苦楝子与川楝子的比较鉴别

康新莉，李登方

(西安碑林药业股份有限公司，陕西 西安 710048)

苦楝子和川楝子分别为楝科楝属植物苦楝MelaiazedarachL.和川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的干燥成熟果实。两者均全国各地种植，分布广泛[1-2]。《神农本草经》载有楝，《图经本草》称为苦楝，苏颂曰：“楝实以蜀川者为佳。”[3-4]根据古人描述，楝实未做川楝子、苦楝子之分，药用功效也十分相似，均具有舒肝行气止痛、驱虫的作用。

现代研究川楝子的较多，苦楝子较少，苦楝子研究主要在药理实验方面，如苦楝子较川楝子毒性大[5]、苦楝子的酒精浸液对若干常见的致病性真菌在体外有较明显的抑制作用、具有抗病毒、抗生育抗肿瘤作用等[6]。20世纪90年代有苦楝子生药鉴定的研究报道[7]，但其手工绘图的细胞特征差异较大，不乏有苦楝子和川楝子的对比研究，但至今未见苦楝子的定性与定量分析报道。因此，针对目前市场上川楝子与苦楝子常混用或错用的现象，进行苦楝子、川楝子的性状特征、显微特征、薄层色谱的对比以及用高效液相色谱法进行苦楝素的含量比较，拟达到区别特征明显，易于操作，不应混用或错用的目的。

1 材料、仪器和试剂

1.1 实验仪器和试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，sartoius BS110电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，KQ5200DE型超声波清洗仪(上海昆山超声波仪器厂)。Motic 显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司，型号：DMB-1223),硅胶G板(自制)，乙腈(色谱纯)，水为纯化水，其他试剂均为分析级。

1.2 实验药材

苦楝子药材分别采购于陕西宝鸡(批号：20140923、20141105)、陕西渭南临渭区(批号：20141004、20141107)、陕西渭南蒲城县(批号：20141005、20141007)，川楝子药材采购于雷波县金沙江河谷(批号：20150106)、四川师范大学校园(批号：20141206)以及安徽毫州市(批号：140625)、四川国强饮片厂(批号：140801)，经宋良科教授鉴定分别为楝科属植物苦楝MelaiazedarachL.的成熟果实和楝科属植物川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的成熟果实。苦(川)楝素对照品购于成都普思生物科技有限公司，批号：PS09111405。

2 实验方法与结果

2.1 性状比较

苦楝子和川楝子及其果核外观大小差别较大，但外观颜色、形状差别较小，两者外观均呈类球形或椭球形，顶端有微凹的花柱残痕,基部有凹陷的果梗痕。主要以果核的大小形状、表面的纵棱数、子房室数予以区别。见表1。

表1 川楝子与苦楝子性状比较

2.2 显微鉴别

苦楝子粉末显微鉴别：本品粉末黄棕色。果皮纤维成束，末端钝圆，壁极厚；含晶细胞微木化，形成含方晶的晶鞘纤维。石细胞成群或单个散在，呈类圆形、不规则长条形或多角形，直径14～54 μm，长50～200 μm。种皮细胞鲜黄色或橙黄色，直径约至44 μm，壁极厚，有纵向微波状纹理。草酸钙棱晶直径5～25 μm。草酸钙方晶直径20～30 μm。草酸钙簇晶少见。见图1。

两者粉末颜色均为黄棕色，对于纤维束、晶鞘纤维、石细胞、种皮细胞等无明显的区别，仅苦楝子粉末中有棱晶，川楝子未见。

2.3 薄层鉴别

取两者粉末各3 g，加水80 mL，超声处理1.5 h，放冷，离心，取上清液，用二氯甲烷振摇提取3次，每次30 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取苦楝素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法 (附录Ⅵ B)试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(16:2)为展开剂，展开，取出，晾干，365 nm下检视。见图2。苦楝子、川楝子的供试品均显蓝色荧光斑点，但苦楝子的红色荧光斑点位置，川楝子则无，结果表明，该类化学成分中，苦楝子比川楝子多一种组分[8-9]。

注:1.种皮细胞;2.外果皮细胞;3.方晶;4.棱晶;5.薄壁细胞;6-7.石细胞;8.纤维素;9.晶鞘纤维图1 显微鉴别(200×)

注:1-4.苦楝子;5-7.川楝子图2 薄层鉴别

2.4 苦楝素含量测定

2.4.1 色谱条件

色谱柱为C18Hypersil ODS2(250 mm ×4．6 mm，5 μm)，流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱，洗脱条件：0～30 min 28%A～30%A,30～50 min 30%A～35%A,流速为1 mL/min,检测波长为210 nm，柱温为35℃，进样量10 μL[10-11]。

2.4.2 溶液的制备

精密称取苦楝素对照品6.91 mg，加甲醇定容到10 mL的容量瓶中，摇匀，作为母液，备用。精密量取2 mL的母液，置5 mL的容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，得浓度为0.2764 mg/mL的苦楝素对照品溶液。取两者粉(过3号筛)约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入石油醚50 mL，振摇20 min，过滤，留滤渣，重复两次；粉末残渣，自然风干，加入60 mL无水乙醇回流提取2 h重复2次，滤液减压蒸干后，甲醇定容到5 mL的容量瓶中，即得供试品溶液。

2.4.3 方法学考察

专属性试验：精密吸取2.4.2项下 对照品及样品溶液、空白溶液各10 μL，按上述2.4.1项下色谱条件进样测定。色谱图见图3。

注：A.苦楝素对照品;B.苦楝子供试品;C.空白图3 色谱图

线性关系考察：精密吸取苦楝素对照品溶(质量浓度为0.276 4 mg/mL)6、10、14、16、18、20 μL，按2.4.1项下色谱条件，进样10 μL，积分求得峰面积，以进样量μg为横坐标(x)，以峰面积为纵坐标(y)，计算线性关系为y=480.23x-151.966(R2=0.998 87，n=6)，结果表明，在1.658 4～4.740 μg范围内呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取苦楝素对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测定峰面积值，结果峰面积的RSD为1.34%，表明仪器精密度良好。

重现性试验：精密称定同一批号苦楝子样品6份，每份约0.2 g，按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定峰面积，结果峰面积的RSD为2.12%，表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一苦楝子和川楝子供试品溶液，分别于制备0、2、4、6、10、16、24 h各进样10 μL，测定峰面积，峰面积的RSD为1.5%和1.74%，说明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收率试验：精密称定已测知含量的苦楝子样品6份，每份约2.0 g，分别精密加入一定量的苦楝素对照品，按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，计算加样回收率。结果平均回收率100.5%，RSD为2.38%，见表3。

表3 回收率试验(n=6)

2.4.4 样品含量测定

取苦楝子和川楝子药材粉末，按上述方法制备供试品溶液，进样，测定峰面积，计算苦楝素含量。结果见表4。结果表明，两者都含有苦楝素，但川楝子中的苦楝素含量高于苦楝子。

表4 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 苦楝子与川楝子的收录记载

《中华人民共和国药典》1977版至2015版均收载川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的干燥成熟果实，其药名为川楝子。1992版《卫生部药品标准》中收载苦楝MelaiazedarachL.的干燥成熟果实，其药名为苦楝子(但仅有性状鉴定特征)。1977版至2010版均收载楝科植物苦楝MelaiazedarachL.和川楝MeliatoosendanSieb.et zucc的干燥树皮及根皮，其药名为苦楝皮。由于川楝子与苦楝子传统功效与用法用量相似，两者的树皮及根皮均做为苦楝皮，导致川楝子与苦楝子在药材市场和民间药用时基本做同一药材混用或相互错用。

3.2 苦楝子与川楝子的鉴别结果

苦楝子与川楝子在性状方面存在一定的差异，很容易区分辨别，显微鉴别结果表明两者无显著差异。

以氯仿-甲醇(16∶2)为展开剂的薄层色谱图中苦楝子比川楝子多一种组份,高效液相色谱测定结果表明，苦楝子中苦楝素含量低于川楝子。在色谱条件色谱柱为C18Hypersil ODS2(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱，洗脱条件：0～30 min28%A～30%A，30～50 min30%A～35%A，流速为1 mL/min，检测波长为210 nm，柱温为35℃，进样量10 μL，分别测定了苦楝子与川楝子中的川楝素的含量，结果苦楝子中川楝素的平均含量为0.48 mg/g，川楝子中川楝素的含量达到0.84 mg/g，表明川楝子和苦楝子中主要药效成分的含量存在明显区别，临床应用应区别对待。

3.3 苦楝素的结构特征及药理作用

苦楝素又名川楝素，是一种四环三萜类化合物，化学结构存在醛-酮式结构互变异构，所以表现在液相色谱图上为双峰，计算含量时是将两个峰面积和带入线型方程计算苦楝素的含量。

苦楝素是一种药物活性很强，目前药理研究表明，苦楝素具有驱虫抑菌、治疗肉毒素中毒、抗肿瘤等作用。毒理研究表明其对胃肠道及肝脏有毒副作用，过量的苦楝素也会导致血管壁损伤，引起急性循环衰竭等症状[12]。现代研究认为川楝子与苦楝子在毒性及药理方面也存在差异[13]。

4 小结

综合上述，苦楝子和川楝子在临床使用方面应该严格区分，保证临床用药的安全有效。应按药典规定执行，并对苦楝皮做进一步的深入研究，达到基源与药名一致，易于操作和更好的控制药材质量目的，规范中药材的质量。