麝香保心丸对高尿酸血症大鼠内皮功能的影响

研究证实，高尿酸血症不仅可导致关节痛风发作和尿酸性肾结石，而且是独立的心血管危险因素，可引起血管内皮功能异常、促进动脉粥样硬化、血管功能异常和血管钙化等[1-3]。麝香保心丸具有强大的血管保护功能，通过改善内皮功能、抑制炎症反应及血管钙化等发挥作用，可有效防治血管功能异常和重塑性疾病[4-5]，能否改善高尿酸血症导致的内皮功能障碍尚不明了。因此，本实验旨在观察麝香保心丸对高尿酸血症大鼠模型内皮功能的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要药品及仪器来源 8周龄雄性SD大鼠和鼠尾动脉测压仪由汕头大学医学院实验动物中心提供，2%氧嗪酸钾饲料由北京华阜康生物技术有限公司配制；麝香保心丸由上海和黄药业有限公司提供；Beckman Coulter AU5800生化仪由美国生产，由汕头大学医学院第一附属医院检验科检测；血糖仪由美国雅培提供；一氧化氮(NO)试剂盒由北京华英生物研究所提供；内皮型一氧化氮合酶(eNOS)一抗、二抗及DAB显色试剂盒由武汉博士德提供。

1.2 高尿酸血症大鼠模型制备 取16只雄性SD大鼠为高尿酸血症组，用2%氧嗪酸钾饲料喂养6周后进行血清尿酸水平检测，确定成功建立高尿酸血症模型。另取雄性SD大鼠8只作为健康对照组；将高尿酸血症大鼠随机分成高尿酸血症组和高尿酸血症+麝香保心丸组，每组8只，高尿酸血症+麝香保心丸组予麝香保心丸25 mg/(kg·d)灌胃。饲养4周后取材，分离血清、血浆，取主动脉制作蜡块。

1.3 血清尿酸的测定 取血清标本送汕头大学医学院第一附属医院检验科，用苦味酸法检测尿酸浓度。

1.4 血浆NO含量的测定 取血浆标本送北京华英生物研究所，用硝酸还原酶法测定血浆NO含量。

1.5 免疫组织化学法检测主动脉组织eNOS的表达 取大鼠主动脉，石蜡切片，常规脱蜡入水，封闭非特异性抗原，滴加一抗过夜孵育，滴加二抗，DAB显色，苏木素复染。详细步骤按试剂盒说明书操作。

2 结 果

2.1 6周后高尿酸血症大鼠模型血清尿酸和血浆NO水平比较 用2%氧嗪酸钾饲料喂养大鼠6周后，与健康大鼠比较，血清尿酸水平明显升高，提示高尿酸血症模型建立成功，同时血浆NO含量有所下降，提示高尿酸血症大鼠内皮功能受损。详见表1。

表1 6周后大鼠血清尿酸和血浆NO含量比较(±s)

与健康对照组比较，1)P<0.01

2.2 10周后大鼠血清尿酸和血浆NO水平比较 采用麝香保心丸干预后，大鼠血清尿酸水平无明显改善，但血浆NO含量明显上升。详见表2。

表2 10周后大鼠血清尿酸和血浆NO含量比较(±s)

与健康对照组比较，1)P<0.01；与高尿酸血症组比较，2)P<0.01

2.3 大鼠主动脉组织eNOS的表达比较 与健康对照组比较，高尿酸血症组大鼠主动脉组织eNOS的表达明显下调，用麝香保心丸干预后，eNOS表达增多。详见图1。

图1 大鼠胸主动脉eNOS免疫组化染色(×40)

3 讨 论

高尿酸血症是指尿酸代谢障碍所致血清尿酸水平增高或尿酸盐沉积致痛风发作为主的临床表现。随着人们生活方式和膳食结构的改变，该病的患病率明显增加，而发病年龄呈明显年轻化趋势。进一步研究表明，尿酸是独立的心血管危险因素，可促进动脉粥样硬化、血管钙化的进程，涉及可能的机制与尿酸损伤血管内皮细胞并使NO合成减少、诱导炎症反应、氧化应激和促进血管平滑肌细胞增殖和迁移等相关[2，6-7]。血浆NO主要通过血管内皮细胞合成分泌，左旋精氨酸经过NO合成酶作用后生成NO，其血浆浓度可直接反映血管内皮功能情况。本研究观察到高尿酸血症组大鼠血浆NO的表达较健康对照组大鼠明显减少，提示血管内皮功能受损。用麝香保心丸干预后，高尿酸血症大鼠血浆NO水平明显增加，血管eNOS的表达亦同步上调，提示血管内皮功能改善。用麝香保心丸干预后，大鼠血清尿酸水平与单纯高尿酸血症组比较差异无统计学意义，提示麝香保心丸无降尿酸作用，并且其改善内皮功能是独立于降尿酸作用之外的。

麝香保心丸在临床上常用于治疗冠心病，对改善心绞痛、增加冠心病病人活动耐量等有显著效果。研究发现麝香保心丸可改善血管内皮功能、稳定逆转动脉粥样硬化斑块、促进治疗性血管新生、抑制炎症反应和血管钙化的发生发展等[8-9]，但是否改善高尿酸血症诱导的内皮细胞功能损伤尚不清楚。为此，本实验观察了麝香保心丸对高尿酸血症动物模型血管内皮细胞功能的影响，结果显示，麝香保心丸可改善高尿酸血症大鼠诱导的血管内皮功能，该作用不依赖降尿酸效应，这将为血管内皮损伤的防治提供新的思路，涉及的信号转导通路尚需进一步研究证实。