清胞衣颗粒对流产后大鼠子宫组织的病理影响

刘墨林 崔玮麟 张童山 李 渊 王杰琼* 王 平

（1 山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；2 山东中医研究院中药药理实验室，山东 济南 250000）

目前，我国人工流产已达到较高数量，有研究显示，我国每年约有1000 万例人工终止妊娠［1］，其中重复流产率更是高达50% 以上［2］，且流产妇女的年龄有年轻化趋势［1］。子宫为妇女生产前后变化最大的器官，常出现的病症有产后子宫收缩不好、有压痛、恶露持续不断等［3］。由流产所导致的最严重问题是子宫出血量大、恢复时间久和恢复不完全等［4］。产后子宫功能的恢复对于产后妇女来说是尤为重要的［5］。清胞衣颗粒中包含赤芍、蒲黄、桃仁、益母草等中药［6］。目前已知清胞衣颗粒主治血瘀内停胞宫证，对药物引起的不完全流产有较好的医治效果，但对于此药物的作用机制与规律仍然不清。本实验旨在通过分析子宫系数和子宫组织HE 病理染色切片，观察清胞衣颗粒对大鼠流产后子宫的病理影响和修复功能。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SD 大鼠60 只，均为雌鼠，体质量（200±20）g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，大鼠饲养于23～25 ℃的环境中，自由进食、摄水。动物许可证号：SCXK（京）2016-0006。

1.1.2 实验药品及试剂 米非司酮混悬液，由上海新华联制药有限公司提供，批号：c019170901；米索前列醇，由浙江仙琚制药股份有限公司生产，批号：170903；清胞衣颗粒，自制。益母草颗粒，由河南辅仁堂制药有限公司生产，批号：20161102；蒸馏水；4% 甲醛溶液，由莱阳市康德化工有限公司生产，批号：20140326；无水乙醇，由国药集团化学试剂有限公司生产，批号：100092683；二甲苯，由国药集团化学试剂有限公司生产，批号：10023418；苏木素染液套装，由武汉谷歌生物科技有限公司生产，批号：G1005；盐酸，由国药集团化学试剂有限公司生产，批号：10011008；氨水，由国药集团化学试剂有限公司生产，批号：10002118；中性树胶，由国药集团化学试剂有限公司生产，批号：10004160。

事实上，卡夫卡心中的父亲形象已经超越了一般的伦理概念范畴而开始具有宗教学、社会学等多个层面的含义，他把对父亲的感受和现实世界的运行机制关联起来，由此在他心中也形成了一种蕴含着极其复杂的社会文化内涵和个人情感的体验。卡夫卡的父亲形象与他所认知的世界有着深远的联系，对于父亲形象的描绘和建构，来自于卡夫卡作为一个敏感作家的亲身生存体验，也来自于他的文化记忆和积淀，成为了一个关于现实世界的绝妙比喻。这也是为什么在卡夫卡的许多作品中，世界就像是一个没有人能够窥视到全貌，弄清楚结构的错综复杂的迷宫，人们永远无法真正接近它，却又无时无处不感受到它的威严和压迫。

1.1.3 仪器 脱水机，型号JJ-12J，由武汉俊杰电子有限公司生产；包埋机，型号JB-P5，由武汉俊杰电子有限公司生产；病理切片机，型号RM2016，由上海徕卡仪器有限公司生产；冻台，型号JB-L5，由武汉俊杰电子有限公司生产；组织摊片机，型号KD-P，由浙江省金华市科迪仪器设备有限公司生产；烤箱，型号GFL-230，由天津市莱玻瑞仪器设备有限公司生产；载玻片及盖玻片，型号10127105P-G，由江苏世泰实验器材有限公司生产；正置光学显微镜，型号Nikon Eclipse E100，由日本尼康生产；成像系统，型号NIKON DS-U3，由日本尼康生产。

现今流行一句话，“这是个看脸的社会”，并为此专门诞生了新的词汇“颜值”，以此来评价和划分人的不同。按说这已经不是一天两天的现象了，各种方兴未艾的选美大赛，颜值担当的明星所从事的演艺娱乐的暴利行业，乃至于招工用人明确标出的要求“形象好、气质佳”，更不消说找对象的热门标准“高富帅”或“白富美”。对于颜值的过分迷恋和执著，渐成为整个社会的嗜好。这种对人外表要求的价值观波及开来，流行得那么自然自乐，似乎有以表象掩盖实质之嫌，又有以小搏大之虞。

1.2.1 流产模型的制备 取成年健康的大鼠，雌雄以2∶1合笼使其自行交配，此后每24 h 阴道涂片镜检一次，直至镜检结果见精子，即雌鼠受孕第1 天，此后正常自由进食饮水。第7 天将动物（雌性大鼠）随机选取10 只做为正常对照组，其余大鼠均继续造模。要进行造模的大鼠均灌胃喂予剂量为8.3 mg/kg 的米非司酮混悬液（早上8：30）和剂量为126 mg/kg 的米索前列醇（下午4：30）3 d，此时造模后的大鼠即为所需的流产模型，继而将流产模型的大鼠分为模型对照组、益母草组和清胞衣颗粒高、中、低剂量组，共6 组，每组10 只并分组给药。每组大鼠均等体积灌胃给药，共观察5 d。最后一次给药30 min 后处死，取子宫待测相关指标。

综合上述各种理论，Doolittle指出尽管就合作学习的构成还未完全达成一致，但其中五大要素是至关重要的：1）积极的相互依靠，2）面对面的互动，3）个人的义务4）小组&人际沟通技巧，5）团队自我评估。

1.2.2 子宫组织病理学观察 本实验采取子宫组织进行HE染色切片法观察不同组中药物对大鼠产后恢复的影响。取出大鼠左边子宫阴道端，用甲醛溶液固定好后制成HE 石蜡染色切片，放于电镜下做病理学观察。

2.1 子宫系数 益母草组的子宫系数与空白对照组相比差异有显著统计学意义（P＜0.01）；益母草组和清胞衣颗粒中剂量组的子宫重量与模型组相比差异有统计学意义（P＜0.01），清胞衣颗粒低剂量组的子宫系数与模型组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1、图1。

综上所述，正常对照组的大鼠子宫内膜为单层上皮细胞，各组织正常，无炎症反应；模型组大鼠的子宫内膜较厚，固有层水肿，呈现出有中性粒细胞的炎症细胞浸润；其余各组的子宫内膜均为单皮上层细胞。但除清胞衣组中的大鼠子宫组织形态和各项数据正常外，其他组别都有不同程度的水肿和炎症反应。见图2。

1.2 实验方法

2 结果

HE 染色切片制作基本步骤如下：用10% 中性甲醇溶液固定子宫组织；用浓度逐渐升高的乙醇进行脱水；浸入石蜡，60 ℃包埋；切片；30% 酒精初展；将标片放置于烤箱中约30 min；脱蜡，用浓度从低到高的乙醇和水冲刷；苏木染色；查看蓝化情况，返蓝；伊红染色；脱水、封片；显微镜镜检，图像分析。

表1 清胞衣颗粒对流产大鼠子宫系数的影响 （±s）

表1 清胞衣颗粒对流产大鼠子宫系数的影响 （±s）

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

图1 各组大鼠的子宫系数差异分析

第一种情况是以政策需要代替正当利益。《农村资金互助社管理暂行规定》和《关于小额贷款公司试点的指导意见》中明确把“改善农村地区金融服务”作为目标，这虽然在客观上有利于农村资金互助社和小额贷款公司设立、运行，一定程度上保护了融资主体的利益，但利益的保护本身不是目的，而只是实现政策目标的手段。也正因为如此，监管者对这些融资组织的准入进行严格限制，融资主体的正当利益保护不充分。

1.2.3 统计学方法 子宫系数用SPSS 软件处理，采取单因素方差分析，实验数据以（±s）表示，组间均数比较采用t 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.2 子宫组织形态学 正常对照组：由黏膜层可见子宫内膜为单层上皮细胞；固有层胶原含量丰富，结构紧密，浆膜层结构正常，组织未见其它明显异常。模型组：可见局部子宫内膜较厚，为复层上皮；少量上皮细胞及腺上皮细胞点状坏死，胞核固缩深染或碎裂溶解，胞质嗜酸性增强，固有层水肿，结缔组织疏松，并伴有中等量中性粒细胞等炎症细胞浸润。益母草组：组织黏膜层可见子宫内膜上皮细胞为单层上皮，固有层胶原含量丰富，结构紧密，并伴有中性粒细胞等炎症细胞浸润，肌层亦可见少量炎症细胞浸润。清胞衣颗粒高剂量组：组织黏膜层可见子宫内膜上皮细胞为单层上皮，并可见少许内膜上皮细胞及较多腺上皮细胞坏死，胞核固缩深染或破裂消融，胞质嗜酸性加强；固有层胶原含量丰富，结构紧密，并伴有较多以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润。清胞衣颗粒中剂量组：组织黏膜层可见子宫内膜上皮细胞为单层上皮，未见明显炎症反应；组织未见其它显著异样。清胞衣颗粒低剂量组：组织黏膜层可见子宫内膜上皮细胞为单层上皮，可见少量内膜上皮细胞及腺上皮细胞坏死，胞核固缩深染或碎裂溶解，胞质嗜酸性增强；固有层可见较多炎症细胞浸润，局部固有层水肿，结缔组织疏松；组织未见其它显著异样。

图2 药物流产大鼠HE 子宫染色切片（HE×100；HE×200）

3 讨论

清胞衣颗粒的主要成分有赤芍、蒲黄、桃仁、益母草四味中药。研究表明，赤芍中的主要有效成分——赤芍总苷可减少血小板和红细胞的集聚，并减少血栓形成的概率［7-8］。蒲黄的功效为止血化瘀通淋，经研究，证明其可兴奋子宫收缩、降血脂［9-10］。桃仁可通过改善血流动力学，实现活血化瘀的作用［11］。益母草是一种活血化瘀的常用药，多用于治疗产后瘀血腹痛、血液流通不畅、月经紊乱等症，目前发现起主要作用的化学成分为生物碱类、二萜类、环形多肽类等［12］。因此对于流产后子宫恢复具有良好的疗效。

要想在实际工作中实现对生产规模的提升，就应该进行必要的产业化生产，只有这样才能在实际工作中实现对农产品成本的显著控制与降低。而要想达成当前的工作目标，培育和发展新型经营主体是一项十分重要的环节。当前很多新型经营主体对于这一工作还缺乏必要的认识，导致出现了很多问题。

本实验结果表明，模型组对比空白对照组的子宫系数显著升高，说明本实验成功造模，模型组大鼠药物流产后确有恶露排出不尽的病症；益母草组、清胞中组和清胞低组比模型组的子宫系数显著降低，这说明清胞衣颗粒对流产模型大鼠有促进子宫收缩的作用，可促进产后恶露排出和子宫内膜脱落。根据HE 染色切片图像分析，清胞中组的各项指标与正常对照组基本无异，说明清胞衣颗粒对流产的大鼠子宫有明显的修复作用。而且，清胞衣颗粒的剂量对修复程度也起到关键作用，本实验中，清胞中组（0.4 g/kg）的子宫病理切片并未出现细胞坏死与炎症反应，表明使用中剂量清胞衣颗粒的修复效果明显优于其余组别。

彭晋［13］、王慧［14］等的研究表明，益母草组子宫组织病理切片显示子宫内较干净，轻度蜕膜，瘀血已去除并修复血管，且都无炎症的反应，均可表明药物对流产后子宫有修复作用。李霞［15］等研究发现，益母草碱可促进内膜绒毛的脱落和瘀血恶露的排出，增强子宫平滑肌收缩，最终可以有效修复流产后子宫内膜的破损。在本次的研究中，益母草组虽比模型组的子宫系数明显降低且子宫受损较轻，但仍有炎症反应出现；因而可知，清胞衣颗粒对子宫的修复作用优于单味益母草。在诸多中医药研究中，可加快修复子宫内膜的药方都多用化瘀止血类中药，这更能从药物组成上力证清胞衣颗粒有良好的子宫修复作用。

综上所述，清胞衣颗粒可有效修复流产导致的子宫损伤。其中几味药根据功效可推测出，赤芍与蒲黄主要用于流产后子宫内膜的愈合，有效缩短出血时间，减少疼痛；桃仁活血的功效可预防内膜上皮细胞的坏死；益母草则在多个研究中被证明可减少流产后子宫瘀血。但具体作用机制及清胞衣颗粒的具体使用剂量现仍不明，需要在后续的研究中给予补充。