气相色谱-负化学源质谱法测定牛奶中氟虫腈及其代谢物残留

2019-09-10罗彤付文雯黄坤张亚珍张苗王会霞石宝琴郭卢云

中国乳品工业 2019年7期

罗彤，付文雯，黄坤，张亚珍，张苗，王会霞，石宝琴，郭卢云

(1.湖北省食品质量安全监督检验研究院，武汉 430075;2.湖北省食品质量安全检测工程技术研究中心，武汉，430075;3.黄冈市产品质量监督检验所，黄冈438000；4.湖北轻工职业技术学院，武汉 430070)

0 引言

氟虫腈（fipronil）是一种苯基吡唑类杀虫剂，对蚜虫、叶蝉、飞虱、鳞翅目幼虫、蝇类和鞘翅目等一系列害虫均具有很高的杀虫活性[1]。食品安全标准与监测评估司最新发布的GB 2763.1-2018《食品安全国家标准食品中百草枯等43种农药最大残留限量》中对牛奶中氟虫腈的临时限量为0.02 mg/kg（http：//www.sdtdata.com/fx/fmoa/tsLibCard/169176.html）。至今尚没有针对牛奶中氟虫腈及其代谢物检测方法的标准和文献。因此，建立牛奶中氟虫腈及其衍生物残留的检测方法具有重要的意义。文献中氟虫腈的检测方法多为气相色谱-质谱法(GC-MS)[2-6]和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)[1，7-9]。本研究基于QuECh-ERS前处理方法，建立了QuEChERS-气相色谱-负化学源质谱法测定牛奶中氟虫腈及其代谢物残留，为实现牛奶中氟虫腈及其代谢产物残留的快速监测提供技术支持。

1 实验

1.1 仪器与试剂

TSQ 8000evo气相色谱-三重四极杆串联质谱仪，XS204分析天平，Allegra 6412冷冻离心机，XH-C涡旋混合器，Trayster翻转式混匀器。

氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜、氟甲腈（质量浓度100μg/mL），乙腈（色谱纯），氯化钠（分析纯），乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），C18，无水硫酸镁，牛奶样品为市售产品。

1.2 标准溶液和衍生剂的配制

氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜、氟甲腈混合标准使用溶液：将标准溶液用乙腈逐级稀释成质量浓度为10μg/mL标准使用溶液。

混合标准工作溶液：分别移取适量标准使用液，用色谱纯乙腈逐级稀释配制成质量浓度为2.5，5，10，20，30，40，50，100 g/L混合标准工作溶液。

1.3 样品前处理

准确称取牛奶5 g（精确至0.01 g），置于聚乙烯塑料离心管中，加入10 mL乙腈，振荡提取30 min，加入5 g氯化钠，涡旋2 min后于转速为4000 r/min离心5 min。取上清液2 mL至离心管加入100 mg的PSA粉末、100 mg的C18粉末、200 mg无水硫酸镁粉末，涡旋30 s，静置至上层液体无浑浊物；取上层液体过0.22μm滤膜后转移至进样小瓶，待GC-NCI-MS技术分析。

1.4 气相色谱-负化学源质谱条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱：HP-5MS毛细管柱（30.0 m×0.25 mm×0.25μm）；升温程序：初始温度70℃，保持1 min，以30℃/min升温至200℃，保持4 min，以10℃/min升温至270℃，保持1 min；进样口温度250℃；流速为1.0 mL/min；进样体积1μL；进样方式为不分流进样。

1.4.2 质谱条件

负化学源（CI）；离子源温度为150℃，传输线温度为250℃，溶剂延迟时间为5 min，扫描模式为选择离子监测（SIM），监测离子如表1所示。

2 结果及讨论

2.1 QuEChERS方法的优化

分散固相萃取常用的净化剂有PSA和C18等。PSA可吸附糖、有机酸、脂肪酸等极性干扰物；C18可吸附脂肪等非极性干扰物[9]。

本试验对常用的PSA、C18和无水硫酸镁3种填料的使用对加标牛奶样品提取液进行净化，综合考虑回收率、净化效果和基质效应等因素，最终确定净化剂加入量分别为100 mg PSA粉末、100 mg C 18粉末、200 mg无水硫酸镁。

表1 氟虫腈及其代谢物质谱条件参数

2.2 线性范围、检出限和定量限

氟虫腈及其衍生物标准溶液（质量浓度50μg/L）的总离子流如图1所示。以一系列质量浓度（2.5～100μg/L）的标准溶液，在确定的色谱和质谱条件下进行测定。以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线。以3倍信噪比计算检出限(LOD)，以10倍信噪比计算定量限(LQD)。氟虫腈及其衍生物的线性方程、相关系数、检出限和定量限如表2所示。由表2可以看出，氟虫腈及其衍生物的标准曲线的线性关系良好，相关系数（r2）均大于0.9950。氟甲腈、氟虫腈亚砜、氟虫腈、氟虫腈砜的检出限分别为0.02，0.01，0.05μg/kg和0.05μg/kg；定量限分别为0.06，0.03，0.15μg/kg和0.15μg/kg。

图1 氟虫腈及其代谢物(50μg/L)的总离子流

2.3 方法的准确度和精密度

为了验证QuEChERS前处理方法联合GC-NCI/MS测定牛奶中氟虫腈及其代谢物残留的可行性和准确性，实验采用牛奶基质样品进行加标回收率验证，加标水平分别为0.01，0.02，0.05 mg/kg，按照前述方法处理平行测定6次，回收率和精密度如表3所示。由表3可以看出，牛奶基质中氟甲腈、氟虫腈亚砜、氟虫腈和氟虫腈砜方法回收率分别为85.6%～96.7%，89.3%～98.6%，88.9%～99.4%，89.5%～102.4%；相对标准偏差分别为4.7%～6.1%，4.2%～5.5%，3.9%～6.0%，4.0%～5.9%，低于10%。图2为质量分数0.02 mg/kg的加标牛奶样品的定量离子色谱。