检测霍乱弧菌时的注意事项

曾学民

【中图分类号】R572

【文献标识码】A

【文章编号】2095-6851（2020）04-007-01

霍乱弧菌是一种致病菌，该菌引发的霍乱是一种急性肠道传染病，典型病例以剧烈腹泻为主要症状，可在短时间内引起脱水、电解质平衡失调，严重可迅速发展为循环衰竭导致死亡，该病发病急、传播快、波及范围广，自1816年以来在全世界范围内发生七次大流行，因此，霍乱被列为了国境检疫传染疾病。霍乱病例的确诊需要进行实验室检测，迅速准确的实验室检测结果可为及时采取防疫措施提供可靠的依据。那么在对霍乱弧菌进行检测时应该注意哪些事项？下面我们就来为大家作一下详细介绍：

霍乱弧菌具有哪些特征？

1.霍乱弧菌是属于兼性厌氧菌，对营养的要求不是很高，普通培养基便可良好生长。在碱性蛋白胨水或平板中生长良好，因其他细菌在碱性环境中不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。

2.霍乱弧菌为革兰氏阴性菌，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞，在暗视野下可见细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动。

3.霍乱弧菌对于热、干燥、日光及常规消毒剂都非常敏感，若干燥2小时或者加热至55℃，则会在10分钟内死亡;在煮沸的开水中会1-2分钟死亡;对于酸非常敏感，在正常胃酸中活不过4分钟;如果放入0.1%的漂白粉当中也会在10分钟内死亡。

霍乱弧菌怎样进行检测？

1.增菌：一般采集的标本来自各种环境，杂菌比较多，利用霍乱弧菌耐碱的特性，取一定数量的样品放入到装有碱性蛋白胨水（APW）的广口瓶中，在适宜的温度培养，以抑制杂菌利于霍乱弧菌生长。增菌主要注意事项：一是配制增菌培养基的时候，一定要PH值准确;二是食品、水样等杂菌较多的样品，需要先后使用PH8.8-9.2和PH8.4-8.6碱胨水进行二次增菌以提高检测率;三是急性期患者标本可以直接在选择性平板上划线，进行分离培养，以加快检测速度，为疫情处理尽早地提供应对方向。

2.分离：用接种环在6h-8h与16h-24h的增菌培养液表面菌膜下各取一環，分别划线到TCBS、庆大霉素或4号琼脂平板上各一个，在（36±1）℃条件下培养18-24h;分离主要注意事项：一是要注意检验人员需经过多次培训能准确识别典型菌落，必要时多挑取可疑菌落进一步检测，避免遗漏;二是选择性平板一定要按规范准备，新平板一定烘干水分;三是平板上的标识要准确、唯一，不要出现可能混淆的标号。

3.鉴定：采用接种环取下TCBS琼脂平板上的2-5个可疑菌落，在碱性琼脂平板表面划线，于（36±1）℃条件下培养12h-18h。在选择性平板上直接挑取可疑菌落，用O1/O139两价混合血清凝集，并使用分离到的纯菌在生化鉴定系统进行生化鉴定实验。O1的菌株再用小川/稻叶血清分别凝集，做生物型鉴定试验可报告霍乱菌的生物型，同时采用PCR技术检测霍乱菌的产毒株/非产毒株，可报告血清群、血清型、产毒/非产毒。鉴定主要注意事项：一是要所有的血清和试剂均在有效期内使用;二是用于做血清凝集实验的玻片一定洁净，不得有影响检测结果的污迹;三是出现可疑结果一定要多次实验，避免遗漏阳性菌株。

霍乱弧菌主要检测标本应该如何采集？

1.由于霍乱是一种烈性消化道传染病，采样人员要注意按二级防护要求做好个人防护。扑灭霍乱疫情需要花费大量人力物力财力，检测结果会直接影响政府防控措施的实施，因此在标本采集的时候应该保证每一个标本的编号是唯一的。标本采集后应冷藏保存，在没有冷藏条件的情况下，特别是夏天应该将运送时间计算进培养时间。

2.患者粪便 粪便标本的采集越快越早越好，这样会尽早获得检测结果为扑灭疫情赢得时间，在患者腹泻的便池、地面、或者医院专用的粪便收集器挑取一定量的粪便加入碱胨增菌液中，同时也在4号琼脂平板划线，一起送实验室培养检测。

3.水体 采集包括河口水、井水、乡镇自来水厂源水、下水道排放口等水体样本。一是以灭菌的500ml盐水瓶采取水样450ml，不要让水样充满整个瓶子。二是Moore纱布集菌法：该方法尤其适用于河流等流动水体水样的采集，城市生活污水的采集也可采用此方法。三是Spira纱布集菌法：用于过滤并采集大体积水样。

4.患者呕吐物、食品等 呕吐物、食品、水产品、苍蝇、被污染的物体表面都是用无菌的镊子或棉拭子取用一定数量的检材，放入灭菌容器或者直接放入碱胨水试管里中送检。