高效液相色谱法测定3 种含香附制剂中α-香附酮含量*

吴 丽，周书来

（1. 四川省乐山市食品药品检验检测中心，四川 乐山 614000； 2. 乐山职业技术学院，四川 乐山 614000）

香附味辛、微苦、微甘，性平[1]，主要成分为挥发油、黄酮、生物碱和糖等[2-4]，具有疏肝理气、调经止痛、解热镇痛、抗菌、抗抑郁、抗糖尿病、抑制乙酰胆碱酯酶活性等功效[5]。香附可与多种中药材配伍治疗相关疾病[6-7]，如槟榔四消丸消食导滞，行气泄水；痛经丸温经活血，调经止痛；千金止带丸健脾补肾，调经止带。2015 年版《中国药典（一部）》收载的1 499 种成方制剂[8]和单味制剂中，含香附制剂有107 种，但大多数含香附制剂中香附的质量并未得到有效控制[9]。为全面评价药品质量，建立中药质量标准要求多组分、多靶点质量控制[10]。参阅现行质量标准和文献[11-13]，本研究中以槟榔四消丸、痛经丸和千金止带丸为样品，以α-香附酮为目标成分[14-15]，建立测定α-香附酮含量的高效液相色谱（HPLC）法，为有效提高含香附制剂的质量标准提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1260 型高效液相色谱仪（配备二极管阵列检测器和OpenLAB CDS 工作站，美国安捷伦公司）；XSE205 型DualRange 电子分析天平（精密度为0.000 01 g，瑞士梅特勒-托利多公司）；CQ-100B 型超声波清洗机（上海跃进医用光学器械厂）；ULPZY-250DROMB 型优普系列纯水设备（成都超纯科技有限公司）；ULUP-Ⅱ-10T型优普系列超纯水器（成都超纯科技有限公司）。

1.2 试药

α-香附酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110748-201513，纯度为99.7%）；甲醇（河北百灵威超精细材料有限公司，色谱纯）；磷酸（成都市科隆化学品有限公司，分析纯）；试验用水为纯化水和超纯水；样品信息见表1。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：WelchUltimate LP-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（75 ∶25，V/ V）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：249 nm；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

取α-香附酮对照品23.29 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品贮备溶液；精密量取对照品贮备溶液2 mL，置25 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取3 种含香附制剂样品适量，粉碎，各称取6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 mL 甲醇，超声处理（功率为200 W，频率为40 kHz）1 h，放冷后，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜过滤，即得3 种含香附制剂的供试品溶液。按3 种含香附制剂处方和工艺制备不含香附的阴性样品，同供试品溶液制备方法制成3 种不含香附的阴性对照品溶液。

表1 样品信息

2.3 方法学考察

专属性试验：取α-香附酮对照品溶液、3 种含香附制剂供试品溶液、3 种不含香附的阴性对照品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，色谱图见图1。结果供试品溶液色谱中α-香附酮峰与相邻峰的分离度符合要求，阴性对照无干扰，表明本试验专属性良好。

线性关系考察：精密量取对照品溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为线性第一点溶液；分别精密量取对照品贮备溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，分别置25 mL 容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得线性系列质量浓度溶液；精密量取线性第一点溶液和线性系列质量浓度溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度（C，μg/mL）为横坐标、对应峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程A=33.877C-5.136，r=0.999 9（n=5）。结 果 表明，α-香附酮质量浓度在1.86 ～74.30 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

定量限测定：精密量取线性第一点溶液，加甲醇稀释成系列质量浓度的溶液，按拟订色谱条件进样测定。以信噪比（S/ N）为10 ∶1 计算定量限，α-香附酮定量限为0.23 μg/mL。

精密度试验：取对照品溶液适量，按拟订色谱条件进样连续，测定6 次，记录峰面积。结果α-香附酮峰面积的RSD为0.62% （n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取3 种含香附制剂的样品各1 批[槟榔四消丸（批号为20180402），痛经丸（批号为121809），千金止带丸（批号为20180501）]，依法制备供试品溶液，平行6 份，按拟订色谱条件进样测定，结果见表2。表明方法重复性良好。

表2 重复性和稳定性试验结果（n=6）

图1 高效液相色谱图

稳定性试验：取3 种供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，8，12，24 h 时进样10 μL，按拟订色谱条件测定，记录峰面积，结果见表2。表明供试品溶液在室温条件下放置24 h 内稳定性良好。

加样回收试验：取3 种含香附制剂的样品各1 批[槟榔四消丸（批号为20180402，含量为0.051 9 mg/g），痛经丸（批号为121809，含量为0.049 4 mg/g），千金止带丸（批号为20180501，含量为0.113 8 mg/g）]，取样量分别为表1 中对应量的一半，每个制剂平行取6 份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品贮备液1 mL，依法制备3 种含香附制剂供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算α-香附酮的加样回收率。结果见表3。

表3 加样回收试验结果（n=6）

2.4 含量测定

取3 种含香附制剂样品，依法制备供试品溶液，每批平行制备3 份，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以外标法计算。结果见表4。

表4 样品含量测定结果（n=9）

3 讨论

本试验中，取α-香附酮适量，在240 ～400 nm 波长范围内进行扫描，结果α-香附酮在249 nm 波长处响应值大，可作为测定波长。

本试验中考察了超声前的浸泡条件对α-香附酮提取的影响，结果无差异；考察超声时间（40，50，60

，80 min）对α-香附酮提取的影响，结果超声60 min 基本能提取完全，最终确定提取方式为直接超声60 min。

本试验中涉及的5 个不同厂家5 个批次槟榔四消丸中，α-香附酮的含量为0.051 9 ～0.496 0 mg/g，质量差异大；2 个厂家3 个批次千金止带丸中α-香附酮的含量为0.068 4 ～0.223 0 mg/g，质量差异也大。中药材的次生代谢产物主要由植物的种类和生长环境决定，也受到植物物候期及其代谢节律的调控，可能是导致同一厂家不同批次样品中α-香附酮含量不一致的原因；中成药的质量还与生产工艺有关，导致相同产品、不同生产厂家之间质量存在差异。

综上所述，受多种因素影响，含香附制剂中α-香附酮含量波动范围较大，质量控制十分有必要，对于制订α-香附酮的含量控制限度，样本量远远不够，可考虑收集更多的样本，制订相应质量标准。