黄芪注射液对子痫前期大鼠胎盘NF-κB、MMP-9、转录因子的影响

戴 妮

子痫前期是孕妇妊娠期多见的并发症，有调查表明，子痫前期在全球范围的发生率约为2%～8%[1]。相关研究指出，胎盘核转录因子（NF-κB）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及相关转录因子表达紊乱与子痫前期的发生、发展具有密切联系[2]。黄芪注射液具有扩张血管、改善肾功能、降压等功能，是治疗子痫前期的有效药物[3]。为进一步明确黄芪注射液治疗子痫前期的作用机理，本课题主要研究黄芪注射液对子痫前期大鼠尿蛋白、胎盘NF-κB、MMP-9及相关转录因子表达水平的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂及设备 黄芪注射液 （哈尔滨圣泰制药股份有限公司，国药准字号：Z23020822），N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME，Cayman 公司，批号：lot14H0135），尿蛋白酶联免疫吸附试验试剂盒（江苏晶美生物科技有限公司）；RT-PCR 仪（型号：ABI 7000型，上海朗赋实业有限公司）及配套试剂。

1.2 实验动物 妊娠 （妊娠第12 d）SD大鼠30只，购自郑州大学实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2008-1-003。 饲养条件：室温 18～26 ℃，空气湿度（55±5）%，环境安静、通风，予以自由饮食，充分给水。

1.3 实验方法 将实验鼠随机分为模型组、黄芪组和对照组，在妊娠第13～15 d，模型组及黄芪组大鼠皮下注射L-NAME 50 mg/(kg·d)，以建立子痫前期大鼠模型；对照组大鼠注射等量生理盐水。妊娠第16 d起，黄芪组腹腔注射黄芪注射液[0.024 ml/(g·d)+5%葡萄糖注射液共1 ml]，另外两组注射同体积5%葡萄糖注射液。各组均1次/d，连续给药5 d。

1.4 检测指标 分别在妊娠第15、20 d时，采集实验鼠24 h全尿，运用邻苯三酚法测量24 h尿蛋白量。血压检测：于安静环境下，把实验用袖带套入大鼠尾部检测动脉压，每只检测3次，每次隔60 s，取3次之和的平均值为动脉压。24 h尿标本采集后，腹腔注射10%水合氯醛（3 ml/kg）麻醉大鼠，取出胎盘，用生理盐水漂洗，-70℃保存备用。以RT-PCR 法 检 测 胎 盘 组 织 NF-κB、PLGF、NFAT-5、MMP-9、sFlt-1mRNA表达水平。

1.5 统计学方法 应用SPSS19.0统计软件分析，计量资料以x±s表示，多组比较采用单因素方差分析，两组间比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同时段动脉压和尿蛋白水平 在妊娠第15 d，对照组动脉压和尿蛋白水平明显降低（P＜0.05），余下两组间未见明显差异（P＞0.05）；在妊娠第20 d与15 d相比，模型组和对照组的动脉压和尿蛋白水平未见明显变化（P＞0.05），而黄芪组明显低于模型组（P＜0.05），且与对照组比较无明显差异（P＞ 0.05）。 见表 1。

2.2 各因子mRNA表达水平 在妊娠第20 d，各组各因子mRNA表达水平均有显著差异（P＜0.05）；sFlt-1mRNA、NF-κB 表达水平：模型组最高，对照组最低（P＜0.05）；MMP-9 mRNA表达水平：模型组最低，对照组最高（P＜0.05）；模型组 NFAT-5 mRNA表达水平明显升高，PLGF mRNA表达水平明显降低（P＜ 0.05），且余下两组间未见明显差异（P＞ 0.05）。见表2。

3 讨论

黄芪注射液属于中药制剂，具有显著降压效果。相关研究指出，黄芪能够提高肾小球滤过及肾血流量，缓解免疫复合物对肾小球基底膜造成的损伤，有效清除氧自由基，促进肾功能恢复，从而提高尿量，实现降压、利尿的治疗效果[4]。本实验结果表明，在妊娠第20 d，黄芪组尿蛋白水平、动脉压明显比模型组低，表明黄芪注射液能显著降低子痫前期大鼠血压值和尿蛋白水平，与杨双燕等[5]研究结果一致。

表1 各组不同时段动脉压和尿蛋白水平比较（n=10）

表2 各组各因子mRNA表达水平比较(n=10）

子痫前期母体胎盘滋养细胞侵袭能力显著降低，而MMP-9表达不足会弱化其侵袭子宫螺旋动脉的能力，使得胎盘植入浅，血流灌注减少。本实验结果显示，在妊娠第20 d，MMP-9 mRNA表达水平为：对照组＞黄芪组＞模型组，说明黄芪注射液能有效增加子痫前期大鼠胎盘组织MMP-9 mRNA的表达，与林娟[6]研究结论一致。

妊娠期胎盘低氧导致NF-κB被激活，不仅能降低滋养细胞浸润功能，同时诱发血管狭窄[7-8]。子痫前期孕妇滋养细胞凋亡增加，PLGF mRNA表达随之减少[9-11]。相关实验表明，与空白组相比，子痫前期模型组胎盘组织内sFlt-1因子水平明显升高，表明sFlt-1与子痫前期发生具有相关性[12]。小鼠肾脏细胞之中，渗透压升高能够激活NFAT5，同时持续低氧影响，可能引起子痫前期或者胎儿生长受限等严重并发症.并诱导NFAT5 mRNA表达。本实验显示，子痫前期大鼠胎盘组织sFlt-1 mRNA、NF-κB表达水平为：对照组＜黄芪组＜模型组，说明黄芪注射液可提高子痫前期大鼠胎盘组织Flt-1mRNA、NF-κB表达水平，与马合红等[11]研究观点相符。

本实验结果还显示，在妊娠第20 d，模型组NFAT-5 mRNA表达水平明显最高，PLGF mRNA表达水平明显最低，且余下两组未见显著差异，提示黄芪注射液能抑制NFAT-5 mRNA表达，同时增强PLGF mRNA表达水平。

综上所述，黄芪注射液能抑制子痫前期大鼠胎盘组织中 sFlt-1 mRNA、NFAT-5、NF-κB 的表达，增加PLGF mRNA、MMP-9表达，这可能是其治疗子痫前期的作用机理。