羊肚菌对体力疲劳小鼠生理学功效恢复方法

徐景锋

（东华理工大学 体育学院，江西 南昌 330017）

躯体性疲劳又称体力疲劳，当机体劳动时间较长、体力劳动过程较复杂时，体内积累大量代谢物质，使机体组织细胞和神经系统受到刺激，出现疲惫感。从生理学功效角度恢复机体体力疲劳，就要减少感觉疲劳[1]。

野生食用菌是一种药食兼用真菌，其中羊肚菌具有较为丰富的营养和药用价值，包括抗辐射、抗衰老、抗菌、抗病毒和增强机体免疫力等，被广泛应用在现代医学中[2]。现代医学研究发现，羊肚菌中具有较多功能成分，例如糖类、核苷类、生物碱类和呋喃衍生物等成分，这些成分能够改善机体免疫力，促进机体健康[3]。通过研究羊肚菌对体力疲劳小鼠生理学功效恢复方法，为野生食用菌的进一步开发利用提供物质保障。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 原料

在贵州偏远山区中采取少量羊肚菌，烘干粉碎，经过热水抽提，在羊肚菌含量2000 mg·kg-1、时间15 min的环境下进行离心操作。收集羊肚菌上清液，继续熬煮剩余羊肚菌液体，不断提取羊肚菌上清液，合并一起，冷却。4倍体积预冷处理95%乙醇，加入羊肚菌上清液中，经过24 h离心处理，除去羊肚菌液体中乙醇，对羊肚菌液体进行干燥处理。配制不同剂量的羊肚菌液体，将获取的羊肚菌液体消毒杀菌、备用[4]。

1.1.2 试验动物

在上海斯莱克实验动物有限公司购买雄性健康小鼠，身体重量在15 g～17 g，可自由摄食饮水，将购买的小鼠分成试验组和对照组，试验组按照羊肚菌剂量大小分为多组，包括400 mg·kg-1、800 mg·kg-1等，每组小鼠数量为10只。

1.2 方法

1.2.1 试验前准备

先训练小鼠2次，使小鼠处于疲惫状态，让小鼠正式游泳，最后1次训练时喂给小鼠羊肚菌液体，小鼠尾部放置5%体重铅皮，30 min后，将小鼠放置到购买的游泳箱中，此时游泳箱的水温应在25℃左右，上下浮动不超过0.5℃，游泳箱的水深为30 cm，观察记录小鼠游泳状态[5]。

1.2.2 肝糖原和肌糖原测定

主要采用蒽酮法测定小鼠体内肝糖原、肌糖原含量，如上文所说训练后，将小鼠解剖取出肝脏，用生理盐水漂洗干净，通过滤纸吸取小鼠肝脏表面水分，吸干后，称量250 mg肝组织，将肝脏捣碎匀浆处理[6]，倒入离心管里，以3500 r·min-1的速度离心处理15 min后，提取450 μ L上清液，采用浓度为95%的乙醇5 mL加入到上清液中，充分混合均匀两种液体，直至两种液体间没有明显分层，将无明显分层的液体放置到冰箱中，在5℃的环境下静置1 d，第2天将液体以3500 r·min-1的速度离心处理15 min，滤去上清液，将试管倒置晾干，静置约10 min，肝糖原中加入1 mL纯化水。选用另一个试管，加入100μL纯化水，将该试管当成试剂空白，在两个试管中分别添加10 mL蒽酮试剂，将加入蒽酮试剂后的试管煮沸，大约为15 min，煮沸后将试管取出，冷却试管中液体温度到室温。通过分光光度计采用640 nm波长比色测定试验的小鼠肝糖原和肌糖原。重复上述步骤，从小鼠肌肉中获取肌糖原，肝糖原和肌糖原计算公式为：

式中：YG0为肝糖原样品管吸光度；BG0为肝糖原标准管吸光度；H为肝组织样品重量；D为葡萄糖标准液浓度；V1为肝糖原提取液体积；V2为肝糖原测定液体积；V3为葡萄糖标准液体积。YG1为肌糖原样品管吸光度；BG1为肌糖原标准管吸光度；h为肌肉组织样品重量；v1为肌糖原提取液体积；v2为原测定液体积。

1.2.3 血乳酸测定

如上文所说训练后，在小鼠眼眶处采血20 μ L放入试管中，在试管中滴入破膜液45μ L，振荡试管，使血液和破膜液混合均匀。将小鼠放置到游泳箱中，让小鼠在游泳箱中游泳10 min，游泳箱温度选取为30℃，温度上下波动范围不超过0.5℃，对小鼠进行采血，采血容量为20 μ L，在试管中滴入破膜液45 μ L，震荡试管，使血液和破膜液混合均匀。让小鼠休息20 min后，对小鼠进行采血，采血容量为20 μ L，在试管中滴入破膜液45 μ L，振荡试管，使血液和破膜液混合均匀。通过手持式乳酸仪检测样品中的乳酸值，血乳酸值是根据乳酸值乘以3得来的，小鼠内血乳酸变化值公式为：

式中：S为血乳酸曲线面积；AX为安静血乳酸值；YX0为小鼠无运动状况下的血乳酸值；YX1为小鼠运动20 min后的血乳酸值。

统计所测量的数据，如果试验组小鼠血乳酸曲线面积比对照组小鼠血乳酸曲线面积小，且数据间存在统计学差异，则认为羊肚菌液体能抑制小鼠运动后小鼠体内血乳酸生成，羊肚菌具有恢复体力疲劳小鼠体力的生理学功效。

2 结果

2.1 测定小鼠肝糖原与羊肚菌剂量间的关系

运动时机体的重要供能物质是肝糖原，通过检测机体中肝糖原含量可知小鼠疲劳程度。检测不同剂量羊肚菌对小鼠肝糖原含量的影响。检测结果如表1所示。

表1 不同剂量羊肚菌对小鼠肝糖原、肌糖原含量的影响Tab.1 Effect of different doses of Morchella on hepatic glycogen and muscle glycogen content in mice

表1看出，对照组的肝糖原含量为（19.21±5.12）mg·g-1，肌糖原含量为 （0.58±0.07） mg·g-1。随着羊肚菌剂量的增加，肝糖原和肌糖原含量逐渐增加，当羊肚菌剂量为1600 mg·g-1时肝糖原和肌糖原含量最多，为（34.98±9.51） mg·g-1和（0.96±0.23） mg·g-1。当小鼠处于相同运动状况下，摄入羊肚菌的小鼠体内的肝糖原和肌糖原储备含量增加，可增强小鼠运动能力，降低小鼠疲劳程度。

2.2 测定小鼠血乳酸与羊肚菌剂量间的关系

羊肚菌对小鼠血乳酸测定结果，见表2。

表2 不同剂量羊肚菌对小鼠血乳酸影响Tab.2 Effect of different doses of morel on blood lactate in mice

从表2可以看出，与对照组小鼠血乳酸含量相比，在喂食小鼠不同剂量羊肚菌情况下，小鼠内部血乳酸含量明显降低，且随着羊肚菌剂量的不断增加，血乳酸曲线面积逐渐减少，当羊肚菌剂量为1600 mg·kg-1时，小鼠体内血乳酸曲线面积最低，为（94.56±21.68） mm2。综上所述，不同剂量羊肚菌可有效减少机体内部能量的分解代谢，肌肉的运动能力得以提升，降低小鼠体力疲劳程度，其中较高剂量的羊肚菌恢复小鼠体力效果较好。