SOX方案联合腹腔镜辅助D2胃癌根治术治疗弥散型进展期胃癌的疗效及对血清lncRNABC200和IL-33的影响

谢京典，徐慧杰

枣阳市第一人民医院普外科，湖北襄阳441200

胃癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤，高发于老年人群，其病死率在各类恶性肿瘤中位居前列[1]。胃癌患者的主要临床症状为吞咽困难、上腹不适、呕吐、恶心及消化道出血等，肿瘤淋巴结转移和复发是胃癌患者死亡的主要因素。胃癌主要分为弥散型、肠型和混合型三类，弥散型胃癌是胃癌细胞之间缺乏连接蛋白衔接，导致肿瘤在浆膜腔内弥散性生长和转移，且近年来弥散型胃癌的比例正在逐渐扩大。弥散型胃癌是一类分化差和胃远端发病的癌症，临床上主要治疗方法是手术和化疗[2]。腹腔镜辅助D2胃癌根治术具有创伤小、恢复快等优点，但其应用于弥散型进展期胃癌的临床疗效及复发情况仍有待研究[3]。替吉奥+奥沙利铂（SOX）方案对于抑制肿瘤的形成，降低肿瘤细胞活性有着良好的临床疗效，且不良反应较小[4]。长链非编码 RNA（long chain noncoding RNA，lncRNA）BC200是在人类神经细胞中特异性表达的一种lncRNA，正常人体中lncRNA BC200水平较低，但在肿瘤组织中却显著表达，与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移存在密切关系，白细胞介素-33（interleukin-33，IL-33）可以诱导血管内皮生长因子的形成，促进胃癌细胞增殖、侵袭和转移。本研究采用SOX方案联合腹腔镜辅助D2胃癌根治术对弥散型进展期胃癌进行治疗，并探讨其对血清lncRNA BC200和IL-33的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集枣阳市第一人民医院2012年1月至2015年1月弥散型进展期胃癌患者的病历资料。纳入标准：①经病理穿刺活检和劳伦分型[5]确诊为弥散型进展期胃癌；②生存期＞3个月；③既往无放、化疗史及手术治疗史；④治疗后复发或转移时间＞6个月。排除标准：①肝肾或心肺等严重功能障碍；②不耐受手术及化疗者；③合并其他恶性肿瘤；④存在认知功能障碍或精神疾病。根据纳入、排除标准，共纳入78例弥散型进展期胃癌患者，根据治疗方法不同分为观察组和对照组，每组39例。观察组中，男性24例，女性15例；年龄44～84岁，平均（58.6±3.9）岁；肿瘤直径1～10 cm，平均（4.3±0.8）cm；TNM分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期17例，Ⅲ期14例。对照组中，男性22例，女性17例；年龄41～82岁，平均（57.4±4.1）岁；肿瘤直径1～10 cm，平均（4.2±0.7）cm；TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期15例，Ⅲ期15例。两组患者性别、年龄、肿瘤直径和TNM分期比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治疗方法

所有患者均给予腹腔镜辅助D2胃癌根治术治疗，取平卧位，所有患者均采用气管插管静吸复合全身麻醉。在患者左上腹部放置套管针，建立气腹，腹腔内压设置为12～14 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），通过腹腔镜观察患者盆腔和腹腔并确定肿瘤位置，在近结肠缘处进入小网膜囊行胃及周围淋巴结清扫术。在上腹正中行5 cm切口，并用切口保护器维持切口，采用荷包钳切断并夹闭食管下端，取出胃癌组织，建立消化道并放置引流管，关闭腹腔，常规缝合切口。观察组在此基础上给予SOX方案化疗，于每日早晚餐后口服替吉奥胶囊，体表面积＜1.25 m2服用 40 mg，1.25～1.50 m2服用 50 mg，＞1.50 m2服用60 mg；第1天至第14天联合静脉滴注奥沙利铂130 mg/m2；每3周为1个疗程，持续治疗2个疗程。

1.3 观察指标

1.3.1 疗效判定 依据实体瘤疗效评价标准1.0版（response evaluation criteria in solid tumors 1.0，RECIST 1.0）[6]进行疗效判定：完全缓解（complete response，CR），癌症病灶完全消失4周及以上；部分缓解（partial response，PR），肿瘤病灶体积缩小30%以上，持续4周及以上；疾病稳定（stable disease，SD），癌症病灶缩小小于30%或增大小于20%；疾病进展（progressive disease，PD），癌症病灶增大大于20%。总有效率=（CR+PR）例数/总例数×100%。

1.3.2 血清肿瘤标志物测定 所有患者在治疗前和治疗后3个月于清晨空腹抽取静脉血5 ml，3500 r/min离心10 min取上清，进行分装后，留待检测使用。检测血清肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖类抗原 50（carbonhydrate antigen 50，CA50）、糖类抗原 72-4（carbonhydrate antigen 72-4，CA72-4）和糖类抗原 19-9（carbonhydrate antigen 19-9，CA19-9）水平。采用Auto Lumo A2000化学发光测定仪和磁微粒化学发光试剂盒，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.3.3 lncRNABC200测定 提取RNA，取250 μl分装的血清加入750 μl Trizol试剂，混匀后静置10 min；再加入 200 μl氯仿，振荡30 s后静置15 min；12 000 r/min离心15 min取上清，在上清中加入500 μl异丙醇混匀，-20℃冰箱保存过夜，4000 r/min离心10 min取沉淀。逆转录获得cDNA，所有操作按照逆转录试剂盒说明书进行。上游引物：5'-CTCAGGGAGGCTAAGAGGCG-3'，下游引物：5'-TTTCCTTTTTCTGGAGAACGGG-3'，由 Riobio公司设计。荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测Ct值，具体操作按照荧光定量PCR试剂盒说明书进行。以GAPDH为内参基因，采用2-△△Ct公式计算lncRNABC200相对表达量。

1.3.4 IL-33测定 取血清采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测所有患者治疗前后的IL-33水平。

1.3.5 手术并发症、术后2年生存率和无瘤生存率所有患者术后统计切口感染、腹腔出血、吻合口瘘、胃排空障碍和腹腔积液等并发症的发生情况；并统计术后2年生存率和无瘤生存率。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行分析，计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验，组内比较采用配对t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效的比较

观察组患者总有效率为74.4%（29/39），高于对照组的 35.9%（14/39），差异有统计学意义（χ2=4.987，P=0.021）。（表1）

表1 两组弥散型进展期胃癌患者的临床疗效[n（%）]*

2.2 血清肿瘤标志物水平的比较

治疗前，两组患者血清肿瘤标志物水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组患者CEA、CA50、CA72-4和CA19-9水平均较治疗前降低，观察组患者CEA、CA50、CA72-4和CA19-9水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 治疗前后两组弥散型进展期胃癌患者血清肿瘤标志物水平的比较

2.3 lncRNABC200和IL-33水平的比较

治疗前，两组患者lncRNA BC200和IL-33水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，两组患者lncRNA BC200和IL-33水平均较治疗前降低，观察组患者lncRNA BC200和IL-33表达水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表3）。

2.4 手术并发症、术后 2年生存率和无瘤生存率的比较

两组患者手术并发症发生率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组患者术后2年生存率和无瘤生存率均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表4）

表3 治疗前后两组弥散型进展期胃癌患者lncRNA BC200和IL-33水平的比较

表4 两组弥散型进展期胃癌患者手术并发症、术后 2年生存和无瘤生存的比较

3 讨论

在中国，胃癌是高发性恶性肿瘤，在所有恶性肿瘤中发病率高居第2位[7]。弥散型进展期胃癌的发生与幽门螺杆菌感染、环境、食物和遗传等多种因素有关，手术治疗是弥散型进展期胃癌治疗的常见方式，但是传统开腹手术创伤大，患者出血量较多，术后康复缓慢，预后较差[8]。腹腔镜辅助D2胃癌根治术利用了腹腔镜技术的优势，具有创伤小、失血少，患者恢复快等优点，结合SOX方案化疗可以显著提升临床治疗效果。本研究结果表明，观察组患者总有效率为74.4%（29/39），高于对照组35.9%（14/39），差异有统计学意义（P＜0.05）。替吉奥是一种新型的氟尿嘧啶药物，由黏膜保护剂奥替拉西钾、生化调节药物吉美嘧啶和5-氟尿嘧啶前体替加氟组合而成，吉美嘧啶能够抑制5-氟尿嘧啶的降解速度，从而保障胃癌患者机体5-氟尿嘧啶浓度，延长药物抗肿瘤时间，加上奥替拉西钾对于胃黏膜的保护和修复作用，其治疗优势显著[9-10]。奥沙利铂是第3代的抗癌铂类药物，能够显著抑制肿瘤的发生和发展，降低肿瘤细胞活性，对人体的毒性伤害较小。黄正明[11]研究发现，采用SOX方案治疗弥散型进展期胃癌可以提升腹腔镜辅助D2胃癌根治术的治疗效果，降低术后复发率，这与本研究的结果相一致。

CEA是临床上公认的肿瘤标志物，其对于结直肠癌、胃癌等的疗效和预后监测十分敏感。弥散型进展期胃癌患者CA50水平显著高于正常人群，可能与其细胞恶化糖基转移酶活性变化有关[12]。CA72-4是诊断良、恶性肿瘤的主要参考指标，对于弥散型进展期胃癌的诊断和监测具有很大的价值。CA19-9与胃癌患者分期有着显著关系，分期越高，CA19-9水平也越高。因此，通过CEA、CA50、CA72-4和CA19-9水平的监测可以清楚地了解弥散型进展期胃癌患者治疗前后肿瘤变化情况。本研究结果表明，治疗后两组患者CEA、CA50、CA72-4和CA19-9水平均较治疗前降低，观察组患者CEA、CA50、CA72-4和CA19-9水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。表明SOX方案联合腹腔镜辅助D2胃癌根治术治疗弥散型进展期胃癌显著抑制了肿瘤细胞活性；同时，治疗后，两组患者lncRNA BC200和IL-33水平均较治疗前降低，观察组患者lncRNA BC200和IL-33水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。lncRNA是一种不编码蛋白质的长度为200个核苷酸以上的RNA，lncRNA中多种分子如H19和HOX等与肿瘤的发生有着密切关系。研究发现，其在非小细胞肺癌、胃癌、乳腺癌和卵巢癌等癌症细胞的发生、增殖、侵袭和迁移中有着重要的作用[13-14]。IL-33能够通过c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）信号和基质裂解素2-细胞外信号调节蛋白激酶1/2（stromelysin 2-extracellular regulated protein kinase1/2，ST2-ERK1/2）信号通路促进胃癌的侵袭及转移，对于弥散型进展期胃癌患者病情的诊断、进展和预后有着重要的参考意义[15-16]。

本研究结果表明，两组患者手术并发症发生率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组患者术后2年生存率和无瘤生存率均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。联合治疗安全性较高，并能显著提升患者远期生存率。综上所述，采用SOX方案联合腹腔镜辅助D2胃癌根治术对弥散型进展期胃癌的治疗效果相比于腹腔镜辅助D2胃癌根治术单一治疗优势显著，能够显著改善患者lncRNA BC200和IL-33水平，从而抑制肿瘤增殖和炎性反应，可明显延长患者生存时间，且安全性较高。