高效液相色谱法同时测定肉制品中10种水溶性合成色素

色素分为天然色素和合成色素，相较于前者，化学方法合成的合成色素成本低，化学性质稳定，色彩亮丽， 配色方便，易溶解调色[1,2]。用于食品中，可以改善食品的外观，提高消费者的购买欲，因此色素被广泛用于肉制品、糖果制品、罐头等食品中。过多地摄入色素可致畸致癌，我国对色素使用种类和含量有严格的限制。GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》规定了肉制品中可允许使用色素的含量，但由于生产环节中生产人员操作不当等原因，色素滥用或超标使用情况时有发生，因此色素含量的测定也是食品安全监控不可缺少的一部分，GB 5009.35-2016食品中合成着色剂的测定方法操作繁琐，适用范围窄，且不能使赤藓红与其他色素一起测定，适用范围不包括肉制品及水果罐头等产品，检验色素种类少。针对这些问题，实验室在参考GB 5009.35-2016、 GB/T 9695.6-2008、GB/T 21916-2008的基础上，优化了肉制品的检测方法，改进提取方法和净化方法，建立的方法可同时测定肉制品中柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、酸性红、赤藓红、靛蓝、亮蓝十种合成着色剂。

实验部分

主要仪器：带二极管阵列检测器的高效液相色谱仪（Thermo fisher），超声波清洗仪（杭州净宝超声波科技有限公司），高速冷冻离心机（sigema）、45位氮吹仪（美国Organomation），多位涡旋混匀器（杭州米欧DMT-2500）、PWAX固相萃取柱（安捷伦）。

色谱条件：色谱柱:C 1 8柱 ,4.6mm×250mm,5μm（Thermo fisher， 进样量:10μL，柱温:35℃，二极管阵列检测器：波长254nm，流动相：A为甲醇，B为0.02mol/L乙酸铵水溶液，梯度洗脱：0-4min，10%A-35%A，4-8min，35%-90%A,8-11min，90%A保持，11-15in，90%-10%A，15-20min，10%A保持。

标准溶液配制：分别取色素标准溶液5mL置于50 ml 容量瓶中， 加水溶解并定容至刻度，混匀。 -4℃ 下保存。根据需要，稀释成相应浓度的标准使用液。

样品处理：称取5g(精确至0.001g)粉碎的样品于50mL离心管中,加25mL石油醚除去油脂,重复3次,氮气吹干石油醚,加(氨水+乙醇 70%)提取2-3次，转移出提取液，氮气去除有机溶剂，水复容。提取液全部转移到经6mL甲醇，6mL水活化后的PWAX柱，用6mL水6mL甲醇,6mL水淋洗，用6mL2%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液于50℃氮气吹干，用1mL水定容,超声震荡溶解,过0.45μm水系滤膜，待测。

结果与讨论

分离性：用上述梯度洗脱程序和色谱柱，可使10种水溶色素柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、酸性红、赤藓红、靛蓝、亮蓝有很好的分离性，计算峰面积时不会造成干扰。

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线性范围和检出限：配制浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg/L的色素混合标液，按优化的色谱条件分析，以峰面积Y对相应浓度X进行线性回归计算，以3倍信噪比为检出限计算。10种色素在0.5-20.0mg/L范围内线性良好。检出限在0.05～0.25mg/kg之间。

加标回收：选用空白肉制品中做1、5、20mg/kg三个水平的加标，按建立的实验方法测定，平行测定5次，外标法定量，回收率在83.4%～98.5%之间，相对标准偏差（RSD）为0.8%～4.6%， 说明方法的重现性良好。

建立的高效液相色谱同时测定食品中 10种色素含量的方法线性关系良好，检出限能满足标准要求，具有良好的准确度和重现性，可同时测定肉制品中的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红、新红、酸性红、赤藓红、靛蓝、亮蓝。