转录活化因子3、肿瘤转移相关蛋白1、低氧诱导因子-1α在银屑病患者中的表达及意义

吴 丹,刘 敏,王晓哲

(锦州市中心医院 皮肤科，辽宁 锦州121000)

银屑病属于一种慢性炎症性皮肤病，患者主要表现是表皮增殖异常，造成大量干燥片状的皮屑脱落，对人们的生活、工作产生严重的影响，患者负面情绪增加。相关研究显示，银屑病是一种多基因遗传病，受遗传、环境等多种因素影响[1]。MTA1是肿瘤转移相关蛋白家族的重要成员，含有多个酪氨酸激酶，蛋白激酶C是酪蛋白激酶的磷酸化位点，MTA1蛋白通过对信号传导途径进行影响发挥其自身作用[2]。STATs参与多种细胞转化过程，Stat3主要是通过多种配体进行激活，对细胞转化有调节作用，从而抑制细胞凋亡，与细胞增生和分化有紧密的联系[3]。有研究指出，在银屑病皮损中表皮角质层、真皮乳头层发生过度增生，主要是受HIF1α表达异常影响，HIF1α能调控VEGF、COX-2等相关因子，促使真皮乳头层微血管以及表皮角质层增生过度，导致银屑病发病[4,5]。目前关于银屑病发病相关机制尚不明确，本文旨在研究Stat3、MTA1、HIF1α在银屑病患者中的表达及意义，为研究银屑病的发病机制具有重要作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本文选取2017年1月-2019年1月在我院就诊的70例寻常型银屑病患者标本，男38例，女32例，年龄18-58岁，平均年龄(38.5±12.6)岁，病程0.5-5年，平均病程(3.2±1.5)年；其中稳定期40例，进展期30例，斑块型50例，点滴型20例，轻度18例，中度22例，重度30例。同时选取正常皮肤组织标本，男35例，女35例，年龄20-60岁，平均年龄(39.6±11.9)岁。

纳入标准：所有患者均符合中华医学会中关于寻常型银屑病的诊断标准。

排除标准：3周内服用糖皮质激素、维A酸类、免疫抑制剂药物治疗患者；伴有其他系统性疾病患者；免疫功能缺陷患者；妊娠期、哺乳期患者；前1个月进行紫外线照射患者。本文研究患者及其家属均知情，签署知情通知书，经过我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1银屑病患者病情严重程度评估 根据患者皮损面积、严重程度指数(Psoriasis area and severity index，PASI)评分进行评估：轻度患者PASI评分≤15分，中度患者PASI评分<30分，重度患者PASI评分≥30分。

1.2.2免疫组化染色 将搜集到的标本在液氮中备用，组织切片的厚度为5 μm，恒温箱设置温度为58 ℃，烘烤时间为2 h，在二甲苯中进行脱蜡处理30 min，之后浸在梯度乙醇中各5 min，再用无菌蒸馏水洗涤5 min。加入柠檬酸钠抗原修复液在沸水中水浴20 min，冷却到室温采用PBS冲洗3次，每次持续5 min。分别滴加Stat3、MTA1、HIF1α抗体(1∶200)，在4℃的湿盒中过夜保存，第2 d将湿盒取出后复温处理1 h，采用PBS洗片3次，每次持续5 min。之后加入二氨基联苯胺(1∶50)进行显色处理1 min，最后加入蒸馏水反应终止。加入苏木素给予复染，盐酸乙醇分化后，采用梯度乙醇进行脱水，采用二甲苯冲洗片3次一直到透明，采用中性树脂封片处理，显微镜下观察免疫组化染色情况。

1.2.3结果判定 每份标本在镜头下随机选择5个视野，所有病理切片均由2位以上经验丰富的医师采用双盲法进行确诊。根据染色程度和染色细胞百分比进行评分：不着色0分，淡黄色1分，黄色2分，棕黄色3分；着色细胞数≤5% 0分，6%-25% 1分，26%-50% 2分，≥51% 3分。阴性(-)得分≤1分，弱阳性(+)得分2-3分；中度阳性(++)得分4-5分；强阳性(+++)得分≥6分。

1.3 统计学处理

采用SPSS20.0统计软件进行分析，其中计数资料采用百分率描述，组间比较采用χ2检验，P<0.05则说明差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Stat3、MTA1、HIF1α在银屑病患者中的表达比较

如表1所示，银屑病组织中Stat3、HIF1α阳性表达率高于正常皮肤组织，MTA1阳性表达率低于正常皮肤组织，具有统计学差异(P<0.05)。

表1 Stat3、MTA1、HIF1α在银屑病患者中的阳性表达比较(%)

Stat3主要在银屑病组织细胞层、颗粒层角质形成细胞的细胞核中表达，正常皮肤组织中无表达。MTA1主要在正常皮肤组织细胞核中表达，部分在细胞质中也有表达，为棕黄色颗粒状，在银屑病组织中表达较少。HIF1α主要在银屑病组织细胞核中表达，显示为棕黄色颗粒，在正常皮肤组织中表达较弱。

2.2 Stat3、MTA1、HIF1α表达与银屑病患者性别相关性研究

如表2所示，男性患者与女性患者Stat3、MTA1、HIF1α阳性表达比较，无统计学差异(P>0.05)。

2.3 Stat3、MTA1、HIF1α表达与银屑病患者临床分期的相关性研究

如表2所示，进展期患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于稳定期患者，MTA1阳性表达率低于稳定期患者，具有统计学差异(P<0.05)。

表2 不同临床分期Stat3、MTA1、HIF1α表达比较(%)

2.4 Stat3、MTA1、HIF1α表达与银屑病类型相关性研究

如表3所示，点滴型患者与斑块型患者Stat3、MTA1、HIF1α阳性表达比较，无统计学差异(P>0.05)。

表3 不同银屑病类型Stat3、MTA1、HIF1α表达比较(%)

2.5 Stat3、MTA1、HIF1α表达与银屑病患者疾病严重程度相关性研究

如表4所示，重度患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于轻度、中度患者，MTA1阳性表达率低于轻度、中度患者，具有统计学差异(P<0.05)。中度患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于轻度患者，MTA1阳性表达率低于轻度患者，具有统计学差异(P<0.05)。

表4 不同严重程度Stat3、MTA1、HIF1α表达比较(%)

3 讨论

银屑病病理特点是，细胞因为过度增殖，分化异常，角化不全，导致表皮角质形成，患者表皮和真皮之间有炎性细胞浸润，并且在真皮乳头层中微血管发生扩张、增生以及迂曲[6]。有大量研究证实，微血管变化在银屑病患者中出现较早，但是消失也最晚，具有持续存在、复发等特点，与银屑病发病紧密相关[7,8]。微血管变化是导致银屑病发病主要原因，在银屑病皮损中发现，微血管的产生主要作为启动因素，受细胞增殖、缺氧过度的影响[9]。皮损发生过程中，角质形成细胞因为增殖过度，导致氧消耗量增加,随着表皮肥厚促进氧供障碍形成，发生局部缺氧，以及造成缺氧适应性改变[10]。

HIF1α属于一种核蛋白具有转录活性特点，在缺氧环境下大量产生，促使细胞能快速的适应缺氧环境，对氧供、能量稳定发挥作用[11]。HIF1α是HIF1主要的活性形式。涂晨[12]研究指出，在银屑病患者皮损表皮角质细胞、真皮浅层以及乳头层的毛细血管内皮细胞中显示过度表达。本文研究指出，银屑病组织中HIF1α阳性表达率较高，说明HIF1α在银屑病中高表达，参与银屑病发生，与王杰[13]研究结果保持一致。MTA1蛋白是一种重要的核调节因子，在信号传导通路中发挥作用，参与多种恶性肿瘤侵袭、转移过程[14]。本文研究显示，MTA1在银屑病组织显示低表达，说明MTA1表达异常与银屑病发病有关。Stat3可作为一种癌基因，在多种肿瘤中被异常激活，参与肿瘤细胞增殖、凋亡、分化。刘凤杰[15]指出，银屑病患者受损皮肤组织中Stat3表达水平较高，受IL-10等因子的影响，被激活。本文研究中，Stat3在银屑病组织中阳性表达率较高，说明Stat3可能参与银屑病发生。杨璐婷[16]认为，在银屑病皮损角质细胞的细胞核中，Stat3表达水平升高，本文研究结果与其保持一致。分析原因：Stat3能促进细胞增殖，参与银屑病角质形成细胞过度增殖过程。

本文研究证实，进展期患者Stat3、HIF1α阳性表达率升高，MTA1阳性表达率降低，说明Stat3、MTA1、HIF1α表达与寻常型银屑病患者临床分期有关。Abdou AG[17]研究也指出，进展期银屑病患者HIF1α表达升高。与本文研究一致。银屑病发生缺氧适应性反应，导致HIF1发生活化，HIF1α表达升高，参与银屑病发病过程[18]。本文中，重度患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于轻度、中度患者，MTA1阳性表达率低于轻度、中度患者。说明Stat3、MTA1、HIF1α表达水平与银屑病患者并且严重程度有关，随着患者病情加重，Stat3、HIF1α表达不断升高，MTA1表达不断降低，与病情严重程度呈正相关。