甘油-3-磷酸脱氢酶-1-样基因在重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义

付晗，崔世红，刘灵，陈娟，孟洁，闫书君，綦月，刘贝贝，汪田田

（郑州大学第三附属医院妇产科，河南 郑州）

0 引言

重度子痫前期（sPE）常伴有严重的并发症，严重威胁母婴生命健康，但其病因及发病机制尚不明确。目前普遍认为胎盘缺血缺氧是子痫前期发病的关键环节[1,2]。甘油-3-磷酸脱氢酶-1-样（GPD1L是新发现的具有调控细胞的增殖分化、新生血管的形成、能量的产生及免疫应答的生物学功能，参与调节细胞对低氧环境的适应[3,4]。因此本文主要通过检测GPD1L在重度子痫前期胎盘组织中的表达情况，分析其在重度子痫前期中的发病机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年3月至2019年3月在郑州大学第三附属医院产科住院并分娩的孕妇100例，其中50例为患有重度子痫前期的孕妇，即实验组；50例产前检查正常的健康孕妇，即为对照组。同时为排除年龄的影响，两组孕妇的年龄控制在2岁以内。排除标准：自身免疫性疾病、严重炎症、慢性肝肾心功能不全、慢性高血压、妊娠期高血压病史及其它产科合并症或并发症者等。重度子痫前期的诊断标准均符合《妇产科学》第9版[5]。同时对两组孕妇的年龄、孕周、收缩压、舒张压等基本数据进行分析。本研究经郑州大学第三附属医院伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

胎盘娩出后5分钟内在母体面4个象限的中央部位避免出血、梗死及钙化灶等异常组织各取1块约1 cm3大小的胎盘组织，其中取任意两块组织经石蜡包埋后编号；另两块组织经过清洗编号后保存于-80℃冰箱。

（1）免疫组化法检测胎盘组织中GPD1L蛋白的表达情况 将标本制成切片后经过一系列的脱蜡、水化，抗原高温修复等一系列操作步骤。采用盲法由2名副主任医师以上的病理科医生在光学显微镜（400倍）下观察免疫组化染色后的组织并评分。阳性细胞判断标准：根据细胞质染色情况和阳性细胞数来判定蛋白的表达情况；即染色强度分数+阳性细胞百分比≥2分为阳性，染色强度分数+阳性细胞百分比＜2分为阴性。

（2）实时荧光定量PCR法检测胎盘组织中GPD1L mRNA的表达 提取胎盘组织中的总RNA，进过一系列的沉淀洗涤干燥等操作步骤后测RNA浓度和纯度。GPD1L mRNA的上 游 引 物：5’-TCGTTAGTTGTCAGAATA-3’，下 游 引 物：5’-TGTTAATCAGAAGAATGTG-3’；扩张反应条件：95℃预变性10 min；95℃变性30 s；58℃退火；72℃延伸30 s；40个循环。采用2-ΔΔCt法计算两组胎盘组织中GPD1L mRNA的相对表达量。

1.3 统计学处理

采用SPSS 21.0软件进行统计学分析。正态分布的计量数据采用均数±标准差（±s）表示，行t检验；计数资料用百分比表示；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

2组孕妇的年龄控制在2岁以内差异无统计学意义（P＞0.05）；孕周、收缩压及舒张压、孕次及产次比较差异有统计学意义（P＜0.05）（见表1）。

表1 两组孕妇一般情况比较

表1 两组孕妇一般情况比较

组别 n 年龄（岁） 孕周（天） 收缩压（mmHg） 舒张压（mmHg） 孕次 产次实验组 50 30.480±5.384 230.500±14.967 184.720±19.336 116.920±9.113 2.440±1.013 1.540±6.676对照组 50 29.440±4.891 276.940±7.665 113.140±7.166 71.280±6.698 1.620±0.923 1.140±0.351 t值 - 1.011 -19.528 24.545 28.535 4.224 3.713 P值 - P＞0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05

2.2 两组胎盘组织中GPD1LmRNA的表达水平及GPD1L蛋白的阳性表达情况

与对照组相比，重度子痫前期胎盘组织中GPD1L mRNA的表达量明显低于对照组（P值＜0.001）；GPD1L蛋白的阳性率（66%，P＜0.05），明显低于对照组（见表2）。

表2 两组胎盘组织中GPD1LmRNA，n=50）

表2 两组胎盘组织中GPD1LmRNA，n=50）

images/BZ_13_201_556_1207_615.png实验组 50 19（38%） 0.439±0.082对照组 50 33（66%） 1.0061±0.137 t值 - - -25.201 P值 - - ＜0.001

3 讨论

重度子痫前期是妊娠期一种特发性疾病，可导致母体全身多脏器功能受累、胎儿生长受限、胎儿窘迫、早产及死产等不良结局，是母婴患病率及死亡率死率升高的主要原因之一[6,7]。目前普遍认为子痫前期是一种多因素、多机制及多通路致病的疾病，其中胎盘功能受损导致的胎盘缺血缺氧是子痫前期发病的关键环节[5]。因此，参与胎盘在低氧环境下调解的缺氧因子是目前国内外学者研究热点之一。

人类的GPD1L基因位于3p22.3染色体上，其编码的由351个氨基酸组成的蛋白质与GPD有同源性，故二者具有相似的生物学功能[8,9]。研究表明，GPD蛋白参与磷酸甘油穿梭，具有调节细胞的增殖凋亡、新生血管的形成、渗透调节及影响能量的产生等功能[10,11]。

Kelly等研究表明[12]，GPD1L蛋白参与调节HIF-1a蛋白的降解过程，而在低氧条件下，这一调节作用被抑制导致HIF-1a蛋白大量累积参与细胞对缺氧环境的适应。冯芝恩等[13]研究证实，GPD1L在肿瘤细胞中同样具有调节HIF-1a的作用进而影响肿瘤细胞增殖分化及凋亡。目前大量研究证实[14-19]，HIF-1a参与子痫前期相关的低氧反应基因表达调节，如血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（sFlt-1）、胎盘生长因子（PIGF）、肿瘤坏死因子、及内皮素-1（ET-1）等，进而影响子痫前期胎盘新生血管的形成及滋养细胞的增殖与分化能力。因此可以推测，GPD1L参与细胞及机体的低氧应答调控。本研究结果显示，与对照组相比，在重度子痫前期患者胎盘组织中GPD1L mRNA低表达且GPD1L蛋白的阳性表达率明显降低，说明胎盘处于缺氧状态及GPD1L参与重度子痫前期胎盘的低氧应答调控。

因此，本研究说明GPD1L可能参与重度子痫前期的发生发展过程，但其具体机制尚需进一步探索及大样本数据的支持。但本研究为重度子痫前的未来提供一个新的思路。