8种复方龙胆碳酸氢钠片中5种蒽醌苷含量比较研究

陈学艳，张敏娟，魏文芝，张耀元，阿玉梅

复方龙胆碳酸氢钠片是由碳酸氢钠、大黄膏（粉）、龙胆膏（粉）、丁香油、薄荷油和适宜的辅料组成的复方制剂，用于胃酸过多、食欲不振、消化不良。组方中的大黄具有清热解毒、活血祛瘀等功效[1]，可作用于胃觉感受器和胃黏膜，在碳酸氢钠中和过多胃酸后起到增加食欲、促进消化的作用。大黄中蒽醌类衍生物，主要包括大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酸等[2]，研究发现，大黄所含的蒽醌类衍生物具有调节胃肠道蠕动、促进胃排空等作用[3]。因此，大黄质量的优劣直接影响该复方制剂的疗效。本课题通过对比不同企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄成分5种蒽醌苷的含量，对2018年流通领域抽检的该品种进行质量评价研究。

1 材料与方法

1.1 仪器设备 Sartorius BS224S型及CP225D型电子天平；Waters e2695-2998型高效液相色谱仪；KQ-500DE型数控超声仪；HH-S6数显恒温水浴锅；98-1-C型数字控温电热套。

1.2 试药 复方龙胆碳酸氢钠片（分别来自编号为 A、B、C、D、E、F、G、H 的国内 8 家药品企业）；大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚对照品由中国食品药品检定研究院提供；甲醇（HPLC级），水（超纯水），其他试剂均为AR级。

1.3 检测方法 采用甲醇超声和酸回流法，提取复方龙胆碳酸氢钠片中的游离大黄蒽醌和总蒽醌（结合型蒽醌水解后所得5种蒽醌苷元）。采用HPLC法测定大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚5种成分含量：流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；检测器为二极管阵列，检测波长：254 nm；柱温 30 ℃；流速 1.0 ml/min；进样量 20 μl。

1.4 统计学方法 采用Excel软件，对检测数据进行处理，应用SPSS23.0软件进一步进行聚类分析。

2 结果

2.1 8家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄游离蒽醌含量测定结果 从表1可知，5种游离蒽醌指标成分中，大黄酚含量最高。D企业产品中未检出游离芦荟大黄素和游离大黄酸；E企业产品中游离蒽醌含量较其余厂家高。根据《中国药典》2015版规定[4]，大黄药材中游离蒽醌的含量限度为0.2%，大黄在复方龙胆碳酸氢钠片中的处方占比为16.6%，计算得游离蒽醌在复方龙胆碳酸氢钠片中的理论含量应为0.3320 mg/g。据此判定8家企业产品中，5家合格，3家不合格，合格率为62.5%。

2.2 8家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄总蒽醌含量测定结果 从表2可知，5中蒽醌苷元总体含量最高的仍为大黄酚，D企业产品中5批次均未检出大黄酸。E企业产品中总蒽醌含量较其余厂家高。根据《中国药典》2015版规定，大黄药材中总蒽醌的含量限度为1.5%，大黄在复方龙胆碳酸氢钠片中的处方占比为16.6%，计算得总蒽醌在复方龙胆碳酸氢钠片中的理论含量应为2.4900 mg/g。据此判定：8家企业产品全部合格，合格率为100%。

2.3 不同企业产品的质量评价 复方龙胆碳酸氢钠片为中西药复方制剂，由4味药材与碳酸氢钠组成。中药材（饮片）由于来源、产地、采收时间等不同，其内在质量差异较大。从上述结果得知，D企业蒽醌类含量较其他企业低，且未检出游离芦荟大黄素和大黄酸；5中蒽醌苷元中大黄酚对总蒽醌含量贡献最大，属于大量成分，其余4种苷元属少量成分。各企业产品大黄蒽醌类含量数据较为离散，不易直观地进行比较分析，因此，进一步采用聚类分析，将所有产品按各自属性分为不同群类进行评价，结果见图1。综合大黄酸及总蒽醌含量对8家企业产品排名，由优到劣依次为：E、G、H、F、A、C、B、D。

由图1可知，可将8家企业产品按大黄成分中5种蒽醌类含量分为3类，第1类包括D、C、B、A 4个企业，此类样品大黄蒽醌类总量较低，尤其是大黄酸和大黄素含量偏低；第2类包括C、A两个企业的大黄蒽醌类含量较高样品；第3类包括H、G、F、E 4个企业，此类样品大黄蒽醌类总量较高，大黄酸和大黄素含量明显高于第1类样品。大黄酸含量较高的大黄药材被称作大黄酸型，评价为优质大黄药材[5]。因此，可认为上述第3类厂家投料使用的大黄药材质量较佳，可起到更好地调节胃肠功能，增加食欲的作用[6]。相反，属于第1类的产品，在疗效上欠佳。

相关文献报道[7]，伪品大黄与正品大黄在蒽醌苷总量上几乎无太大差别，但伪品中大黄酸含量微少，几乎没有。提示上述第1类产品投料用大黄药材的真伪值得进一步验证，尤其是D企业产品中均未检出游离大黄酸，且有5批次经水解后也未检出大黄酸成分，因此，高度怀疑D企业有使用伪品或参伪的行为。A、C两企业大黄蒽醌类含量批间差异较大，致使二者在聚类统计时分属于第1类和第2类。此现象若排除生产工艺问题，有可能是投料用大黄由3种不同基源大黄混杂所导致。

2015年版《中国药典》（一部）规定，大黄药材应来源于蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.），不同基源大黄质量存在较大差异，目前市场流通的大黄多为3种基源大黄的混杂品[8-10]，进而导致生产出的含大黄制剂在质量上的不稳定。

表1 8家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄游离蒽醌含量测定结果(n=3)

表2 8家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄总蒽醌含量测定结果（n=3）

3 讨论

目前，大黄药材中已知的化学成分复杂多样，且活性成分较多。《中国药典》中将大黄素与大黄酚的含量测定结果作为含大黄制剂评价指标的品种较多，5个成分同时作为评价指标的品种较为少见[11]。而复方龙胆碳酸氢钠片的现行质量标准中，对大黄组分的质量控制仅采用薄层色谱鉴别和大黄酚检查。成分含量与药效、毒性相关分析表明，大黄酸对大黄药材整体的贡献显著大于大黄酚[12]，因此，有必要对大黄其他成分的含量加以控制。

含大黄制剂投料用药材质量控制在正品大黄市场价较高时，存在生产企业用华北大黄、河套大黄、藏边大黄等伪品替代投料的风险。正品大黄中的蒽醌苷类成分含量较高，伪品大黄中仅含微量蒽醌苷类成分[13]，且伪品大黄中含有特征性成分土大黄苷。本研究在后续试验中已建立复方龙胆碳酸氢钠片土大黄苷的测定方法，对伪品大黄进行了筛查，结果D企业的样品中检出了土大黄苷成分，结合其蒽醌苷类含量分析，可判定D企业存在使用大黄伪品投料的情况。

大黄属于多基源药材，且含大黄复方制剂生产工艺复杂，投料用大黄形式多样，制剂中难以判断大黄的来源。目前，多数含大黄复方制剂质量标准中对所含成分定性、定量项目设置不完善，不能客观反映投料大黄的整体质量情况。本实验通过同时控制大黄5种指标性成分的含量，运用适宜的统计分析方法，对来自8家企业的43批次复方龙胆碳酸氢钠片的质量进行了评价研究，对含大黄复方制剂加强批间一致性控制，防止投料中参伪行为的发生，具有重要的参考意义。