接骨续筋丸中5种药材的薄层鉴别研究

2020-04-10张永萍吴静澜

亚太传统医药 2020年1期

王云，张永萍，吴静澜，杨姗，吴丹

(贵州中医药大学，贵州贵阳 550002)

接骨续筋丸原为散剂，经工艺优化后制成丸剂，是由骨碎补、西红花、续断、赤芍、木香、血竭、自然铜、土鳖虫、乳香、没药等二十六味药材制成的浓缩水丸，具有活血止痛、祛瘀生新、接骨续筋、舒筋活络的功效，临床用于骨折损伤中期的治疗。原制剂无相关质量标准内容，为进一步建立该丸剂质量标准，有效控制其质量，进行了有关药味的薄层色谱鉴别研究，并建立接骨续筋丸中骨碎补、西红花、续断、赤芍、木香5味药材的薄层色谱鉴别方法，且方法专属性强、重复性好。

1仪器与材料

1.1 仪器

SK8210HP超声波清洗器；JA2003分析天平；LDP-150高速多功能粉碎机；电炉；HWS恒温恒湿培养箱；GOODSEE-20E薄层成像系统。

1.2 材料

骨碎补、西红花、血竭等药材均由贵州同济堂制药有限公司提供。川续断皂苷Ⅵ(111685-201707)对照品；骨碎补(批号：121169-201304)、木香(批号：0921-200104)、赤芍(批号：121093-201303)、西红花(批号：121009-201704)对照药材，均由中国食品药品检定研究院提供。试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1 骨碎补[1]

(1)供试品溶液的制备：取丸研成粉末，称取1 g，加水20 mL超声30 min，滤过，取续滤液10 mL，加20 mL乙酸乙酯萃取，取上层萃取液蒸干，残渣加甲醇溶液。(2)阴性溶液的制备：取不含骨碎补的丸剂，按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。(3)对照药材溶液的制备：取对照药材0.5 g加甲醇30 mL，回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液。(4)条件与结果：吸取上述对照药材溶液3滴、供试品溶液与阴性溶液各5 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(2∶10.5∶2.5∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，置紫外光(365 nm)下检视。在与骨碎补对照药材相应的位置上(Rf=0.21)有两个斑点，显相同的荧光绿色斑点，阴性样品无干扰。薄层色谱见图1。

2.2 续断[2]

(1)供试品溶液的制备：取丸，研成粉末，称取0.5 g，加水20 mL，超声30 min过滤，取续滤液10 mL，分别用水饱和正丁醇10 mL萃取2次；然后用氨试液10 mL萃取1次；再用正丁醇饱和水10 mL萃取1次，均取上层溶液。萃取液蒸干，加甲醇溶解。(2)阴性溶液的制备：取不含续断的丸剂，按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。(3)对照药材溶液的制备：取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。(4)条件与结果：吸取上述3种溶液各5 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置白光下检视。在与续断对照药材相应的位置上(Rf=0.36)有一相同的淡紫色斑点，阴性样品无干扰。薄层色谱见图2。

注：1骨碎补对照药材；2-8接骨续筋丸；9阴性样品

注：1.川续断皂苷Ⅵ对照品；2-8.接骨续筋丸；9.阴性样品

2.3 西红花[3]

(1)供试品溶液的制备：取丸研细，称取0.5 g，加甲醇10 mL，超声10 min，放冷，取上清液作为供试品溶液。(2)阴性溶液的制备：取不含西红花的丸剂，按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。(3)对照药材溶液的制备：取对照药材20 mg加甲醇1 mL，超声处理10 min，放冷，取上清液作为对照品溶液。(4)条件与结果：吸取上述对照药材溶液3滴、供试品溶液与阴性溶液各5μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(10∶1.65∶1.35)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光(365 nm)下检视。在与西红花对照药材相应的位置上(Rf=0.33)有三个相同的暗黑色斑点，阴性样品无干扰。薄层色谱见图3。

注：1.西红花对照药材；2-8.接骨续筋丸；9.阴性样品

2.4 赤芍[4]

(1)供试品溶液的制备：取丸，研成粉末，称取0.5 g，加水20 mL，超声30 min过滤，取续滤液10 mL，分别用水饱和正丁醇10 mL萃取3次；用2.5 mL氨试液萃取1次；再用正丁醇饱和水7.5 mL萃取2次，均取上层溶液。萃取液蒸干，加甲醇溶解。(2)阴性溶液的制备：取不含赤芍、白芍的双阴性丸剂，按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。(3)对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材0.5 g，加乙醇10 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。(4)条件与结果：吸取上述对照药材溶液3滴、供试品溶液与阴性溶液各5 μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20∶2.5∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置白光下检视。在与赤芍对照药材相应的位置上(Rf=0.35)有两个显相同颜色的蓝色和淡红色斑点，而阴性样品在此处无蓝色斑点，不存在干扰。薄层色谱见图4。

注：1.赤芍对照药材，2-8.接骨续筋丸，9.阴性样品

2.5 木香[5]

(1)供试品溶液的制备：取丸研成细粉，称取1.5 g，加三氯甲烷10 mL，超声处理30 min，过滤，滤液为供试品溶液。(2)阴性溶液的制备：取不含木香的丸剂，按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。(3)对照药材溶液的制备：取对照药材0.5 g，加三氯甲烷10 mL，超声30 min。过滤，滤液为对照药材溶液。(4)条件与结果：吸取上述对照药材溶液1滴、供试品溶液与阴性溶液各6滴分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环己烷(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷1%香草醛硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点清晰，置白光下检视。在与木香对照药材相应的位置上(Rf=0.37)有两个显蓝色斑点和紫色斑点，阴性样品无干扰。薄层色谱见图5。

注：1.木香对照药材；2-8.接骨续筋丸；9.阴性样品

3讨论

试验对各药材的耐用性进行了考察，包括对不同的厂家薄层板(青岛、烟台)、环境不同温度(20 ℃、25 ℃、30 ℃)及不同湿度(50%、60%、70%)的考察。结果显示不同因素下每味药材的薄层鉴别存在一定差异，烟台板使续断、西红花、木香的Rf值减小；温度30℃时，骨碎补、续断、木香的Rf值均增大；湿度60%时，西红花Rf值增大，赤芍Rf值减小，湿度70%时，续断Rf值增大，赤芍Rf值减小。不同药材的薄层色谱在不同条件下虽有差异，但对应条件中的色谱图专属性强，分离度好，表明薄层鉴别方法的可靠性，进一步阐释了用该薄层色谱条件控制接骨续筋丸制剂质量的合理性。相关薄层如图6-图10。