Sysmex XN-350血细胞分析仪体液模式对胸腹水细胞学计数及其分类的评价

张卫，吴茜★，权志博，李彦魁，李卓

（1.陕西中医药大学医学技术学院，陕西 西安；2.西安医学院第一附属医院检验科，陕西 西安）

0 引言

目前，国内大多数检验科对胸腹水标本的细胞学计数和分类仍处于手工操作阶段，该法步骤繁琐，时间长。由于受到操作人员、操作习惯、熟练程度等因素的影响，因而产生了结果重复性差的问题。这不仅困扰实验室人员，也干扰临床医生为病人用药。因此，寻求便捷的方法在保证检验报告准确的前提下来提高效率，缩短实验室内周转时间(TAT)为临床提供检验结果已成为当务之急。

1 材料与方法

1.1 标本来源与主要试剂

标本来源于2018年8月至2019年8月，西安医学院第一附属医院住院患者的胸腹水标本505份。其中，男性389例，女性107例，年龄位于15岁到80岁不等，中位年龄45岁。

仪器与试剂：Sysmex XN-350血液分析仪以及配套检测试剂以及体液模式所用的质控品和定标品，Olympus 双目显微镜，瑞氏-吉姆萨染色液，牛鲍计数板，微量吸管，冰醋酸。

1.2 方法

1.2.1 仪器精密度调试

仪器精密度参考文献[1]，取3份通过手工法计数，白细胞总数分别为WBC＜50×106/L、WBC（50～300）×106/L、和WBC＞300×106/L的胸腹水标本，在室温下每份标本用Sysmex XN-350血细胞分析仪体液模式连续测定10次，得出白细胞总数（计算出各自的标准差（SD）与变异系数（CV）。CV≤30%表示精密度在允许的范围，并具有良好的重复性。

1.2.2 线性范围验证

取1份WBC计数约500×106/L的胸腹水标本，分别按200%、100%、80%、60%、40%、20%、10%用生理盐水稀释。稀释后，每个稀释度连续检测5次，计算出均值。将实际值与理论值作比较，计算Y=ax+b，进行线性回归分析。

1.2.3 临床胸腹水样本的测定

将每份样本混匀后分成三份。第一份使用Sysmex XN-350血细胞分析仪体液模式检测，记录其白细胞计数和分类结果。第二份使用牛鲍计数板充池计数白细胞，对浓度过大的标本，用白细胞稀释液稀释后计数。第三份离心后，取适量沉淀涂片，瑞氏染色6min后显微镜分类200个细胞。WBC分类计数参照NCCLS H20-A规定的方法，为保证镜检结果的一致性和准确性，选取2名经过形态学考核合格的人员采用双盲法进行。取2人WBC分类及计数结果的均值与血细胞分析仪体液模式测定的结果进行比较。当两人结果差距超过30%时，由第三人进行复检，选取两名差别较小的结果取平均值。

1.2.4 统计学处理

采用统计学软件SPSS 18.0 对数据进行处理，相关性分析采用Pearson检验，计算相关系数(r)值和斜率a值，利用配对t检验，计算出每组的t值和P值，当P＜0.05时，有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度分析

血细胞分析仪体液模式对高、中、低3份WBC浓度的胸腹水标本各进行10次计数和分类测定，计算出均值(x)、标准差(SD)与变异系数(CV)。结果显示CV均＜30%，在厂商规定的使用范围内。说明本次使用的血细胞分析仪体液模式对胸腹水标本WBC的计数具有良好的重复性。白细胞计数结果(见表1)。

表1白细胞计数精密度结果

2.2 线性范围验证

通过计算，白细胞的线性方程为Y=0.983x+0.629，R2为0.999，符合厂商规定的a值范围1.0±0.05和R2＞0.951的要求。WBC的线性范围为（1.02-10.3）×106/L，结果见图1。

图1 白细胞计数线性范围验证

2.3 两种检测方法白细胞总数结果比较

低值组：≤50×106/L的胸腹水标本测定后进行配对t检验，结果显示低值组P＜0.05，差别有统计学意义。对中值组：（50～300）×106/L、高值组：＞300×106/L两组胸水标本分别进行配对t检验，结果显示P值均大于0.05，无统计学意义。线性相关分析表明两者呈正相关（r＞0.9）。结果见图3。

图2 低值组WBC线性分析

2.4 两种检测方法白细胞分类

通过上述结果，手工法和仪器法在中高值组白细胞计数上两种方法无统计学意义。我们对高值组的白细胞进行分类，并做统计学分析。结果发现当单核细胞比例较少时，仪器法对白细胞的分类和手工法分类相比变异系数较小，但是当单核细胞比例较大时，手工法和仪器法在白细胞分类上结果相差较大。结果见图4。

3 讨论

图3 中高值组WBC线性分析

图4 仪器法与手工法白细胞分类CV值比较

胸水细胞计数和分类对临床诊断疾病有重要的意义，可用于病情的预测、转归、以及疗效观察。然而，这项检查操作的金标准主要是依靠手工计数和显微镜分类[2]，该法有以下缺点，第一，耗时，在较短时间内难以将结果反馈给临床，耽误治疗。在实验室内难以提高工作效率。第二，受技术误差影响较大，由于操作人员、熟练程度的不同，结果也不尽相同。因而，寻求一种更为便捷快速的方法来检查体液细胞，已变得尤为重要。

近年来，越来越多的实验室工作者提出用血球仪或者全自动尿沉渣仪来对体液细胞进行计数和分类[3]。Sysmex XN-350血液分析仪采用半导体激光原理结合流式细胞和核酸荧光染色技术对血白细胞进行分类和计数。本实验采用Sysmex XN-350血球仪的体液模式对胸腹水标本进行计数和分类，为验证该检测的准确性，我们对仪器法结果与手工法结果进行统计学比较分析。结果显示，在精密度和重复性满足要求的情况下，中、高值标本的白细胞计数无统计学意义，但是低值标本的仪器法和手工法结果差别较大。Aulesa等人对白细胞＜100×106/L的标本进行手工法计数时，发现两名人员计数结果变异系数可达30%[4]，所以差异原因较大也有可能是手工法导致的。XN-350血细胞分析仪体液模式检测体液细胞下限比拜耳的 ADVIA 120血细胞分析仪体液模式检测体液细胞下限47×106/L略高，和SysmexXE-2100血细胞分析仪体液模式检测体液细胞下限 50×106/L 相同[2]。有学者认为在胸腹水标本细胞数较低的情况下，结果应以仪器法为准，以100×106/L的标本为例， ADVIA120在检测时，大概要计数700个细胞，而手工法一般只分100个细胞[6]。然而我们发现，随着细胞浓度的减少，分类时高荧光细胞（HF）比例会假性增加。临床上大多数胸腹水标本细胞数量都是高于该值的[7]，在本次实验的505例标本中，仅有25例标本细胞数低于50×106/L。

中高值标本手工法和仪器法计数无统计学意义，说明XN-350在特定条件下可以替代手工法计数。在分类上，当单核细胞比例较低的情况下，白细胞分类相差不大，但是当单核细胞比例较高时，仪器法计数的单核细胞比例比手工法高，究其原因仪器可能将间皮细胞，某些肿瘤细胞分入单核细胞内[8]。所以当用仪器法测定胸腹水标本时，若提示单核细胞过高，应进行手工法分类复检。此外，在对细胞数量过多的标本进行检测时，仪器提示“细胞数量过多，无法检测”时，应对标本进行稀释到（100-300）×106/L时检测，手工法和仪器法呈正线性相关。

本实验表明XN-350可以用来做胸腹水标本的细胞学分析，然而却有一定的限制。因此，在接受到标本后，应对病例进行查看，以下情况建议手工法来完成操作，1.怀疑为恶性肿瘤病人的胸水；2.用仪器法分类时，单核细胞比例过高时；3.细胞数过高或者高低的标本。