辽宁绒山羊正常组织中PrPc分布的研究

摘要：本实验采取辽宁绒山羊正常组织，心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、脑干和淋巴结，采用朊蛋白单克隆抗体7D9单抗，应用免疫组织化学方法，对绒山羊不同组织中的PrPc进行了定性、定量和定位的研究。结果为正常朊蛋白在大脑、小脑、脑干等中枢神经系统分布广泛，其次是脾脏、淋巴结等淋巴网状系统，而肝脏、心脏和肺脏组织器官未检测到PrPc。朊蛋白单克隆抗体7D9可以用于辽宁绒山羊正常组织朊蛋白的免疫组织化学研究。

关键词：辽宁绒山羊;朊蛋白;免疫组织化学

近年来，对于TSE检测的发展非常迅速，尽管朊病毒的分类本质还不明确，但其一些生物学特性已有研究，如抵抗性、传染性等。PrPc检测逐渐成为TSE的确诊依据。其中免疫组织化学（IHC）诊断方法具有特异性高、成本低、操作简单、准确等特点，被世界动物卫生组织确定为法定TSE诊断方法之一。IHC已广泛用于羊痒病等动物海绵状脑病的诊断和检测。朊蛋白在不同组织中的分布和表达量是朊病毒的致病基础。本试验将应用免疫组织化学方法，对辽宁绒山羊PrPc在不同组织中的分布进行定性、定量和定位的研究，旨在探求TSE的发病机理、传播途径以及为揭示朊蛋白在组织中的表达量与 PrPSc的感染途径之间的关系提供生物学信息。

1 材料和方法

1.1 试验材料

来自营口临床健康的辽宁绒山羊成年母羊（3～5岁）30只屠宰后，立即采取大脑、小脑、脑干、肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠系膜淋巴结、扁桃体等组织器官，放入10%福尔马林溶液中固定。

1.2 试验方法

样品组织蜡块制备，石蜡切片脱蜡至水，石蜡切片去除内源性过氧化物酶，石蜡切片的修复和抗原暴露，滴加特异性一抗和二抗，显色、水化、苏木素复染及封片，用PBS代替PrPc单克隆抗体做阴性对照。

2 结果和分析

免疫组织化学检测结果显示，在辽宁绒山羊的大脑、脑干、小脑、淋巴结、脾脏、肾脏、肺脏均观察到了PrPc的表达，尤其在大脑、脑干、小脑、淋巴结和脾脏中PrPc的表达量丰富。脑干部神经元排列紧密，可见明显的红色片状区域;朊蛋白在脾脏分布较为广泛，表达量多。淋巴结中PrPc数量很多，分布较为广泛，在心脏、肝脏、肾脏和肺脏未检测出PrPc表达，结果为阴性。

3 讨论与结论

本试验表明，正常朊蛋白（ PrPc） 在辽宁绒山羊的大脑、脑干、小脑、脾脏、肾脏、淋巴结均有表达，且在有些组织中呈现高表达量。虽然在辽宁绒山羊心脏、肝脏和肺组织没有检测到PrPc，但这并不能说明该组织中不含有PrPc，可能由于表達量低而难以检出，或由于PrPc空间结构的存在，某些抗原位点可能处于被隐蔽状态，而抗原修复方式对一些构象依赖性的位点会造成影响，从而导致抗原位点的暴露存在差别，这些因素都将影响免疫组化检测的结果。

本试验利用单抗7D9进行辽宁绒山羊正常组织中PrPc免疫组织化学研究，通过对抗原的甲酸和高温水浴热修复，在大脑、小脑、脑干等中枢神经系统以及脾脏、淋巴结等淋巴网状系统都检测到了高表达的PrPc，这与以往的报道一致。甲酸和高温水浴对PrPc的暴露具有很好的修复作用。

作者简介：龚商羽（1981-），女，硕士，中级兽医师。主要从事重大动物疫病的预防和控制的研究。