电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定两性霉素B中的铁

2020-03-20闫秀丽上海浦公检测技术股份有限公司上海201202

化工管理 2020年6期

闫秀丽（上海浦公检测技术股份有限公司，上海201202）

两性霉素B，中文别名有，二性霉素B、节丝霉素B、两性霉素-B、两性霉素乙、芦山霉素、庐山霉素、异性霉素。为橙黄色针状或柱状结晶，无臭无味。不溶于水、无水乙醇、醚、苯及甲苯，微溶于DMF，溶于DMSO。mp.＞443K（溶解）。本品有引湿性，在日光下易破坏失效。两性霉素B为多烯类抗真菌抗生素，通过影响细胞膜通透性发挥抑制真菌生长的作用。临床上用于治疗严重的深部真菌引起的内脏或全身感染。

两性霉素B是从链丝菌培养液中分离得到的多烯大环内酯类抗真菌药，为全身性深部真菌感染的首选药。两性霉素B原料药稳定性较差，研究表明铁含量高是影响其稳定性的主要因素，因此铁含量的控制是两性霉素B杂质控制的重要指标。

两性霉素B国内外都有生产，且技术成熟，但生产药剂的纯度及稳定性有差异，这主要是成品药剂的纯度影响了药剂的稳定性，药剂中的杂质来源有生产工艺中使用的管道，生产场所的环境及试剂、原料的纯度等，存在于药剂中的杂质金属元素会和两性霉素B形成螯合物，使药剂失活，稳定性下降，导致药效下降。

现在对两性霉素B中铁元素的测定来控制药剂的稳定性，着手各生产环节，控制杂质的慎入。

文章研究建立用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定两性霉素B中铁元素，具有检出限低、灵敏度高、简便、高效、快捷等优越性。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

（1）仪器：微波消解仪（上海屹尧科技有限公司，型号WX8000）；美国PE公司ICP-MS Nexion 300X，包括同心雾化器、漩流雾室、石英矩管等。

（2）试剂：铁标准溶液1000mg/L±2%；铁标准溶液中间液(10.00mg/L）：移取上述铁标准溶液（1000mg/L）1.00mL 于100.0mL 容量瓶中，用5%（v/v）硝酸溶液定容至刻度，计算得浓度为10.00mg/L。

1.2 仪器工作条件

表1 微波消解两性霉素B的参数设定Tab 1 Microwave digestion of amphotericin B parameter setting

表2 ICP-MS 的仪器操作条件及参数Tab 2 Icp-ms instrument operating conditions and parameters

1.3 测定方法

（1）样品处理称取0.5g 经粉碎混合均匀样品于微波消解罐中，加入5mL硝酸，旋紧罐盖，放入微波消解仪中，按照表1微波消解仪参数设定，消解。冷却后取出，定容至50mL 容量瓶中，混匀备用。

（2）分析步骤分别移取铁标准溶液中间液(10.00mg/L）0.00、0.05、0.10、0.20、0.40和0.50mL于50mL的容量瓶中，用5%（v/v）硝酸溶液定容至刻度，得浓度为0.0，10.0，20.0，40.0，80.0和100µg/L 的铁元素标准浓度系列，按表2仪器工作条件进行测定，确立标准曲线。

2 结果

2.1 同位素的选择

同位素的选择应按照丰度大、干扰小、灵敏度高的原则最大程度地避免同量易位素与被分析的质谱重叠，铁的测定同位素主要有54Fe、56Fe、57Fe，58Fe，其中54Fe、56Fe受Ar-O干扰，58Fe丰度低，所以也不选用，57Fe丰度高，不受Ar-O干扰，故选用。

2.2 内标元素的选择

为了消除机体效应、接口效应和信号漂移，由于与57Fe质量最接近的内标元素为Sc，且Sc元素的丰度为100%，实验选用Sc内标元素来校正基体效应和接口效应对测定结果的干扰，结果表明Sc 内标溶液有效的调节了因检测时间延长所导致的信号漂移，对测定两性霉素B中铁元素的基体干扰进行了有效补偿。

2.3 方法的线性关系及检出限

在0.00～100µg/L范围内，对标准系列进行测定，每一浓度重复测定3次，取平均值，得校正曲线的相关系数在0.9985～0.9995之间。

连续测定11次样品空白溶液的浓度，得其标准偏差SD，根据公式得检出限（LOD）=3SD，按上述称样量及定容体积，得出方法检出限（mg/kg）为：0.05。

2.4 方法的精密度和准确度试验

称取0.5g 混合均匀样品于微波消解罐中，加入5mL 硝酸，同时加入10.00mg/L 浓度的铁标准中间液0.05mL、0.20mL、0.50mL，即铁元素质量为0.50µg、2.00µg、5.00µg。旋紧罐盖，放入微波消解仪中消解。冷却后取出定容至50mL 容量瓶中，混匀备用。每个添加水平平行7 次，按上述仪器条件分3 天进行测定。测定结果如表3：