绞股蓝总苷分散片中绞股蓝皂苷A含量测定*

徐文峰，金鹏飞，徐硕，邝咏梅，何笑荣

(北京医院药学部国家老年医学中心，药物临床风险与个体化应用评价北京市重点实验室，北京 100730)

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物，具有清肺化痰、补气生津、健脾安神等功效[1]，其化学成分复杂，主要包括皂苷类[2-3]、多糖类[4-5]、黄酮类[6-7]、氨基酸[8-9]、微量元素[10-11]等多种成分，主要活性成分为皂苷类[12]。现代药理研究表明绞股蓝具有降血脂、抗动脉粥样硬化等作用[13]。分散片具有分散状态佳、崩解时间短、药物溶出迅速、吸收快、生物利用度高等特点[14]。绞股蓝总苷分散片临床主要用于高脂血症等的治疗。达玛烷型皂苷类成分绞股蓝皂苷A是绞股蓝中含量较高且有效的单体成分[15]。笔者在本研究建立高效液相色谱法测定绞股蓝总苷分散片中绞股蓝皂苷A含量，报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器 Agilent 1260液相色谱(配有G1311C型四元梯度泵，G1329B型自动进样器，G1316A型柱温箱，G4212B 型DAD检测器；Agilent Technologies，美国)；XP-205电子天平(瑞士Mettler Toledo公司，感量：0.01 mg)；KQ-800KDE超声仪(中国昆山市超声仪器有限公司)；Milli-Q超纯水处理系统(美国Millipore)。

1.2试药 乙腈(色谱纯，批号：165741，美国Fisher公司)；实验室用水为超纯水；绞股蓝皂苷A对照品(批号：drk-1392-911223，成都德锐可生物科技有限公司，含量：98.0%)；人参皂苷Rb1(批号：110704-200318)，人参皂苷Rb3(批号：111686-200501)，人参皂苷Rg1(批号：110703-200424)，人参皂苷Rd(批号：111818-201603)，均由中国食品药品检定研究院提供；绞股蓝总苷分散片(亚宝药业集团股份有限公司，批号：160702，160901，161101，规格：每片含绞股蓝总苷60 mg)；羟丙基纤维素(国药集团化学试剂有限公司，批号：20151020)；羧甲基淀粉钠(国药集团化学试剂有限公司，批号：20150311)；硬脂酸镁(营口市第二制药厂生产，北京市燕京制药厂分装，批号：20000609)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Alltima C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(31：69)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长210 nm；进样体积：20 μL；柱温为30 ℃。样品进样前均经过孔径0.22 μm尼龙滤膜滤过。

2.2对照品溶液的制备 取绞股蓝皂苷A对照品16.5 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解并用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为绞股蓝皂苷A储备液(0.33 mg·mL-1)。精密量取绞股蓝皂苷A储备液1，2，3，4，5 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀释成浓度约为33，66，99，132，165 μg·mL-1的绞股蓝皂苷A对照品溶液。中间浓度的对照品溶液用作含量测定。

2.3供试品溶液及阴性对照溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量(相当于绞股蓝总苷40 mg)，置10 mL量瓶中，加甲醇适量，超声10 min，甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别称取药品说明书中记录的辅料羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁各0.1 g，置于10 mL量瓶中，同法操作，配制不含绞股蓝总苷的阴性对照溶液，用于专属性实验。

2.4专属性实验和系统适应性实验 分别进样分析阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液，结果见图1，样品中其他成分和制剂辅料不干扰绞股蓝皂苷A的测定。理论板数按绞股蓝皂苷A计算不低于3000。供试品溶液中主峰纯度检测阈值设定为990，应符合规定。

2.5线性关系考察 取“2.2”项对照品溶液分别进样，记录色谱图，以浓度(μg·mL-1)为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。得到线性方程为Y=6.31X-7.95，r=1.000 0，说明绞股蓝皂苷A浓度在32.69～ 163.46 μg·mL-1内与峰面积呈良好线性相关。将对照品溶液逐级稀释，在信噪比(S/N)约为10.0时测得定量限为0.098 μg·mL-1，在S/N约为3.0时测得检测限为0.033 μg·mL-1。

2.6精密度和稳定性实验 取中间浓度的对照品溶液连续进样6次，记录绞股蓝皂苷A峰面积，峰面积的RSD为0.36%(n=6)，说明仪器精密度良好。对供试品溶液(批号：160702)分别于0，2，4，8，12，24 h进样分析，峰面积的RSD为0.85%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7重复性实验 取绞股蓝总苷分散片(批号：160702)制备供试品溶液6份，分别进样分析，计算得到绞股蓝皂苷A含量，含量的RSD为1.9%(n=6)，说明方法的重复性良好。

2.8加样回收率实验 精密称取样品(批号：160702，平均片质量为0.465 6 g)粉末6份，分别精密加入绞股蓝皂苷A储备液1.5 mL，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制得各加样供试品溶液，进样测定，计算加样回收率和RSD，结果平均回收率为97.2%，RSD=1.5%。见表1。

2.9样品含量测定 应用本文建立的方法对3批绞股蓝总苷分散片进行测定，每个样品制备3份，取平均值，测得批号为160702，160901，161101的样品中绞股蓝皂苷A的含量分别为4.05，3.88和3.21 mg·g-1，说明绞股蓝总苷分散片生产工艺稳定。

1.绞股蓝皂苷A

表1 绞股蓝皂苷A加样回收实验结果

3 讨论

3.1检测波长的选择 取绞股蓝皂苷A的对照品溶液，在200～400 nm范围内进行全波长紫外光谱扫描，结果显示绞股蓝皂苷A呈现末端吸收，故选用210 nm作为绞股蓝皂苷A的检测波长。

3.2提取方式的选择 分别考察60%甲醇溶液、80%甲醇溶液以及甲醇作为提取溶剂时提取效率，结果表明，甲醇的提取效率最高，故选择甲醇为提取溶剂；提取时间分别考察超声10，20和30 min，结果表明超声提取10 min即可将样品中绞股蓝皂苷A提取完全。

3.3流动相的选择 参考文献[16-20]，考察甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸水等不同流动相，发现以甲醇作为有机相时基线漂移相对严重，末端吸收干扰较强；以乙腈作为有机相时基线相对平稳，分离效果好，在水相中加入磷酸溶液调节pH值，则对绞股蓝皂苷A的峰型影响不大，所以选择乙腈-水为流动相。

3.4专属性实验 本实验考察绞股蓝总皂苷中已有含量测定研究报道的皂苷类成分，对绞股蓝皂苷A含量测定的干扰，在本实验条件下，绞股蓝皂苷A与人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd的分离度均大于1.5，说明上述成分不会干扰绞股蓝皂苷A的含量测定。

本实验采用高效液相色谱法建立绞股蓝总苷分散片中有效成分绞股蓝皂苷A含量测定方法，该方法操作简便，结果准确可靠，可为绞股蓝总苷分散片以及含有绞股蓝总皂苷的其他制剂的质量控制提供参考。