调心安神针法预处理对缺血再灌注性心律失常模型兔的心肌保护作用

王长春，王 锐*，李明妍，郭 丽，崔华峰，陈新勇，韩 晶，徐 敏，王碧君，赵蒙蒙

（1.山东中医药大学附属医院，济南 250011；2.山东中医药大学针灸推拿学院，济南 250014）

缺血再灌注性心律失常是缺血心肌再灌注后引起的损伤，与氧自由基、细胞间耦联、钙离子、自主神经及体液系统等多种因素相关[1]。前期研究证实，调心安神针法可以调节心肌细胞Cx43磷酸化水平及心肌血管紧张素Ⅱ受体、β肾上腺素能受体的表达，明显缩短室性心律失常的持续时间[2-4]。本实验通过左冠状动脉前降支结扎的方法制作兔RA模型，观察调心安神针法对其血清CK-MB、LDH、SOD的影响，探讨该针法对RA兔的心肌保护作用。

1 材料与方法

1.1 动物分组与造模 40只健康家兔，体重1.5～2.0 kg左右，雌雄各半，由济南西岭角生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK（鲁）20150001。按照随机数字表法分为假手术组、模型组、针刺组、胺碘酮组，每组10只。再灌注性心律失常模型复制参照Reffelmann的方法，耳缘静脉注射20%乌拉坦（4 mL/kg）全身麻醉，将呼吸机导管连接气管插管，给予机械通气，呼吸频率30次/min，吸呼比1：1.5，通气流量根据肺膨胀大小调整。开胸，在左冠状动脉前降支上、中1/3交界处穿线、结扎，立即监测心电图Ⅱ导联T波、ST段的变化。以左室前壁发绀及心电图ST段抬高≥0.5 mV为缺血标志。结扎40 min后，松开硅胶管，恢复左前降支灌流60 min。恢复心肌血流灌注后，抬高的ST段相对降低（＞50%），并且缺血区域心外膜颜色恢复红润。连续记录心电图至手术完毕。假手术组：穿线，不结扎，静置100 min。针刺组：在造模7天前开始给予调心安神针法预治疗，1次/d，共7 d。针刺组和模型组第8天造模取材。胺碘酮组：于再灌注即刻泵入胺碘酮（3 mg/kg溶于生理盐水5 mL中），5 min泵入完毕。所有实验均遵循国家实验动物护理和使用指南进行。

1.2 针刺方法 参照中国针灸学会实验针灸研究会制订的“动物针灸穴位图谱”，针刺灵台、神道、内关、百会。灵台、神道穴位于背部胸椎6、7及5、6棘突间，均向上斜刺5 mm，用震颤法快速小幅度行针1 min后起针；内关穴位于前臂下1/6折点处内侧，桡、尺骨间隙中，双侧内关分别直刺5 mm，行针1 min后接电针治疗仪，疏密波，刺激强度以家兔上肢出现轻微颤动为度；百会穴位于第7腰椎与第1荐椎棘突间，向后平刺5 mm。

1.3 检测指标及方法 试验结束后，取颈动脉血离心，取上清液，- 20℃冰箱冻存，酶联免疫法检测CKMB、LDH、SOD。

1.4 统计学方法 数据采集后，采用SPSS 19.0统计软件进行统计。结果用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，并进行方差齐性检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

各组家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比较，见表1。

3 讨论

近年来，随着缺血/再灌注（I/R）的治疗进展，RA因其与心源性猝死密切相关[5]而逐渐引起人们的重视。研究[6]发现，RA的发生和发展是一个多因素相互作用的级联反应，能量代谢障碍和再灌注后产生过多的活性氧簇（ROS）是再灌注损伤发生的主要病理生理基础；大量ROS损伤生物膜，并使线粒体结构和功能受损，导致钙超载，心肌细胞内钙超载引起的触发活动和再灌注后ROS的爆发导致的折返激动是RA发生的主要机制[7]。RA还与再灌注时间有关，时间过短，心肌电稳定性强；时间过长，则损伤大，导致电活动也丧失，二者均不易发生RA[8]。

表1 各组家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比较（±s ，n = 10）

表1 各组家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比较（±s ，n = 10）

注：与假手术组比较，# P＜0.01；与针刺组比较，△P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01

组 别CK-MB/（ng/mL）LDH/（ng/mL）SOD/（U/mL）假手术组 16.17±4.32 69.30±14.39 111.38±10.23模型组 79.87±6.65# 321.02±14.16# 26.38±7.41#胺碘酮组 43.23±4.16#△▲ 176.49±16.89#△▲ 69.80±9.18#△▲针刺组 48.63±4.68#▲ 191.34±13.49#▲ 59.26±9.61#▲

CK和LDH是心肌细胞胞质中存在的两类酶，当细胞膜通透性增加时，这些物质能透过细胞膜释放到冠状动脉中[9]。心肌酶的释放量是缺血心肌损害程度的重要标志[10]，而心肌酶漏出是心肌缺血再灌注损伤主要表现之一[11]。SOD广泛存在于组织细胞内,可通过自身氧化还原反应将毒性极强的超氧化物自由基阴离子O2-而岐化成无毒的O2和H2O2，是消除自由基对机体损伤的关键酶[12]。本研究发现，RA模型兔血清CK-MB和LDH含量均明显升高，SOD含量明显降低。

胺碘酮为一种常用的高效抗心律失常药物[13]，对心肌细胞膜的钠、钙和钾通道有抑制作用，可降低窦房结、普肯耶纤维的自律性和传导性，特别对急性心梗后发生的室速是最有效药物之一[14]。此外，胺碘酮也有扩张冠状动脉，减少心肌耗氧量，及清除氧自由基，保护心肌细胞免受氧化损伤作用。本实验结果显示，胺碘酮能显著降低RA模型兔血清CK-MB、LDH含量，提高SOD含量。

心肌缺血预适应（IPC）[15]对心肌具有强大的内源性保护作用，能显著减少在随后较长时间缺血后所引起的高能磷酸化合物的耗竭和心肌梗死面积，有效地减少心肌缺血再灌注损伤。近年来，IPC诱导因素发展到针灸预适应，即通过针刺预处理达到缺血预适应样的作用。本实验证实，调心安神针刺法预处理可明显降低RA模型兔CK-MB、LDH水平，提高SOD水平。这可能是通过提高SOD活性，减轻自由基对细胞的损伤，减轻心肌超微结构破坏，促进离子通道功能恢复等多种途径，从而恢复心肌正常收缩及传导功能，实现针刺对RA心肌的保护作用。