大疱性类天疱疮患者血清中抗BP180抗体水平检测及意义的分析

王翠芹，王艳心，余海，刘利君，李保强

（1.承德医学院附属医院，河北承德067000；2.沧州中西医结合医院，河北沧州061000）

大疱性类天疱疮（Bullous pemphigoid，BP）是一种自身免疫性大疱性皮肤病，多见于60岁以上的老年人，好发于胸腹、腋下、腹股沟及四肢屈侧，多无黏膜的损害。表皮下水疱，疱壁厚，紧张，不易破，尼氏征阴性。其病理表现为表皮下的水疱，疱顶表皮细胞扁平，排列紧密，无棘层松解，疱内及真皮可见嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞浸润。未经治疗的类天疱疮呈慢性、自限性过程，病程数月到数年不等，平均3～6年，大多数病人经治疗后可完全缓解[1]。其发病机制已证明主要与BP180自身抗体有关，本试验通过检测患者及正常对照血清中的抗BP180抗体水平，分析治疗前后变化及与病情的相关性，以探讨血清抗BP180抗体水平的检测在疾病的诊断、病情的监测及指导治疗方面的重要意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 临床资料 收集我院2016年3月—2017年10月住院的大疱性类天疱疮患者23例，其中男14例，女9例；年龄56～86岁，平均（70.69±13.88）岁；所有患者均根据临床表现及组织病理和直接免疫荧光检查确诊。20例正常对照，男3例，女17例，年龄21～60岁，平均（28.5±13.0）岁。

1.1.2 主要试剂 抗BP180抗体检测试剂盒（购自日本MBL公司）。荧光抗体，即异硫氰酸荧光黄（FITC）标记的兔抗人IgG、IgA、IgM和补体C3试剂盒（购自北京中杉金桥公司）。

1.2 方法

1.2.1 病情评分 对20例住院患者治疗前病情进行评分，并对其中16例患者在治疗后也进行病情评分。评分标准：活动性皮损面积及活动性皮损数目进行评估，然后二者相加作为总分。其中活动性皮损面积评分为0分：无活动性皮损（红斑、水疱、糜烂）；1分：面积≤10%；2分：面积10%～30%；3分：面积30%～50%；4分：面积＞50%。前1周内新发皮损数目评分为0分：无活动皮损；1分：活动性皮损≤5个；2分：活动性皮损5～10个；3分：活动性皮损＞10个[2]。

1.2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）收集23例住院患者治疗前的血清，并收集到其中19例患者治疗后的血清，分别采用ELISA法检测血清中抗BP180抗体水平。检测方法按试剂盒说明书进行，如下：将天疱疮患者及对照血清稀释（1∶101）后，按照试剂盒说明书操作，每例均设复孔，在波长450 nm处读取吸光度（A值），以2个孔的平均值作为每例样本的结果，根据公式：单位值（U/mL）=（A450样品-A450标准血清1）/（A450标准血清2-A450标准血清1）×100计算抗体指数，按≥9为阳性，＜9为阴性。

1.3 统计学分析 应用SPSS19.0分析，患者治疗前后的评分分别与治疗前后的BP180 ELISA指数进行Spearman相关性分析，治疗前后的各指标分别进行两相关样本t检验或秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病情评分 治疗前病情评分（5.15±1.42）与治疗后病情评（2.5±1.75）差值为2.00±1.75，经统计分析分差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 大疱性类天疱疮患者治疗前后病情评分

2.2 ELISA 23例患者中抗BP180抗体阳性18例，阴性5例；其中19例患者获取治疗前后血清，其BP180 ELISA指数经治疗后有所变化，经统计学分析治疗前BP180的ELISA指数（74.22±59.06）与治疗后指数（67.93±54.74）差值为3.66±12.71，差异有统计学意义（P＜0.05）。20例正常对照组阳性1例，阴性19例。ELISA检测血清抗BP180抗体的灵敏度为78.26%，特异性为95.00%，见表2。

表2 正常对照及大疱性类天疱疮患者治疗前后血清抗BP180抗体水平的分析

2.3 病情评分与ELISA指数的相关性 将16例患者治疗前后的病情评分分别与治疗前后的BP180 ELISA指数进行Spearman相关性分析，均呈正相关（治疗前r=0.417，P＜0.05；治疗后r=0.818，P＜0.01），见表3。

表3 类天疱疮患者治疗前后血清抗BP180抗体水平与相应病情评分的相关性分析

3 讨论

BP是一种自身免疫性大疱性皮肤病，其抗原（BPAG）有2种，BPAG1即BP230，位于基底细胞内半桥粒附着斑处，以及抗原BPAG2即BP180，而研究发现BP180在水疱形成中起重要作用。BP患者的自身抗体可与BP180抗原反应，BP180可通过将每个表位与特异性免疫球蛋白结合而引起表皮-真皮分离，从而形成水疱，另外抗体与抗原的结合，可激活补体、过敏毒素C3a和C5a形成，肥大细胞脱颗粒，释放嗜酸性细胞趋化因子，吸引嗜酸性粒细胞并黏附到基底膜上，释放溶酶体酶，导致基底细胞膜半桥粒断裂及消失，也可形成水疱，此为BP的主要发病机制[3]。基底膜带沉积的类天疱疮抗体主要为以线状或颗粒带状沉积的IgG及C3，也可见IgA、IgD及IgE，直接免疫荧光被认为是检测类天疱疮患者组织中抗体最灵敏的方法，可作为诊断类天疱疮的金标准[4]。杜文辉等[5]研究中发现BP患者直接免疫荧光结果与临床诊断有较高的符合率，本组患者中也主要是依据病理表现及免疫荧光进行诊断，并且免疫荧光的结果与病理及临床表现有较高的符合率。

BP180是一种跨膜蛋白，氨基酸端位于基底细胞内半桥粒附着斑处，羧基位于基底细胞外的透明板内，细胞外主要是胶原蛋白区，由非胶原区分隔为15段，其刚穿出细胞膜的非胶原区段NCl6a包含了主要的抗原表位，并被大多数BP患者血清所识别。将重组NCl6a蛋白作为包被抗原，用ELISA法检测BP患者血清，Sakuma-Oyama等[6]用此方法在102例BP患者和94例对照的大样本中，验证了其高敏感性和特异性。Tsuji-Abe等[7]也发现抗BP180抗体有很高的灵敏度和特异性，有重要的临床价值。李妍等[8]经多中心随机双盲对照试验检测BP患者血清中抗BP180抗体，亦证明抗BP180抗体检测BP有较高的灵敏性及特异性。研究者采用抗BPl80自身抗体ELISA试剂盒对BP患者治疗前后的血清样本进行了检测，发现有很高的阳性率，且经过治疗皮疹有所好转后，自身抗体水平都明显下降[2，9]。本试验中发现23例患者中18例患者血清抗BP180抗体阳性，且19例患者对比治疗前后的抗BP180抗体指数整体呈下降的趋势，且差异有统计学意义，与其他报道相符。而20例正常人血清进行抗BP180抗体检测仅有1例阳性，这提示抗BP180抗体检测BP有较高的灵敏性及特异性，表明抗BP180抗体血清检测技术在BP的诊断及疗效观察等方面有良好的应用价值。有研究显示BP患者抗BP180抗体的滴度与疾病严重程度相关[2，10]，将BP患者皮损变化进行量化评分，以分值表示病情的严重程度[11]，在治疗前患者的临床评分较高时其抗BP180抗体指数也相应的较高，经治疗后患者临床症状缓解时二者较前均呈下降的趋势，并且均有显著相关性。赵英等[12]研究12例皮损面积＞50%的重症BP患者血清中抗BP180抗体不同阶段的变化规律与病情相关性，发现二者在同时期有显著相关性。本组20例患者治疗后的病情评分较治疗前明显下降，并分别将治疗前后的病情评分与血清中抗BP180抗体指数进行相关性分析，结果显示均有较好的相关性，与其他研究基本相符，这提示患者血清中抗BP180抗体水平有望成为病情监测的指标。

综上所述，ELISA检测血清中抗BP180抗体对于BP的诊断及鉴别诊断有重要的临床意义，尤其是抗BP180特异性抗体检测有较高的灵敏性和特异性，可一定程度上反应病情的变化，对疾病病情的监测和疗效的观察以及指导治疗方案有重要意义，可作为指导临床的重要检测指标。