陕西省绥德县规模羊场羊布鲁氏菌病流行病学研究

谢印乾，王桂花，康京丽

（1.陕西省动物疫病预防控制中心，陕西西安 710016；2.渭南市动物疫病预防控制中心，陕西渭南 714000；3.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

布鲁氏菌病（brucellosis，以下简称布病）是由布鲁氏菌引起的人兽共患传染病，可导致牲畜流产、不孕、繁殖成活率低、使役能力下降、产肉量减少、产奶量下降等，会对畜牧业发展造成严重影响[1]。该病严重危害公共卫生安全，严重威胁人类身体健康，同时严重影响动物产品消费，已成为全球关注的公共卫生问题和社会问题[2]。

绥德县羊存栏约15 万只，其中存栏60 只以上规模场的存栏量占总存栏的75%以上；动物交易频繁，拥有大型牛羊交易市场5 个，来自山西、内蒙古、辽宁等地的羊只多在此地交易，是陕北地区牛羊交易的主要集散地。近5 年来，该县累计报告人间布病病例300 多例，为榆林市最高。为有效控制布病流行，多年来，当地采取了“免疫+监测+扑杀”的综合防控措施。但由于存在以下问题，导致监测准确性及精确性差，扑杀效率低下，难以有效防控：免疫后监测时间不当，难以区分免疫抗体和感染抗体；没有充分考虑羔羊和成年羊的易感性，监测目标群以羔羊为主，存在选择性偏倚；没有考虑检测试验的敏感性和特异性；抽样随机性差且抽样量小；缺乏风险因素研究，导致防控措施盲目、针对性差。

本研究旨在掌握绥德县羊布病群体水平流行率，通过描述布病在绥德县的空间分布，寻找群间传播风险因素，从而为提出科学、有效的控制措施提供依据。

1 材料与方法

2015 年9—10 月，采用横断面研究方法，对绥德县存栏＞60 只的规模羊场进行抽样及问卷调查，共涉及253 个规模羊场，其中存栏501～1 000只的62 个，1 001～2 000 只的28 个，＞2 000 只的15 个。

1.1 目标群和研究对象

绥德县每年9—10 月对羊群进行S2 布鲁氏菌疫苗集中口服免疫。因布鲁氏菌疫苗口服免疫6 个月后难以检出免疫抗体，以及6 月龄以内羔羊对布鲁氏菌病不易感[3]，所以本研究选择全县存栏60只以上的规模羊场为目标群，并以6 月龄以上的未免疫羊和免疫6 个月以后的羊为研究对象。

1.2 实验室检测

将现场采集的全血样品置于一次性采血器中送至实验室分离血清，置-20 ℃冷冻保存。对采集的血清样品，先用虎红平板凝集试验（RBPT）进行初检，对检测阳性的再用试管凝集试验（SAT）进行复检。两个试验检测均为阳性的认定为血清学阳性样品，至少检出1 个血清学阳性样品的养殖场定义为阳性场。所有检测试剂均购自青岛易邦生物工程有限公司，操作过程严格按照说明书进行。

1.3 诊断试验特性

据相关资料[4]显示：针对个体水平，RBPT 试验的敏感性为0.95≤Se≤1，特异性为0.8≤Sp≤1；SAT 试验的敏感性为0.85≤Se≤1，特异性为0.9≤Sp≤1。根据抽样量计算需要，RBPT 与SAT 垂直试验的敏感性和特异性分别为0.9≤Se≤1，0.9≤Sp≤1；根据真实流行率估计需要，RBPT 与SAT 垂直试验的敏感性和特异性分别为0.81≤Se≤1，0.99≤Sp≤1。

1.4 抽样策略和抽样量计算

使用多阶段随机抽样策略[5]，首先抽取羊场，然后抽取羊场内的羊个体。

群体水平抽样框为全县253 个存栏＞60 只的规模羊场，抽样数量按95%置信水平（CL），20%预期流行率（p）和6%可接受误差（e），用估计流行率方法，按公式（1）计算，共需要抽取102 个场。

个体水平抽样数量根据群内研究对象数量，按95%置信水平（CL），5%预期流行率（p），用发现疫病方法进行计算，按照公式（2）计算需要的个体抽样量。

1.5 空间地理数据收集

布病群体水平流行率的空间分布分析，通过GIS 软件及绥德县的电子地图完成。GIS 软件及绥德县的电子地图，由联合国粮农组织跨境动物疫病应急中心中国办公室（FAO ECTAD China）提供。

2 数据分析

2.1 流行率估计

群体水平表面流行率（APh）为阳性群数除以抽样总群数，群体水平真实流行率结合群敏感性（HSe）和群特异性（HSp）计算得到，TPh=（APh+HSp-1）/（HSe+HSp-1）。真实流行率的95%置信区间（CI）通过公式（3）进行计算。

式中：p是真实流行率，Z为标准正态分布中概率p=0.05 所对应的值，n为抽样数量。

2.2 风险因素分析

结合当地的饲养管理情况，提出群间传播风险因素假设，并设计调查问卷[6-7]；采样时通过现场访问完成问卷调查。结合所采集样品的实验室检测结果，用Epi info7 进行发病风险因素分析。

3 结果

3.1 场群流行率

3.1.1 群敏感性和特异性 根据预期流行率、每个场平均采样量及检测试验的敏感性和特异性，分别按照公式（4）和公式（5）计算抽样场的群敏感性和群特异性[5]。

式中：p是群内预期流行率5%，Se 是试验敏感性，Sp 是试验特异性，n为群内平均抽样数量。计算得到群敏感性HSe=84.4%，群特异性HSp=69.5%。

3.1.2 群流行率 在102 个养殖场中，共采集血清样品3 693 份（平均每场36.2 份），其中来自49 个场（48.04%）的169 份样品（4.58%）被检测为布病血清学阳性。根据群敏感性和群特异性，计算得到群体水平的真实流行率为32.6%（95%CI：23.5%～41.6%）。

3.2 风险因素分析

对调查问卷中涉及的每个假定风险因素进行单因素分析[9]，结果见表1。分析发现，外购混养、流产物随意丢弃、经常消毒、近1 年内有羊只引进、生产区与生活区不隔离以及2011 年后建场的养殖场布病发病风险率高（P＜0.05）。

表1 风险因素的单因素分析结果

3.3 空间分布

绥德县布病群阳性率的空间分布见图1。空间分布显示，布病群阳性率较高的主要分布在以田庄、张家砭为主的西南部乡镇和以薛家河、中角为主的中、北部乡镇。

图1 绥德县各乡镇羊布病群阳性率空间分布

4 讨论

绥德县位于陕西北部，与山西省交界，素有羊肉消费的习俗，羊饲养量大；拥有多个牛羊活畜交易市场，是榆林市和山西省牛羊交易的主要集散地，动物流通频繁，市场交易量大；饲养、羊绒生产、屠宰和市场流通等环节，人暴露于布鲁氏菌的潜在风险较高。近年来，该县人间布病病例数量持续上升，人的健康受到严重威胁。开展布病流行病学研究，对于寻找科学的布病防控方法具有重要的参考意义。

本研究是首次在绥德县用概率抽样的方法来了解羊病血清学流行率。研究发现，该县羊病群体水平流行率高达32.6%（95%CI：23.5%～41.6%），说明近年来该县推行的免疫、检疫政策以及基于风险的监测、扑杀措施，对布病的控制显得无力。这一方面，是因为加强免疫和检疫政策的落实不到位，动物免疫密度达不到要求，没有严格限制非免疫区动物和患病动物的引进；另一方面，是因为长期以来只过度关注个体流行率，但受群体内抽样方法和抽样量的局限，群内部分阳性个体会被漏检，导致阳性动物在群内长期存在、持续传播，因而虽然花费了巨大代价去扑杀阳性个体，但流行率并没有得到有效降低。

羊布病主要靠胎盘和直接接触传播，因此较高的群体流行率提示，感染群与易感群之间有很高的接触机会。研究发现羊场感染布病的主要风险因素包括，外购混养、流产物随意丢弃、近1 年内有羊只引进、生产区与生活区不隔离以及2011 年后建场，并发现“消毒”为“流产物处理不当”的混杂因素。在实际生产中，养殖户往往只通过加强消毒来控制病原传播，而忽视对流产物的无害化处理，因而难以达到控制布病的目的。这需要加强引进动物的检疫、隔离，积极推广自繁自养的生产模式；对生产区和生活区进行有效隔离，切断疫病群间传播途径；加强流产物无害化处理，避免随意丢弃。既要防止病原在群内持续传播，又要避免传染其他羊群。

本研究考虑了血清学检测试验的敏感性和特异性，群阳性预测值和阴性预测值分别为97.16%和80.30%。如果不考虑试验特性，就会低估群体流行率，因而基于表面流行率的控制措施会把一些感染群认为是假阴性，所以提高检测试验敏感性或根据阳性场空间分布、风险因素管理水平以及人间病例聚集特征，实施基于风险的控制策略对绥德县布病防控具有重要意义。

本研究设定群内预期流行率为5%，用发现疫病方法进行群内个体抽样量计算，导致群内流行率低于5%的场群内的阳性个体难以被发现而被认定为阴性场，但考虑到布病在场群内传播快，一旦有病原会蔓延迅速的特点，这对阳性场的鉴别影响不大。场群抽样量以全县的场群数量为抽样框进行计算，然后根据各乡镇场群比例进行配额，因而存在代表性不足的局限性，在空间分布分析中会造成一定偏倚；同时，场群抽样采取简单随机的抽样方法，在抽样框不大的情况下，没有对抽样数量作进一步校正，因而对样品的代表性会有一定影响。由于存栏60 只以上规模场存栏的羊占该县总存栏的75%以上，因此本研究只选取了存栏60 只以上的规模场为目标群，所得到的流行率和风险因素也仅适用于该目标群，对存栏小于60 只的小养殖场户的研究还有待下一步开展。