自制五行按摩油保湿抗衰效果的评价

上海中医药大学 上海 201203

五行学说作为中医理论体系中的一个组成部分[1]，是一种能够阐释人体的生理、病理及其与外在环境的相互联系，并指导临床诊断与治疗的独特理论。在中医美容实践中，五行归类、脏腑相关理论对美容辅助产品的研发和应用具有重要价值[2]。中医理论认为，“肝、心、脾、肺、肾”这五脏状态的微小变化，都能够直接影响人体皮肤状态[3]。笔者在中医五行理论指导下，选取对应人体五脏的五种中药材[4-5]，按照一定比例浸泡在植物油中制备成五行按摩油，通过中医推拿与经络按摩手法，试图探索自制五行按摩油在提高皮肤弹性及保湿等方面的功效，同时评价了自制五行按摩油的外用安全性，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 仪器 皮肤弹性测量仪Cutometer MPA580（配有Corneometer探头）、经皮水分散失度（transepidermal water loss,TEWL）测量仪TewameterTM300均购于德国Courage-Khazaka公司；AT210型电子天平购于瑞士梅特勒-托利多公司；TC-6K型电子天平购于美国双杰兄弟有限公司。

1.2 药品和试剂 藏红花、苏木、枸杞、蝉蜕、何首乌均购于上海康桥中药饮片有限公司（批号：141185-201469、141009-201463、141096-201416、141003-201452、141062-201485）；葡萄籽油购自上海浦恩生化科技有限公司（批号：20180109875）；乙醇（分析纯）购于沃凯公司（批号：201705674）；水为蒸馏水。

1.3 实验动物 普通级雌性新西兰大白兔4只，体质量2.0～2.5kg，饲养于上海中医药大学实验动物中心[实验动物使用许可证号：SYXK（沪）2014-0008]。

1.4 自制五行按摩油的制备 具体制备方法参考文献[6-7]，称取藏红花、苏木、枸杞、蝉蜕、何首乌各50g，置于锥形瓶中，加入1 000mL葡萄籽油，使其完全浸没饮片。将锥形瓶密封放置于阳光下，倒置容器7d，待浸提完成后，将饮片及油取出加热，待油温达50℃时停止加热，立即捞出药渣，待油冷却至室温后过滤，置于容器内密封备用。

1.5 对象 2017年5月至6月选择年龄30～56岁、皮肤代谢速率相对稳定的女性作为受试者，随机抽取16例女性，平均年龄（45.7±8.8）岁，按随机分配原则分为自制五行按摩油组和葡萄籽油对照组，每组8例。自制五行按摩油组受试者平均年龄（45.3±9.3）岁，葡萄籽油对照组平均年龄（46.1±8.8）岁，两组受试者年龄无统计学差异（P＞0.05）。所有受试者均自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：（1）妊娠期或哺乳期女性；（2）易过敏体质；（3）有心脑血管、肝、肾、造血系统性疾病和精神病史者；（4）短期内使用其他背部护肤品或按摩产品者；（5）非志愿参加者或不能按要求完成规定内容者。

1.6 测试方法 分别进行短期和长期功效测试[8]。同一受试者的测试由同一测试人员采用同一仪器完成。所有测试均在恒温恒湿（温度20～22℃，相对湿度40%～60%）的环境下进行。

1.6.1 短期功效测试 受试者充分暴露后背部皮肤，在测试人员的帮助下对其进行简单清洁，用四功能美容蒸汽机热喷5min，并用无屑纸巾擦干，测试人员在其背部用记号笔标记直径约为3cm的圆圈，用皮肤弹性测量仪Cutometer MPA580和TEWL测量仪分别测试标记部位皮肤角质层的水分含量[9]、TEWL和皮肤弹性值。随后由测试人员分别使用自制五行按摩油和葡萄籽油5mL按摩背部20min，2、4h后测试相应部位皮肤的水分含量和TEWL值。在进行皮肤水分含量测试时，每一皮肤区域重复测试5次，TEWL测试40s。皮肤弹性值测试采用恒定负压模式，共2个循环，每个循环6s，结果以R值表示。

1.6.2 长期功效测试 两组受试者每周分别使用自制五行按摩油、葡萄籽油2次，连续使用4周，分别测试使用前和使用2、4周后相应位置皮肤弹性值[10-11]。

1.7 动物皮肤刺激性实验 选择雌性新西兰大白兔4只，实验前背部两侧剃毛，两侧去毛面积各3cm×3cm左右，剃毛后恢复24h备用。给药前目视检查有无因剃毛而破损的皮肤，若有破损，则不宜进行实验。采用自身左右对照，左侧为葡萄籽油对照组，右侧为自制五行按摩油组。分别取0.5mL受试物涂布于两侧已剃毛的皮肤，立即用玻璃纸覆盖，再以3cm×3cm的两层纱布包裹，最后用绷带及胶带固定。

根据临床实际应用情况，每只动物每次给药4h，连续给药3d。给药前用温水清洗给药部位，于每次给药后1h、再次给药前及给药第3天去除药物后1、24、48和72h分别观察并记录两侧皮肤状况，包括有无红斑及水肿等，对其进行评分，观察期限内每天进行评价。

参照《化学品急性皮肤刺激性/腐蚀性试验方法》[12]中皮肤刺激反应评分标准对药物刺激性进行评价。见表1、2。

1.8 统计学分析 应用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析，计量资料以表示，两组受试者的皮肤水分含量、TEWL和皮肤弹性值组间比较采用独立样本t检验，同组治疗前后比较采用配对t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 皮肤刺激反应评分标准

表2 刺激强度评价标准

2 结果

2.1 两组受试者治疗前后皮肤水分含量比较 两组受试者治疗前皮肤水分含量无统计学差异（P＞0.05）。与治疗前比较，治疗后2h后两组受试者皮肤水分含量均增加（P＜0.05），自制五行按摩油组治疗后4h皮肤水分含量仍高于治疗前（P＜0.05）；而葡萄籽油对照组治疗后4h皮肤水分含量下降，与治疗前差异无统计学意义（P＞0.05）。自制五行按摩油组治疗2、4h后皮肤水分含量均高于同时点葡萄籽油对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。表明自制五行按摩油有更好的保湿效果，并可持久保湿4h以上。

2.2 两组受试者治疗前后TEWL比较 两组受试者治疗前及治疗后2、4h的TEWL差异无统计学意义（P＞0.05）。与治疗前比较，自制五行按摩油组治疗2、4h后水分流失差异无统计学意义（P＞0.05）。见表4。表明单次使用自制五行按摩油对皮肤TEWL的影响不大，效果与葡萄籽油相似。

表3 两组受试者治疗前后皮肤水分含量比较

2.3 两组受试者皮肤治疗前后弹性值比较 两组受试者治疗前皮肤弹性值差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后，自制五行按摩油组受试者皮肤弹性值呈现逐渐上升的趋势，治疗2、4周皮肤弹性值均高于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.01）；葡萄籽油对照组治疗4周后，皮肤弹性值与治疗前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。组间比较，治疗2、4周后自制五行按摩油组受试者皮肤弹性值高于同时点葡萄籽油对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表5。综上所述，自制五行按摩油提高皮肤弹性的功效优于葡萄籽油，预示其具有减缓衰老的作用[13]。

表5 两组受试者皮肤弹性值比较

2.4 皮肤刺激性实验结果 自制五行按摩油多次给药，对家兔完整皮肤均无刺激性，无明显红斑和水肿发生；葡萄籽油多次给药，对家兔完整皮肤也无刺激性，也未见明显红斑和水肿。见表6、图1。

3 讨论

皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象，从老化机制上可以分为自然老化与光老化，主要体现在皮肤干燥、弹性减低、皱纹增加、雀斑产生等方面[14-15]。本研究表明，自制五行按摩油具有较好的保湿作用并能保持皮肤的弹性，皮肤刺激性实验显示该油对皮肤无刺激性，为该产品的后期开发提供了实验数据。

表6 动物皮肤刺激反应评分（分）

自制五行按摩油由5种中草药制成，何首乌味苦、涩、甘，性温，入肾经，能养血润燥、祛风止痒，可治血虚生风之皮肤瘙痒；苏木味咸、甘、微辛，性平，入脾经，可有助于改善皮损或皮肤局部炎症[16]；蝉蜕味甘，微苦，入肺肝经，可补充角质层的脂质成分，并能够修复损伤的皮脂膜，有助于恢复皮肤的屏障功能[17]，三者相互配合，皮损问题可以有效得到控制和缓解。藏红花味甘、性平，入心经，其提取物被证明具有促进血液循环、改善面部肤色及增强免疫功能等作用[18]；枸杞味甘，入肝经，其提取物有抗氧化活性[19]，两者相结合，能够提高机体免疫选择力，增强皮肤光泽度。方中五味中药对应归经为五脏，合用能够全面调理和保养皮肤，对于增强皮肤弹性有较好功效。

中药材以基底油浸泡后，药材中的脂溶性成分与油充分融合，具有良好的成型性、黏附性，同时具有载药量大，释药性好和无毒无刺激性等优点，皮温下即可充分吸收，药物有效成分在皮肤滞留时间长，而且其pH在5～7，无刺激性，使用安全可靠，在美容护肤方面应用广泛。本研究发现，自制五行按摩油能够增加皮肤水分含量、减缓经表皮失水，并提高皮肤弹性值，效果优于葡萄籽油，说明自制五行按摩油具有一定的抗衰老作用。进一步研究将扩大样本量，深入研究其作用机制，为自制五行按摩油用于辅助美容治疗提供更充分的参考依据。

图1 动物皮肤刺激性实验