复方冰甲乳膏长期毒性试验研究

邱 洪，王 慧，李新顺（解放军第九二五医院药剂科，贵州 贵阳 550009）

复方冰甲乳膏来源于我院皮肤科临床经验方，为中西药结合的复方，该方通过验方配比及工艺筛选出由冰片、硫磺、硼砂、甲硝唑、制霉菌素等按照最佳比例组成[1]，临床具有明显疗效[2]，具有清热燥湿、收敛生肌之功效，主要用于真菌感染引起的手足癣等。本课题组已完成了急性毒性试验研究[3]，为确保临床用药的安全性，以及为进一步的作用机制研究提供客观依据，本课题组对此方进行了长期毒性试验研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

实验动物为SD大鼠，80只，雌雄各半，体质量（220±30）g，由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（黔）2012-001。

1.2 仪器与试药

电子天平（梅特勒托利多上海有限公司）；日本OLYMPUS BH-2显微镜（日本奥林巴斯有限公司）；SC-970全自动血细胞分析仪（瑞士贝肯公司）；日立7170A全自动生化分析仪（美国柯达公司）；HPIAS-1000高清晰度彩色图文病理分析系统、光镜（武汉千屏影像技术有限责任公司）。复方冰甲乳膏（由贵阳中医学院中药制剂研究中心提供，批号：20150126）。

1.3 方法[4-12]

1.3.1 动物分组及给药方法 给药前先让大鼠适应环境，观察3 d大鼠的一般状况，无异常变化，用硫化钡脱毛剂给大鼠背部脱毛，脱毛区域大小为3 cm×3 cm。将SD大鼠（80只，雌雄各半）随机分为4组，每组20只，分别作为复方冰甲乳膏高、中、低三个剂量组及空白对照组。给药组剂量分别为3.00、1.50、0.75 g·kg-1，含药量分别为34.34%、17.17%、8.58%（即为该制剂拟定临床成人日用最大剂量0.05 g·kg-1的60倍、30倍、15倍）。每日上午8：00-10：00时进行皮肤涂抹给药一次，给药方法为用棉签取称量好的相应药物均匀涂抹大鼠背部脱毛区皮肤部位，空白对照组给予等量的赋形剂。每周皮肤涂抹给药6 d，第7天再用硫化钡脱毛剂给大鼠背部脱毛，连续给药13周，后2周停药。

1.3.2 检查指标 每天观察动物一般状况，每周记录各组动物体质量及进食量一次，根据动物体质量增长变化，调整给药量。给药13周时，于末次给药后禁食不禁水12 h，每组取10只动物（雌雄各半）称重后股静脉取血，测定动物血常规指标、血生化指标，同时处死动物进行系统尸解，观察动物各脏器组织有无充血、肿大、出血等异常变化后，再取各鼠主要脏器分别称重，计算脏器系数后及其他脏器组织标本仔细剥离周围脂肪组织等浸入10%甲醛固定，进行病理组织形态学检查。停药期，其余动物停药常规饲养2周，每天进行一般状况观察，每周记体质量及进食量，禁食不禁饮12 h处死动物，检测上述各项指标。

1.3.3 统计学处理 数据以（均数±标准差）表示，采用SPSS17.0统计分析软件进行统计学处理，多组间计量资料及两两比较应用单因素方差分析，P ＜0.05表示具有显著性差异。

2 结果

2.1 复方冰甲乳膏对大鼠一般情况及进食的影响

在连续给药13周及停药2周内，将各给药组与空白对照组比较，观察动物活动、行为、饮食、大便、毛发光泽等，4组动物情况相似，未见明显异常变化。在同一时间内大鼠摄食量亦无明显差异。结果见表1。

2.2 复方冰甲乳膏对大鼠体质量的影响

观察期内，各组雌雄大鼠体质量均逐渐增加，生长发育良好；各给药组与同期空白对照组相比，各时间点大鼠体质量与空白对照组相比无明显差异（P ＞ 0.05）。表明大鼠连续皮肤涂抹给予复方冰甲乳膏13周及停药2周，对雌雄大鼠体质量无明显毒性影响，详见表2。

2.3 复方冰甲乳膏对大鼠血常规指标的影响

复方冰甲乳膏高、中、低三种剂量连续给药13周及停药2周，对大鼠的血常规指标未见显著影响，经统计学处理，P ＞ 0.05。因此，可以认为复方冰甲乳膏较大剂量、较长时间（13周）给药及停药2周，对大鼠的造血功能无显著的毒性影响，见表3。

表1 复方冰甲乳膏对大鼠日平均进食量的影响Tab 1 The effect of compound Bingjia cream on the average daily intake of rats

表2 复方冰甲乳膏对大鼠体质量的影响Tab 2 Effect of compound Bingjia cream on rat body weight

表3 复方冰甲乳膏对大鼠血常规指标的影响Tab 3 Effect of compound Bingjia cream on blood routine index in rats

2.4 复方冰甲乳膏对大鼠血生化指标的影响

复方冰甲乳膏高、中、低三种剂量连续给药13周及停药2周，对大鼠的血生化指标均未见显著影响，大鼠的肝功能及肾功能等各项生化指标数值分别与空白对照组相应数值比较，未见明显差异（P ＞ 0.05），表明复方冰甲乳膏较大剂量连续给药13周及停药2周对大鼠肝功能、肾功能等指标均无显著毒性作用，详见表4。

表4 复方冰甲乳膏对大鼠血生化指标的影响Tab 4 Effect of compound Bingjia cream on blood biochemistry index in rats

表5 复方冰甲乳膏对雌性大鼠主要脏器指数的影响Tab 5 Effect of compound Bingjia cream on main organ index in female rats

表6 复方冰甲乳膏对雄性大鼠主要脏器指数的影响Tab 6 Effect of compound Bingjia cream on main organ index in male rats

2.5 复方冰甲乳膏对大鼠主要脏器指数的影响

复方冰甲乳膏给大鼠皮肤涂抹给药13周和停药2周，系统尸体解剖示：大脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胸腺、甲状腺、胃、肠、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢等脏器的形态、大小、颜色均未发现肉眼可见的变化。与空白组对照组比较，均无明显差异，详见表5、表6。

2.6 复方冰甲乳膏对大鼠重要脏器组织器官病理形态的影响

将复方冰甲乳膏分为高、中、低三个剂量组及空白对照组进行涂抹皮肤给药，连续给药13周及停药2周后解剖各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、大脑、子宫、卵巢、睾丸、附睾、前列腺、甲状腺、气管、食管、胃、主动脉、十二指肠、结肠、膀胱、胰腺、淋巴结、视神经、坐骨神经、皮肤等组织器官，进行组织病理学检查，病理观察结果表明：各给药组大鼠诸多脏器的组织细胞无损害，形态学结果提示该药物对各脏器组织无毒性作用。

3 讨论

本研究对复方冰甲乳膏的长期毒性进行研究，为临床用药提供毒理学依据。复方冰甲乳膏临床推荐成人日用量为0.05 g·kg-1。本实验给予相当于成人日用剂量的60倍、30倍、15倍的高、中、低（3.00 g·kg-1、1.50 g·kg-1、0.75 g·kg-1）剂量，SD大鼠皮肤给药，qd，每周6 d，连续13周，停药2周。在给药期及停药期，复方冰甲乳膏各剂量组大鼠一般状况良好，摄食量、体质量增长正常；血常规指标、血生化指标、主要脏器指数、器官组织形态与对照组比较，均无显著性差异，表明复方冰甲乳膏对大鼠血常规指标和大鼠肝功能、肾功能均无明显影响；解剖大鼠主要脏器未见明显肉眼可见的病理性改变，病理学检查显示，复方冰甲乳膏各剂量组未出现药物致病理性改变，停药2周后，也未出现与药物相关的不良反应。本研究结果表明，给大鼠长期皮肤涂抹复方冰甲乳膏不会引起器官组织形态学变化。