青霉素V钾分散片含量测定方法由紫外分光光度法改进为高效液相色谱法

肖植国 许庆

【摘要】目的：对比紫外分光光度法改进为高效液相色谱法测定的效率，对比两种检测方法价值。方法：采购5个厂家50个批次的青霉素V钾片，每个厂家10个批次，配置供试品溶液、标准品溶液。分别进行紫外分光光度法改进为高效液相色谱法检测，绘制标准曲线，进而计算不同厂商与批次青霉素V钾分散片含量，进行可靠性、精密度、重复性、稳定性、回收率试验，计算相对保留时间等指标。结果：相较于由紫外分光光度，高效液相色谱法标准曲线相关系数r明显上升，同时最低检出限也显著下降，精密度试验、稳定性试验、重现性试验的相对保留时间与峰面积低于红外光谱。结论：高效液相色谱法对青霉素V钾分散片含量测定性能有一定程度的提高。

【关键词】紫外分光光度法;高效液相色谱法; 青霉素V钾分散片;含量分析

我国开始生产青霉素V钾片时间较晚，生产工艺并不成熟，药品质量问题发生风险高，加强青霉素V钾片质控非常必要[1]。青霉素V钾分散片含量测定方法较多，本次研究尝试对比紫外分光光度法改进为高效液相色谱法测定的效率，对比兩种检测方法价值。

1材料与方法

1.1  实验材料

采购5个厂家50个批次的青霉素V钾片，每个厂家10个批次。

1.2 仪器与试剂实验

仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪，UV2401PC型紫外分光光度计，MettleToledoMS205DU电子天平，立式透明冷藏箱、通风柜、各类型号点样管等。甲醇、三氯甲烷、环己烷、乙酸乙酯、纯水等标准品，由中国国家标准物质中心提供。对照品：中国药品生物制品检定院，苯氧乙酸对照片、苯氧甲基青霉噻唑酸A型与B型对照品、苯氧基氨酸脱羧青霉噻唑酸A型与B型对照品。

1.3  方法

1.3.1高效液相色谱法

（1）对照品溶液：精密称量青霉素V对品适量，置于10ml容量瓶中，加入水溶解，定量稀释制成0.2mg/ml溶液，4℃冰箱保存。避光保存。称取一定量标准物质储备液，用水0.1mg/ml、1μg/ml、10μg/ml工作液溶液，避光4℃保存。

（2）供试品溶液：取目标对照品，精密称定，置入锥形瓶，加入pH 6.5磷酸盐缓冲液（0.2mmol/L磷酸二氢钾溶液125ml加水250ml混匀，氢氧化钠调节pH至6.5，加水稀释到500ml），溶解制成3.6mg/ml供试品溶液。精密量取1ml，置入100ml量瓶中，采用pH6.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

（3）检测：①葡聚糖凝胶G-10为填充剂，玻璃柱内径1.0～1.4cm，柱长30～40cm。，量取0.1mg/ml蓝色葡萄胎2000溶液100～200μl，10μl，流速1.5mL·min-1，检测波长0～20 min为254nm。流动相A为pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液[（0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mmol/L磷酸二氢钠溶液（61：39）]，流动相B为水。分别以流动相A、B测定，记录色谱图。②线性关系考察，将对照品稀释至刻度，进样后，绘制色谱图以及峰面积，以溶液浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制不同对照品的回归方程。③进行可靠性、精密度、重复性、稳定性、回收率试验，计算相对保留时间等指标。

1.3.2 紫外分光光度法

取样品10品，研细，精密测量，置入100ml量瓶，加水摇匀溶解稀释至刻度，精密称量取连续滤液5ml，置入100ml量瓶，加水稀释到刻度，摇匀，取2ml每份。置入两只试管，一支加入甲咪唑-汞溶液10ml，混匀，密塞，60℃水浴加热25min，不断振量，冷却制得甲液。另一支加入水10ml，摇匀，制得乙液。取对照品125mg，精密称量，置入100ml量瓶，分别制得甲液、乙液。在325nm波长出测定吸光度，测甲液2ml水与10ml咪唑-汞混合液为空白，测乙液以水为空白，采用差值计算，即得到含量。绘制标准曲线，计算青霉素的含量。进行可靠性、精密度、重复性、稳定性、回收率试验，计算相对保留时间等指标。

2  结果

相较于由紫外分光光度，高效液相色谱法标准曲线相关系数r明显上升，同时最低检出限也显著下降，精密度试验、稳定性试验、重现性试验的相对保留时间与峰面积低于红外光谱。

3  讨论

从本次研究来看，相较于紫外分光光度计测量，高效液相色谱法的测定性能明显增强，主要体现在以下几个方面：①标准曲线相关系数r明显上升，提示检出的误差得到有效的控制，线性关系更理想，测定供试品的药品含量更符合真实情况;②最低检出限也显著下降，灵敏度上升，有助于检出血液中微小的含量留存;③检出的可靠性增强，研究中高效液相色谱法精密度试验、稳定性试验、重现性试验的相对保留时间与峰面积低于红外光谱，提示结果的稳定性更高，不容易受到干扰[2]。目前，对于药物的含量分析，普遍以高效液相色谱法作为最终的鉴定结果。高效液相色谱技术，可一次进行多种物质成分含量的检测，用于青霉素V钾分散片含量，能够分析不同物质的含量，并通过分析是否存在新的“峰”来看到是否存在杂质、杂质的含量，从而评价药品的质量。高效液相色谱法最低检出限度的下降，使其可用于血液等样本中的药物含量分析，用于药代动力学等药理学研究。

小结：高效液相色谱法对青霉素V钾分散片含量测定性能有一定程度的提高。

参考文献：

[1]国家药典委员会，中华人民共和国药典（二部），中国医药科技出版社，2015，1287-1288

[2]陈希，吴鑫，鄢雷娜，等.国产青霉素 V钾片质量评价[J].今日药学，2016，26（10）：707-709.