不同病情程度慢性乙型肝炎患者血清Treg/Th17水平变化及临床意义

2019-12-23王建芳

云南医药 2019年6期

金刚，王建芳

（1.武陟济民医院检验科，河南焦作 454950；2.驻马店市中心医院检验科，河南驻马店 463000）

慢性乙型肝炎（CHB）为临床多发疾病类型，乙型肝炎病毒（HBV）所致肝损伤与转归情况和机体细胞免疫间具有密切相关性，主要为T淋巴细胞清除病毒及肝细胞损伤，效应CD4+T淋巴细胞为机体免疫应答重要部分，于免疫调节中具有关键作用[1]。随生物学及免疫学技术不断发展，CD4+T淋巴细胞另外两个亚群辅助性T淋巴细胞17（Th17）及调节性T细胞（Treg）在CHB患者中的促炎及抗炎作用得到证实[2]。Treg细胞约占正常机体外周血CD4+T细胞总数目的5%～10%，主要功能为维持自身免疫耐受及调节自身T细胞功能，其活化后可分泌IL-10、TGF-β1及其他可溶性细胞因子，并通过对树状突细胞成熟予以抑制及细胞间直接接触而发挥免疫抑制功能。Th17则可分泌IL-17等，其中IL-17为主要效应因子，可促使树状突细胞成熟、T细胞活化等，以此参与宿主抗感染免疫，还可增加基质金属蛋白酶、趋化因子及促炎因子等含量，引发组织细胞浸润等。Treg/Th17比值紊乱为多种肿瘤、自身免疫病变及炎性疾病发生的重要原因，基于此，本研究选取我院116例CHB患者，探讨不同病情程度患者间血清Treg/Th17水平及其意义，现报告如下。

资料与方法一、一般资料选取我院2017年11月-2018年12月CHB患者116例设为研究组，另选取同期于我院进行健康体检者116例设为对照组。研究组男82例，女34例；年龄23～63岁，平均（57.20±7.69）岁；病情程度：轻中度77例，重度39例。对照组男79例，女37例；年龄21～66岁，平均（56.91±7.92）岁。2组性别、年龄等临床资料均衡可比（P＞0.05）。

二、选取标准 1.纳入标准 ⑴研究组符合CHB及病情程度诊断标准[3]；⑵对照组抗HIV抗体试验、丙肝抗体等检查均呈阴性，且无肝炎症状；⑶知晓本研究，签署同意书。

2.排除标准 ⑴合并恶性肿瘤者；⑵妊娠期及哺乳期女性；⑶合并脂肪性肝炎、酒精性肝炎及药物性肝炎者；⑷合并血液系统、内分泌系统、自身免疫系统重度病变者；⑸合并其他全身性重度感染性疾病者。

方法设备选取FACSCalibur流式细胞仪、AU5800型全自动生化分析仪、淋巴细胞分离液、FoxP3试剂盒（含有配套固定/透膜剂）与PE所标记抗人FoxP3抗体和对应同型对照、IL-17检测所用固定/透膜剂、PE所标记抗人IL-17抗体和对应同型对照、莫能霉素、离子霉素、佛波脂，胎牛血清、RPM I 1640；抽取所有受检者空腹静脉血4m L，经肝素抗凝，以淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，分选CD4+T细胞，制为悬液（细胞浓度：1×107/m L）；取100μL所选CD4+T细胞液置于流式试管，加新鲜配置固定/透膜剂（1m L），于4℃条件下避光反应60m in，经透膜缓冲液洗涤、重悬，将其分别放入2个试管内，各加入FoxP3-PE与对应同型对照IgG1-PE 10μL，于室温条件下避光反应30m in，洗涤3次，经PBS 300μL重悬细胞，测定 Treg百分比；取100μL所选CD4+T细胞液悬浮于900μL RPM I 1640培养液，加入2umol/L莫能霉素、1ug/m L离子霉素、50 ng/m L佛波脂，置于5%二氧化碳、37℃环境内培育5h，取100μL置于专用流式试管，加入固定/透膜剂A100μL，于室温条件下避光反应15min，洗涤1次，加入固定/透膜剂B100μL，于室温条件下避光反应5m in，将其分为2管，加入IL-17 PE与对应同型对照IgG1-PE，于室温条件下避光反应30m in，洗涤2次，经PBS 300μL重悬细胞，测定Th17百分比。

四、观察指标 ⑴统计分析研究组与对照组Treg及Th17百分比、Treg/Th17。⑵统计分析研究组不同病情程度患者Treg及Th17百分比、Treg/Th17。⑶统计分析 Treg及 Th17百分比、Treg/Th17与CHB病情程度相关性。

五、统计学方法通过SPSS18.0对数据进行分析，计量资料（±s）表示，t检验，Treg及Th17百分比、Treg/Th17与CHB病情程度相关性以Pearson予以分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结果一、研究组与对照组各指标水平比较研究组Treg及Th17百分比高于对照组，Treg/Th17低于对照组（P＜0.05），见表1。

二、不同病情程度CHB患者各指标水平比较重度CHB患者Treg及Th17百分比高于轻中度患者，Treg/Th17低于轻中度患者（P＜0.05），见表2。

三、各指标水平与CHB病情程度相关性分析 Pearson检验可知，Treg及Th17百分比与CHB病情程度间存在明显正相关关系（P＜0.05），Treg/Th17与CHB病情程度间存在明显负相关关系（P＜0.05），见表3。

讨论 CHB发病及进展和转归为肝细胞、HBV和宿主免疫系统互相作用的动态平衡过程，研究指出，HBV侵袭机体肝细胞后发生复制，分泌的抗原引起机体免疫应答，Th17细胞及Treg细胞等免疫因子在上述过程中均有重要作用[4]。

近些年，Th17及Treg细胞于自身免疫性病变及炎症中的重要作用得到普遍重视，Treg细胞属CD4+T细胞亚群，主要功能为调节控制病原体T细胞反应及造成重度炎症、组织破坏的过度T细胞反应间平衡；Th17为临床新发现的CD4+T细胞亚型，具备IL-23依赖性生成IL-17等特征，促炎症作用较强，在多种慢性炎症、自身免疫病变发生与进展中具有重要作用[5]。Th17细胞及Treg细胞间相互作用较复杂，Th17及Treg与其所分泌细胞因子间构成一个网络，给予所需细胞因子后，可出现Th17及Treg细胞分化偏离，进而对两者数目、功能平衡产生影响。IL-2为关键分子，经信号转导及转录激活因子5途径，对Th17细胞分化予以抑制、对Treg细胞生成予以促进，而IL-21可影响Foxp3表达，阻止Treg细胞生成产生抑制作用，并经自分泌途径促使Th17发育及其与Treg细胞间平衡。同时，Th17及Treg细胞分别起促炎及抑制作用，两者间平衡发生紊乱为肿瘤及自身免疫病变等发生及进展的重要因素。

本研究结果表明，研究组Treg及Th17百分比高于对照组，Treg/Th17低于对照组（P＜0.05），主要是因Treg及Th17数目虽增高，但Treg细胞增多速度低于Th17细胞，故致使Treg/Th17降低，表明CHB患者机体处于Th17细胞增多状态，且趋于优势地位的Treg/Th17免疫失衡，推测Treg细胞增殖及功能不足、Th17细胞异常活化均可能为肝脏炎症反应发生与进展的重要因素。此外，黄进发等[6]研究指出，Treg和Th17的发育情况为特定核转录因子RORγt、Foxp3所决定，其中Foxp3为Treg特异性标志物，可调节Treg发育和功能，可对自身反应性T淋巴细胞增殖及活化予以主动抑制，以此控制T淋巴细胞对异体抗原或自身抗原过度反应；RORγt为调节Th17分化的重要转录因子，可对T淋巴细胞分化为Th17产生诱导作用，而其研究结果显示，CHB患者 RORγt、Foxp3表达高于对照组。另由本研究结果显示，不同CHB患者间Treg及Th17表达情况、Treg/Th17间存在显著差异，且Treg及Th17百分比与CHB病情程度存在正相关关系，Treg/Th17与其存在负相关关系（P＜0.05），提示随CHB患者病情加剧，Treg及Th17百分比持续增高，Treg/Th17比值呈降低趋势，临床可通过测定其表达情况评估CHB患者病情程度，据此制定、调整治疗方案，确保治疗有效性及合理性。

表1 研究组与对照组各指标水平比较（±s）

组别例数 Treg（%） Th17（%） Treg/Th17研究组 116 7.27±0.51 2.13±0.10 3.41±0.39对照组 116 5.59±0.54 0.51±0.08 10.96±0.44 t值 24.361 136.246 138.301 P值 0.000 0.000 0.000

表2 不同病情程度CHB患者各指标水平比较（±s）