高效液相色谱法检测头孢替唑残留的检验方法分析

河南省驻马店市食品药品检验所（463000）赵正威 赵晓丽

头孢菌素是一类临床常用的抗生素，因为抗菌能力强、抗菌谱的范围广泛、临床效果显著，头孢菌素类药物在抗菌药物中占有非常重要的地位。其合成原料来自于天然冠头孢菌，根据发现发明的年代以及其抗菌特点和强度，头孢菌素一共分为四代。第一代头孢菌素对各种链球菌和葡萄球菌等革兰阳性菌比较敏感，对革兰阴性杆菌则抗菌能力较弱。头孢替唑是一种半人工合成的头孢类药物，属于第一代头孢衍生物，具有广谱的抗菌能力，在临床上广泛应用于呼吸道和泌尿道等部位的感染[1]。对药物的残留进行检测是评估药品是否合格的一种主要方式。国内主流的药物残留检测方法有液相色谱法和气相色谱法，而高效液相色谱法在液相色谱法的基础上进行了改进，是目前检测头孢替唑药物残留的主要方法。文章将从信噪比与检测限等方面入手，应用该方法检测头孢替唑残留，对其检测效果进行评价分析。现将情况汇报如下。

1 材料与方法

1.1 器材与材料 使用仪器的选择方面，我们选用Agilent 1260高效液相色谱仪作为分析仪器；使用梅特勒XS205DU精密天平来称量药物样品；并同时准备多个移液管和25ml、50ml、100ml三种容积的容量瓶用来制备不同浓度的对照样品。

试剂需准备乙腈和枸橼酸分别作为色谱纯和分析纯，并准备相应纯化水，以及需要分析的头孢替唑样品。

色谱条件方面，使用3g枸橼酸加水稀释成900ml和90∶10的乙腈作为流动相；流速设置为0.8ml/分钟；波长254nm；色谱柱的柱温调至30℃；进样量20μl。

附表 各组储备液的浓度值与峰面积值

1.2 步骤与方法 （1）制备储备液：使用天平称取样本头孢替唑25.47mg，全部放入一25ml容量瓶中，加水至25ml，使其溶解，并震荡摇匀。（2）对样本定性、定量的重复性实验：①配制高浓度对照溶液：用移液管取1.2ml的储备液，加入纯水制成100ml的高浓度对照溶液。②配制中浓度对照溶液：用移液管取1.0ml的储备液，加入纯水制成100ml的中等浓度对照溶液。③配制高浓度对照溶液：用移液管取0.8ml的储备液，加入纯水制成100ml的低浓度对照溶液。④检测方法：取不同浓度的对照溶液分别注入高效液相色谱仪，检测并记录数据。（3）储备液浓度的测定：最低剂量取0.6ml，最高剂量取1.4ml，每隔0.2个单位取一次样，取样后分别注入仪器中检测。（4）仪器的基线稳定后，注入空白溶液，检测噪音，计算信噪比。

1.3 观察指标 对比各组储备液的峰面积和浓度，观察样本的检测限和信噪比。

1.4 统计学分析 计量资料使用SPSS22.0进行统计，对浓度与峰面积的数值进行相关性分析。

2 结果

2.1 各组浓度与峰面积数值见附表，结果显示，在该头孢替唑样本的浓度0.005622mg/ml～0.013470mg/ml与峰面积呈现良好的线性相关关系，其线性方程为Y=31803X+25.49，相关系数r=0.9858。

2.2 样本的检测限与信噪比：样本浓度在0.005622mg/ml时检测到的信噪比数值是4.65，符合国家信噪比标准（≥3），检测限0.005622mg/ml。

3 讨论

头孢替唑作为临床抗菌的一线用药，是一种广谱的抗菌素，对革兰阳性和阴性菌都有杀灭作用，但尤其对革兰阳性菌具有更强的杀灭能力，其主要作用机制在于可以抑制有害病菌的细胞壁形成，使病菌水解死亡[2]，临床实践证明其抗菌效果十分强大。头孢替唑进入机体后主要分布在肝肾和血清中，其半衰期比较长，代谢缓慢，可以在人体内持续起抗菌作用，但同样的也带来药物残留造成不良反应的问题。现如今制药行业进步飞快，在药物为人民的健康保驾护航的同时，药品的质量安全问题也逐步进入人们的视野，在科技高速发展的今天，世界各国都十分重视药品的安全问题，不合格的药物流入市场将对患者造成不可估量的损失，甚至威胁到生命安全，如：头孢替唑中的杂质过多将会导致患者的严重过敏反应。特别是抗生素类的药物，该类药物使用的范围广、剂量大，尤其需要慎重制造与使用。

对药物残留进行检测，旨在于确保药物在使用过程中的安全性。一方面能尽早发现或减少因药物残留造成的不良反应以及药物的相互作用，另一方面，可以检测药物的纯净度，筛除掉不合格的药物，促进制药工艺的改进提升，减少因制备工艺粗糙或其他原因致使的药物杂质增多。

目前，高效液相色谱法是检测药物残留的主流方法[3]。液相色谱法与传统的气相色谱法的检测方法和其他各方面都有不同之处。液相色谱法要求将被检的物质溶解成溶液，放入色谱柱当中，在该液体的流动的过程中，溶液中的各种物质与高效液相色谱仪内的固定相进行反应和相互作用，最终造成样本内的各种混合物的分离和解体[4]，分离之后的样品按照一定的分级分类进行检测和分析。但是传统的液相色谱法在检测过程中分离的时间长，效率低下，检测分析的速度也十分的缓慢，操作步骤比较复杂[5]。而高效液相色谱法与普通的液相色谱法相比，使用高压高速的方法，不仅分离快、分析效率高而且操作十分简单便捷，这种检测方法越来越受到各个检验检测领域的重视。

本研究通过制备不同浓度的头孢替唑溶液，将其放入高效液相色谱仪中进行分离检测，计算各浓度溶液的峰面积，使用相关性分析，笔者发现，该溶液的峰面积随浓度的改变而改变，且这种改变具有线性相关关系，相关系数r=0.9858，并得出其方程为Y=31803X+25.49。本实验的研究结果表明，在该头孢替唑样本的浓度0.005622mg/ml～0.013470mg/ml与峰面积呈现良好的线性相关关系。而样本浓度在0.005622mg/ml时检测到的信噪比数值是4.65，符合国家信噪比标准，检测限0.005622mg/ml。数据提示高效液相色谱法在应用于头孢替唑药物残留的检测中的结果是可信且有效的。

使用高效液相色谱法检测头孢替唑的药物残留，可以更有效地分离样品中的混合物，能够更加清楚地分析药物的各种组成成分，并且本实验检测所花费的时间不到0.5h，说明高效液相色谱法是一种十分高效快速的检验方法。可以认为使用高效液相色谱法检测头孢替唑的药物残留具有效率高、准确度高、分析检测速度快等优点。

综上所述，使用高效液相色谱法对头孢替唑的药物残留进行检测有着高效、快速、方便以及检测结果可信度高等一系列的优点，可以提高检测效率和准确度，提高检测人员的工作效率。高效液相色谱法有望为我国食品药品安全作出贡献，值得在其他领域推广使用。