HPLC法测定注射用泮托拉唑钠有关物质方法探讨

武衡 王娜 董景丽 郑丹

摘要：目的：对中国药典2015版收录的HPLC法测定注射用泮托拉唑钠有关物质的分析方法深入探讨。方法：采用赛分等液相色谱柱，戴安Ultimate3000高效液相色谱仪，VWD-3100紫外检测器，以磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二钾溶液用磷酸调节pH值至7.0）为流动相A；色谱乙腈为流动相B，梯度洗脱，流速为1.0Ml/min，柱温40℃；检测波长为289nm。结果：本方法为药典收录方法，但实际应用中容易产生异常峰，干扰检测结果。结论：本检测方法专属性强，样品稳定，在用于注射用泮托拉唑鈉有关物质的质量控制时需要注意的问题。

关键词：注射用泮托拉唑钠；高效液相色谱法；有关物质，异常峰

前言：

注射用泮托拉唑钠在临床上主要用于十二指肠溃疡、胃溃疡、急性胃粘膜病变等急性上消化道出血，是继奥美拉唑、兰索拉唑之后上市的第3个质子泵抑制剂[1]。注射用泮托拉唑钠（Pantoprazole Sodium）收载于《中国药典》2015版（二部）[2]，采用HPLC法测定有关物质。经多次实验该方法在适用性方面存在不足，梯度基线在主峰位置存在异常峰。但该异常峰的存在具有不确定性，且无重现性。本文旨在通过出现问题，分析问题过程的探讨，给读者提供帮助，最大限度的降低异常峰及异常峰对结果判定的影响。

1、仪器与试药

1.1实验仪器

戴安Ultimate3000高效液相色谱仪，包括VWD-3100紫外检测器（赛默飞世尔科技有限公司），变色龙chromeleon色谱工作站（美国戴安公司），XS105-DU电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），FE30数显式PH计（上海梅特勒-托利多仪器有限公司），月旭和赛分Amethyst，菲罗门等液相色谱柱。

1.2药品与试剂

药品：注射用泮托拉唑钠（生产单位 ： 河北爱尔海泰制药有限公司，产品规格为每支80mg，产品批号：31170201，31170202，31170203）。

对照品及试剂：乙腈（fisher，HPLC级）。磷酸氢二钾（GR），磷酸（AR）均由天津科密欧化学试剂有限公司提供，水为重蒸馏去离子水。

2、方法与结果

2.1 溶液的制备

有关物质 临用新制。取本品，加溶剂 [0.01mol/L氢化钠溶液 - 乙腈 （1 ： 1 ） ]溶解并稀释制成每 lm l中约含0.4m g的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。另取泮托拉唑对照品约 8 m g ，置10ml量瓶中加0.3%过氧化氢溶液1ml使溶解，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

2.2色谱条件

2.3现象及分析

在实际检测过程中按照药典标准规定临用新制，供试品及自身对照未发生异常。进溶剂后发现在主峰相对保留时间处有一个异常峰，峰面积约 100（见下图1）。有关物质的来源有：降解物、相容性产物[3]。

2.3.1首先考虑是否为进样针残留，充分清洗进样针，重新将溶剂倒入液相小瓶进样，发现异常峰仍然存在，且大小未发生明显变化。

2.3.2接下来认为可能是溶剂污染导致。用与之前所配制的溶剂相同的试剂重新配制溶剂，进样发现仍然存在异常峰且大小未发生明显变化。

2.3.3由以上两次实验可以得出异常峰的出现并非是进样针残留和溶剂所引入。因为该方法为缓冲盐和乙腈梯度洗脱，所以考虑有可能为流动相梯度造成的异常，所以接下来，不进样品，单单采集梯度的基线，发现在主峰位置仍然存在异常峰且大小未发生明显变化（见下图2），故考虑为系统本身或流动相A、B的问题。流动相B相为乙腈，更换新开瓶乙腈后，发现异常峰仍然存在，且大小未发生明显变化，故排除流动相B的问题；更换流动相A配制所需的试剂重新配制A相，重新进样空白，主峰位置仍有异常峰，峰面积减小，进样溶剂峰面积减小，约为（见下图3）。计算结果时将溶剂峰扣除以计算结果。

2.3.4按照之前的试验表明该异常峰的引入为梯度洗脱造成的影响。由于流动相B相为乙腈，故而考虑将流动相A配置为含乙腈%1，%3，%5的溶液，破坏梯度洗脱的比例。但结果表明主峰保留时间随乙腈加入量增加而提前，而该异常峰的保留时间也随主峰的提前而提前，且仍出峰在相同的位置（见下图4、图5、图6），对检验结果的判定造成影响。

由于破坏梯度程序并未解决异常峰引入的问题，所以尝试更换色谱柱子品牌，及规格，以改变主峰及异常峰的保留时间，以避免异常峰的干扰，而试验结果表明，无论是更换色谱柱品牌还是改变色谱柱规格，该异常峰仍然存在，且对主峰仍存在干扰。

截至目前尚不明确该异常峰是否为泮托拉唑主成分，考虑中国药典对泮托拉唑有含量测定的方法为：，照含量测定方法直接进样发生问题的溶剂，并进样定位的对照品，发现溶剂样品主峰位置并无明显残留。

后续检测注射用泮托拉唑钠31170201，31170202，31170203成品存放10天有关物质实验时，彻底清洗管路及系统，进样溶剂及有关对照时，主峰位置无异常峰。之后又做存放15天有关物质实验时，进样前彻底清洗管路及系统，进样溶剂及有关对照时，与主峰保留时间相同处，有一峰面积约100的异常峰，计算结果时将溶剂峰扣除以计算结果。接着考察三批加速1月有关物质时，进样前彻底清洗管路及系统，进样溶剂及有关对照时，主峰保留时间处无异常峰。经过多次实验考察，通过更换不同的液相色谱仪、配制不同的流动相，主峰位置异常峰的出现存在不确定性，且峰面积无重现性。

3、讨论

经过多次实验分析，所用的溶剂、流动相配制所用的试剂经过不同批号的改变之后，在主峰保留时间处，进样空白、溶剂及有关对照不定期的出现异常峰，且峰面积大小无重复性。通过以上实验得出结论：此异常峰归结为检验方法的问题，以后再做泮托拉唑钠有关物质时，要清洗液相仪器的流路及色谱柱，如果溶剂还是出现与主峰保留时间相同的异常峰，以扣除溶剂峰计算最终结果。此检验方法中存在的异常峰的出现，目前未找到真正原因，在后续检验工作中仍继续调查。

参考文献：

[1]傅宏义（Fu HY）.新型质子泵抑制剂-泮托拉唑[J]. 药物不良反应杂质（Adeverse Drug React J），1999，1（3）：173.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[M].北京：化学工业出版社，2015：706.

[3]论坛ID：hongwei2000 DEC，2014.

作者简介：武衡，男，河北省石家庄人，助理工程师，多年从事药物分析工作。