL，室温下反应7 min，用蒸馏水洗涤、干燥培养板。然后采用ELISPOT自动计数仪行斑点计数处理。

1.3.4T-SPOT.TB结果评估以下情况为阳性结果：(1)阴性对照孔斑点数<6个，且抗原A或抗原B孔斑点数-阴性对照孔斑点数≥6个；(2)阴性对照孔斑点数≥6个，且抗原A或抗原B孔斑点数≥2倍的阴性对照孔斑点数。不符合上述情况则为阴性结果。

2 结果

2.1T-SPOT.TB诊断效能 T-SPOT.TB诊断风湿免疫病患者伴发活动性肺结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为81.08%、42.31%、80.00%、44.00%，见表1。

表1 痰培养和T-SPOT.TB诊断结果(n)

2.2影响假阳结果产生的因素在风湿免疫病疑似伴有活动性肺结核的患者中，T-SPOT.TB假阳性患者存在结核既往史、吸烟史的例数大于真阳性+真阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)，假阳性患者与真阳性+真阴性患者其余资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 假阳结果产生的影响因素

注：*表示统计量为χ2，#表示统计量为t值，△表示统计量为Z值，▲表示采用Fisher确切检验；-表示无数据。

2.3影响假阴结果产生的因素在风湿免疫病疑似伴有活动性肺结核的患者中，T-SPOT.TB假阴性患者结核性胸膜炎、结核性脑膜炎例数与真阳性+真阴性患者比较，差异有统计学意义(P<0.05)；假阴性患者与真阳性+真阴性患者其余资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

2.4T-SPOT.TB产生假阳性结果的相关因素Logistic回归分析根据假阳性患者与真阳性+真阴性患者的临床资料比较结果，选择其中P<0.05的3个可能影响假阳性结果发生的相关因素进行Logistic回归分析。分析显示，结核既往史(OR=6.185，P=0.011)、吸烟史(OR=22.322，P=0.005)为T-SPOT.TB产生假阳性结果的危险因素，见表4。

表3 假阴结果产生的影响因素

注：*表示统计量为χ2，#表示统计量为t值，△表示统计量为Z值，▲表示采用Fisher确切检验；-表示无数据。

2.5T-SPOT.TB产生假阴性结果的相关因素Logistic回归分析根据假阴性患者与真阳性+真阴性患者的临床资料比较结果，选择其中P<0.05的2个可能影响假阴性结果发生的相关因素进行Logistic回归分析。分析显示，结核性胸膜炎(OR=13.827，P=0.003)、结核性脑膜炎(OR=20.303，P=0.001)为T-SPOT.TB产生假阴性结果的危险因素，见表5。

表4 T-SPOT.TB产生假阳性结果的相关因素Logistic回归结果

注：-表示无数据。

表5 T-SPOT.TB产生假阴性结果的相关因素Logistic回归结果

3 讨论

风湿免疫病患者由于治疗中多使用糖皮质激素和免疫抑制剂[7]，导致机体免疫功能下降，因此更应留意结核感染风险[8]。但风湿免疫病患者较差的免疫力使得结核菌素皮肤试验敏感性大大降低，痰培养亦受各种因素限制容易产生低阳性率[9-10]。T-SPOT.TB作为一种新型的结核分枝杆菌感染检测手段，不仅弥补了结核菌素皮肤试验、痰涂片的不足，还能反映机体病原体清除情况[11-12]。但部分研究认为T-SPOT.TB对某些患者的诊断效能并不理想[13-14]，且尚少见T-SPOT.TB对风湿免疫病患者诊断效能影响因素的研究。探索T-SPOT.TB对风湿免疫病伴疑似活动性肺结核患者的诊断准确性，可为改良结核病检测手段、提升T-SPOT.TB应用价值带来新的启示。

国外有研究表明，在不同人群中T-SPOT.TB的诊断效能参差不齐，在某些因素影响下灵敏度可低于80%[15]。在本研究中，观察到T-SPOT.TB诊断风湿免疫病患者伴发活动性肺结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为81.08%、42.31%、80.00%、44.00%，这可能是由于多种因素影响使得风湿免疫病患者T-SPOT.TB的诊断准确性降低。ZHANG等[15]研究中发现年龄、结核病史、糖皮质激素或免疫抑制剂应用史、淋巴细胞计数是T-SPOT.TB特异性降低的危险因素，在该实验中123例带有结核病史的患者T-SPOT.TB特异性低至39.5%。说明T-SPOT.TB对不同人群的活动性肺结核诊断效能不尽相同[16-17]，诊断结果可能受多种因素影响。

为探索风湿免疫病患者T-SPOT.TB诊断准确性的影响因素，本研究将15例假阳性患者、14例假阴性患者分别与71例真阳+真阴患者的T-SPOT.TB结果对比，并分析T-SPOT.TB诊断效能的影响因素，发现T-SPOT.TB假阳性患者存在结核既往史、吸烟史的例数大于真阳性+真阴性患者；T-SPOT.TB假阴性患者结核性胸膜炎、结核性脑膜炎例数与真阳性+真阴性患者比较差异有统计学意义(P<0.05)；结核既往史、吸烟史为T-SPOT.TB产生假阳性结果的危险因素，结核性胸膜炎、结核性脑膜炎为T-SPOT.TB产生假阴性结果的危险因素。这就意味着T-SPOT.TB的诊断效能可能在风湿免疫病患者中并不理想，结核既往史、吸烟史、并发症类型影响着诊断准确性。LI等[18]对98例活动性肺结核患者、251例非结核病的人群T-SPOT.TB检查结果进行分析，得出结论：并发结核性脑膜炎是T-SPOT.TB假阴性的危险因素，结核病史是该检查假阳性的危险因素。PAN等[3]研究中发现：对于肺结核患者，T-SPOT.TB假阴性的危险因素包含年龄、体质量指数、病程；对于伴有肺外结核杆菌感染的患者，T-SPOT.TB假阴性的危险因素包含年龄、单核细胞数目。对于伴有这些因素的患者，医师应留意其T-SPOT.TB结果的可信程度。另一方面，夏青等[19]认为T-SPOT.TB结果受淋巴细胞绝对值、中性粒细胞绝对值/淋巴细胞绝对值、血小板计数/淋巴细胞绝对值影响较大。风湿免疫病患者多接受糖皮质激素和免疫抑制剂的治疗，这些药物可影响患者免疫系统功能和免疫细胞数量，若患者长期接受糖皮质激素/免疫抑制剂治疗、出现明显免疫系统功能抑制[20]，其T-SPOT.TB结果可能存在疑问。结合本实验结果，研究者认为T-SPOT.TB检查虽具有许多优点，但应用于风湿免疫病患者仍需考虑诸多影响因素。不论T-SPOT.TB结果如何，皆有必要对结果进行辨析，以防止误诊、漏诊的发生。若条件允许，可将T-SPOT.TB与结核菌素皮肤试验、痰涂片等检查手段联用，以提高检测的诊断效能。