N-α-乙酰基转移酶10蛋白在宫颈癌中的表达及与患者临床特征的关系

张晓婷，韩锐，王军#

1新疆维吾尔自治区计划生育科学技术研究所/新疆维吾尔自治区生殖健康医院检验科，乌鲁木齐830001

2新疆医科大学第一附属医院生殖医学中心产前诊断科，乌鲁木齐830054

高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持续性感染是宫颈癌发生的主要因素，但宫颈癌的发生及发展与多种基因、多个阶段、多种信号通路的共同参与密切相关[1-4]。N-α-乙酰基转移酶 10（N-α-acetyltransferase 10，NAA10）基因是一种新型的乙酰化转移酶基因，定位于人染色体的Xq28区域，能够编码含有235个氨基酸的N-α-乙酰基转移酶10蛋白（N-α-acetyltransferase 10 protein，NAA10p）[5-6]。NAA10p在结肠癌、胰腺癌、乳腺癌和口腔鳞状细胞癌等肿瘤组织中过表达，影响着肿瘤的不同阶段[7-8]。而NAA10p在宫颈癌组织中的表达尚未见报道，因此，本研究探讨NAA10p在宫颈癌组织中的表达及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年11月至2018年10月新疆维吾尔自治区计划生育科学技术研究所收治的宫颈癌患者。纳入标准：①经病理检查确诊为宫颈癌；②临床及随访资料完整；③术前均未接受放、化疗及生物治疗等。排除标准：合并心血管和内分泌系统疾病患者。根据纳入与排除标准，本研究共纳入38例宫颈癌患者，年龄43～71岁，中位年龄55.6岁，＜50岁21例，≥50岁17例；肿瘤直径：≥4 cm 23例，＜4 cm 15例；按2009年国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰa期18例，Ⅰb～Ⅱa期20例；分化程度：高分化8例，中分化12例，低分化18例；有淋巴结转移20例，无淋巴结转移18例。取38例宫颈癌患者的宫颈癌组织和相应的癌旁正常组织（距离肿瘤病灶边缘＞4 cm的正常组织）。

1.2 免疫组织化学染色方法

石蜡包埋并连续切成4 μm厚度的切片，二甲苯Ⅰ和Ⅱ溶液中各浸泡10 min脱蜡，在梯度（100%、95%、90%、80%和70%）乙醇中各浸泡5 min脱水，3%双氧水于室温避光10 min灭活内源性过氧化物酶，放入枸橼酸钠缓冲液中加热30 min进行抗原修复。滴加山羊血清进行非特异性封闭，37℃孵育15 min。用滤纸吸去封闭液，滴加一抗，放入湿盒，4℃孵育过夜；滴加二抗，37℃孵育1 h，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）清洗，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木素复染，中性树脂中封片。

1.3 结果判定

NAA10p蛋白定位于细胞质，呈浅黄色、棕黄色或棕褐色表达。根据细胞染色程度进行评分：未染色计0分，浅黄色染色计1分，棕黄色染色计2分，棕褐色染色计3分。根据阳性细胞所占比例进行评分：先在100倍光镜下扫视整个组织切片，选取5个细胞密度高的区域，然后在400倍光镜下计数5个区域中阳性细胞所占比例并进行评分，阳性细胞所占比例＜25%计1分，阳性细胞所占比例为25%～49%计2分，阳性细胞所占比例为50%～74%计3分，阳性细胞所占比例≥75%计4分。将染色程度与阳性细胞所占比例评分相乘，0～2分为阴性表达，≥3分为阳性表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用Fisher确切概率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NAA10 p表达情况的比较

宫颈癌组织中NAA10p的阳性表达率为73.68%（28/38），明显高于癌旁正常组织的23.68%（9/38），差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.2 不同临床特征宫颈癌患者宫颈癌组织中NAA10 p的表达情况

不同年龄、肿瘤直径宫颈癌患者宫颈癌组织中NAA10p阳性表达率比较，差异均无统计学差异（P＞0.05）。分化程度为中高分化、FIGO分期为Ⅰb～Ⅱa期和有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中NAA10p阳性表达率均高于低分化、FIGO分期为Ⅰa期和无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 不同临床特征宫颈癌患者宫颈癌组织中NAA10 p的表达情况（n=38）

3 讨论

NAA10是1985年从酿酒酵母中发现的一种乙酰化转移酶，NAA10基因与人类细胞中的基因有40%的同源性，含7个外显子，能够编码由235个氨基酸组成的蛋白质NAA10p，主要通过45～130氨基酸位点发挥其乙酰化转移酶的功能[5-6]，并在多种肿瘤组织中过表达，影响着肿瘤的不同阶段[7-8]。Yu等[9]研究证实胰腺癌、乳腺癌、胃癌和肺癌等组织中NAA10p相对表达量均明显高于癌旁正常组织，且肿瘤组织中NAA10p阳性表达率达52.3%，在癌旁组织中NAA10p阳性表达率为31.5%。Zeng等[10]研究已证实，乳腺癌组织中NAA10p及NAA10mRNA水平高于癌旁正常组织，还证实了NAA10p的表达与患者的FIGO分期、总生存期及无病生存期密切相关。有淋巴结转移的胃癌、肺癌和乳腺癌组织中NAA10p阳性表达率均明显高于无淋巴结转移的组织。郑军等[11]研究表明口腔正常黏膜组织、白斑及口腔鳞状细胞癌组织中的NAA10p阳性表达率依次升高，且NAA10p的表达水平与口腔鳞状细胞癌组织的分化程度、FIGO分期及淋巴结转移密切相关。本研究结果显示，NAA10p在宫颈癌组织中的阳性表达率为73.68%，明显高于癌旁正常组织的23.68%，差异有统计学意义（P＜0.01），表明NAA10p在宫颈癌中的表达水平较高。分化程度为中高分化、FIGO分期为Ⅰb～Ⅱa期和有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中NAA10p阳性表达率均高于分化程度为低分化、Ⅰa期和无淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。这些结果充分表明了NAA10p在宫颈癌的发生发展及淋巴结转移过程中起着重要作用，可能成为患者诊断的有效标志物。

目前，研究认为NAA10p通过调节分子信号通路显著抑制多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭作用。当miRNA-342-5p及miRNA-608过表达能靶向下调结肠癌SW480、SW620细胞中NAA10p的表达，进而显著抑制肿瘤细胞的生长[12]。NAA10p能够促进IκB激酶β（inhibitor kappa B kinase β，IKKβ）介导的乳腺癌生成[13]。Xu等[14]的微阵列分析实验表明，髓细胞白血病1（myeloid cell leukemia 1，MCL1）基因是NAA10下游的靶基因之一，NAA10正向调节MCL1的表达，而敲除NAA10可降低MCL1表达，并诱导肿瘤细胞凋亡。NAA10p也可通过抑制基质金属蛋白酶2（matrixmetalloproteinase 2，MMP2）的降解进而促进骨肉瘤细胞迁移[15]。以上研究说明NAA10p能够通过MCL1和MMP2等信号通路促进肿瘤细胞生长与侵袭，这些机制的探讨有助于本课题组下一步的研究。

综上所述，NAA10p在宫颈癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织，分化程度为中高分化、FIGO分期Ⅰb～Ⅱa期和有淋巴结转移的宫颈癌患者的宫颈癌组织中NAA10p阳性表达率较高，可作为判断宫颈癌发生发展及淋巴结转移的参考指标。未来需要进一步深入研究，期望NAA10p可以成为宫颈癌基因治疗的有效靶点之一。