四种样本采集方法检测EB病毒DNA的比较

(焦作市人民医院，河南 焦作 454002)

EB病毒是小儿感染性疾病较为常见的病原体，感染时多无明显症状或引起轻度咽峡炎和上呼吸道感染。EBV感染后具有长期携带和条件致病的特点，当免疫功能低下时EB病毒会造成再次感染[1]。除了能引起传染性单核细胞增多症以外，EBV还能引起组织细胞增生症、吞噬细胞综合征等较严重疾病[2]。荧光定量PCR能早期、快速诊断EBV感染，但很少见不同样本采集方法检测EB DNA的比较。为此，本文对疑似感染EBV患者的咽拭子、外周血单个核细胞、全血及血浆同时进行检测，比较不同样本采集方法的检测异同。

1 资料与方法

1.1标本来源 选取2017年11月至2018年2月本院收治的疑似EBV感染患儿85例为实验组，另收集同期60名健康体检者作为对照组。咽拭子标本采集方式：用咽拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，立即放入采样管送检。两组均取血浆50 μl、单个核细胞悬液(PBMC)及抗凝全血，采用全血基因组DNA抽提液抽提DNA，操作步骤严格按照说明书来进行。

1.2仪器和试剂 实时定量PCR仪为美国应用生物系统公司生产的ABI 7500，高速冷冻离心机来自美国Backman仪器有限公司。EB DNA荧光定量试剂盒由广州中山医科大学达安基因股份有限公司提供，严格按说明书操作。

1.3结果评定 不同类型的标本均使用试剂盒自带的标准品进行定量分析，以>400拷贝数/ml判读为阳性，反之为阴性。

2 结果

2.1不同标本类型阳性率的比较 两组检测结果由高到低依次均为咽拭子、PBMC、外周全血及外周血浆，见表1。

2.2两组血浆EBV DNA定量检测 在实验组标本中血浆阳性标本中EBV DNA含量经对数转换后在2.84～6.33之间，平均为(4.27±0.88)；对照组在2.13～3.67之间，平均为(3.04±0.49)。两组比较差异有统计学意义(t=9.8，P<0.01)。

2.3结果一致性判断 血浆EBV DNA与咽拭子、PBMC及外周全血中EBV DNA结果一致性逐渐增高，表2。

表1 咽拭子、PBMC及外周全血EBV DNA检测比较[n(%)]

表2 血浆EBV DNA与咽拭子、PBMC及全血中EBV DNA结果一致比较

3 讨论

EB病毒具有普遍易感性和潜伏性，感染EBV的患儿可出现发热、传染性单核细胞增多症，甚至会引起较严重的恶性疾病。早期、正确的诊断对疾病的治疗有重要意义[3]。本研究将检测EBV DNA常见的标本类型进行了同时收集、检测，结果表明疑似病例咽拭子EBV DNA阳性率明显高于其他标本含量。研究还发现，健康人群亦可检出EBV DNA，也以咽拭子EBV DNA阳性率最高，达13.33%。结果提示EBV可长期潜伏于正常人体的鼻咽部和淋巴细胞，大部分人群因咽拭子EBV DNA拷贝数太低，未能到达检测下限。血浆和外周血EBV DNA检测主要的对象为血浆中的游离病毒，其阳性代表病毒血症，不能够检测出血细胞中携带的EB病毒，所以，血浆中的阳性率较单个核细胞和咽拭子低。单个核细胞以T淋巴细胞为主，也包括B淋巴细胞、NK细胞及单核细胞等。研究证实，EB病毒对B淋巴细胞较为敏感。

总之，疑似患者组不同类型标本之间EBV DNA阳性率和含量存在较大差异，提示在临床检测时可考虑采用咽拭子提高检出率。