CXCL14与表皮生长因子受体在大肠癌病人血清和组织中的表达及其临床意义

吕建峰，王丽华

(沈阳市肛肠医院，1.肛门病科，2.病理科，辽宁 沈阳 110002)

大肠癌发病率位居恶性肿瘤第三位，且近年来流行病学研究显示，大肠癌发病率呈逐渐年轻化趋势[1]。目前大肠癌的临床治疗主要以手术治疗结合放化疗的综合治疗方式为主，但病人远期生存率并不高，远处转移是治疗失败的主要原因[2]。随着对大肠癌病因以及发病机制的不断深入研究，人们发现了众多肿瘤标志物对大肠癌早期诊断和预后具有着重要的意义[3]。趋化因子(C-X-C 基元)配体14[chemokine (C-X-C motif) ligand 14，CXCL14]是近年来发现的趋化因子家族成员之一，其在乳腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤中的表达已有研究，但研究结果目前尚未一致，而在大肠癌表达中研究较为少见[4]。而表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)在多种恶性肿瘤中，较多研究发现，EGFR与配体结合与肿瘤细胞的增值、浸润转移有关[5]。学者发现，CXCL14与EGFR之间存在一定的通路联系，但其具体机制尚未阐明[3]。本研究探讨CXCL14、EGFR在大肠癌病人血清及组织中的表达及其临床意义，现报告如下。

资料与方法

一、临床资料

选择2016年3月至2018年3月我院收治且术后病理确诊的大肠癌病人87例，术中均保留病人肿瘤组织以及癌旁组织；并随机抽取同期来我院健康体检的50例健康体检者作为对照组。大肠癌组病人中男性46例、女性41例；年龄(60.3±7.3)岁，年龄范围为34～79岁；其中结肠癌53例，直肠癌34例；所有病人术前均未接受相关抗肿瘤治疗。对照组中男性28例，女性22例；年龄(59.5±9.7)岁，年龄范围为30～75岁。两组受试者性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经我院伦理委员会批准，且受试者及家属自愿签署知情同意书。

二、方法

1.血清学指标检测 抽取两组受试者清晨空腹血(大肠癌病人为术前血液)，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组受试者血清CXCL14、EGFR表达情况，检测严格参照试剂盒使用说明书进行。

2.免疫组织化学检测 CXCL14兔抗人多克隆抗体购于美国Abcam公司；EGFR鼠抗人单克隆抗体购于美国Origene公司。将组织标本经10%甲醛缓冲液固定后常规石蜡包埋，连续切片(4 μm)，采用免疫组织化学SP染色法检测组织中CXCL14、EGFR表达情况。使用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组，以试剂盒所附带的阳性切片作为阳性对照。CXCL14以及EGFR均为黄色颗粒状，其中CXCL14定位于胞质，而EGFR定位于胞膜以及胞质。在高倍镜(×400)下随机抽取10个视野，按照细胞着色强度以及着色细胞百分比进行计分，细胞着色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；着色细胞百分比：阳性细胞<5%为0分，阳性细胞5%～25%为1分，阳性细胞26%～50%为2分，阳性细胞>50%为3分。计算上述两项计分，≤3分为阴性，>3分为阳性。

3.研究方法 比较大肠癌病人与对照组受试者血清CXCL14、EGFR表达情况；并分析大肠癌组织、癌旁组织中CXCL14、EGFR表达与病人病理参数之间的关系，病人临床病理参数包括性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、Dukes分期等。

三、统计学分析

结 果

一、两组受试者血清CXCL14、EGFR水平比较

大肠癌组病人血清CXCL14表达水平显著低于对照组(P<0.05)，而大肠癌组病人血清EGFR表达水平显著高于对照组(P<0.05)，见表1。

二、大肠癌组织及癌旁组织CXCL14、EGFR表达比较

大肠癌组织中CXCL14阳性率显著低于癌旁组织(P<0.05)，而大肠癌组织中EGFR阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05)，见表2。

表1 两组受试者血清CXCL14、EGFR水平比较

表2 大肠癌组织与癌旁组织CXCL14、EGFR表达比较 [例(%)]

三、大肠癌组织CXCL14、EGFR表达与病人临床病理相关性

大肠癌组织中CXCL14、EGFR表达在病人Dukes分期、淋巴结转移方面差异均有统计学意义(均P<0.05)，而在病人性别、年龄、分化程度、肿瘤部位方面差异均无统计学意义(均P>0.05)，见表3。

表3 大肠癌组织CXCL14、EGFR表达与病人临床 病理相关性(例)

讨 论

肿瘤微环境的研究是目前肿瘤研究领域的热点之一，肿瘤微环境细胞能分泌某些趋化因子，对肿瘤血管生成、肿瘤细胞的生长、宿主特异性免疫激活等间质细胞间以及肿瘤细胞间基本的生物学过程进行调节[6]。

CXCL14是一种新型的趋化因子成员，研究显示[7-8]，CXCL14除淋巴组织外，在肾、大脑、小肠以及上皮细胞等均有表达。当机体出现炎症反应时，CXCL14表达往往倾向于降低。研究报道[9-10]，CXCL14具有趋化自然杀伤细胞、巨噬细胞、未成熟树突状细胞、单核细胞等多种功能，同时可以抗血管生成。除了在免疫学方面的相关作用外，CXCL14作为一种多功能趋化因子与多种肿瘤的发生、发展密切相关[11]。多项研究显示[12-13]，CXCL14在肺癌、宫颈癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤组织中表达均有所缺失。本研究分析CXCL14大肠癌病人血清及大肠癌组织中的表达变化情况，研究结果显示，大肠癌病人血清中CXCL14水平较对照组受试者出现显著降低(P<0.05)，同时大肠癌组织中CXCL14表达阳性率显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。相关研究报道结果与本研究相似[14]，表明在大肠癌病人血清及大肠癌组织中CXCL14表达受到明显抑制。此外，分析大肠癌组织中CXCL14表达与病人临床病理相关性，结果显示，随着病人Dukes分期升高、淋巴结转移，大肠癌组织中CXCL14表达阳性率明显降低。提示CXCL14可作为大肠癌病人疾病进展及治疗的潜在靶点。

EGFR是一种Ⅰ型受体酪氨酸激酶，由原癌基因表达，在细胞生长、分化以及凋亡中均具有重要作用，EGFR所介导的信号传导具有多向性，在多种恶性肿瘤中呈过表达状态[15]。近年来有学者研究显示，经EGFR通路下游信号分子(PI3K、MEK、ERK)的抑制剂处理各类型非小细胞肺癌细胞株后，癌细胞中CXCL14表达水平出现相应的变化，提示EGF/EGFR信号通路下游分子可能通过自身磷酸化调节CXCL14转录和表达[16]。在本研究中，大肠癌病人血清EGFR水平显著高于对照组受试者(P<0.05)，且大肠癌组织中EGFR表达阳性率显著高于癌旁正常组织(P<0.05)，与相关研究结果相似[17-18]，表明EGFR在大肠癌细胞的恶性增殖过程中发挥了重要作用。此外，随着病人Dukes分期以及淋巴结转移的发生，大肠癌组织中EGFR表达阳性率明显升高。提示EGFR参与促进大肠癌发生发展以及转移过程。

综上所述，大肠癌病人血清及组织中CXCL14低表达而EGFR高表达，血清CXCL14、EGFR水平检测有助于了解疾病进展，值得临床进一步关注。