注射用头孢替坦二钠的安全性再评价

黄贵莲　黄滔　曾华哲　金鑫

[摘要]目的评价注射用头孢替坦二钠的安全性。方法对注射用头孢替坦二进行了过敏性、刺激性及溶血性试验。结果豚鼠全身主动过敏性试验及大鼠被动皮肤过敏性试验未见明显过敏反应，兔耳缘静脉及周围组织均未见明显刺激性反应，未引起新西兰兔股四头肌刺激性病理变化，体外溶血试验无溶血和凝集现象。结论该药相关安全性检测结果符合新药申报要求，可供静脉或肌肉注射给药。

[关键词]注射用头孢替坦二钠；安全性评价；过敏性；刺激性；溶血性

[中图分类号]R96

[文献标识码]B

[文章编号]2095-0616（2016）23-52-05

头孢替坦二钠对革兰阴性菌活性较强，临床上多用于易感菌所致腹内、皮肤软组织感染和尿路、下呼吸道及妇产科等感染。本品最早由日本山之内制药株式会社研制，于80年代末首先在日本上市，后授权瑞典阿斯利康在日本以外的国家上市，商品名有Cefotan和Apatef等。目前本品还未进入国内。本文按照药品注册申报要求，依照化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则要求，对我司研制的注射用头孢替坦钠（cefotetansodium for injection）进行了安全性研究，考察本品是否符合静脉射药物的安全性标准，为进一步申报新药提供研究数据。

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1药品与试剂注射用头孢替坦二钠（受试物），1g，瓶，批号S131001，由丽珠集团丽珠医药研究所生产；同类上市对照品，2g，瓶，批号SPl254，生产厂家为APP Phramaceuticals，LLC；白蛋白，1g/瓶，批号120423，由上海伯奥生物科技有限公司生产。

1.1.2动物Hartley豚鼠，雌雄兼用，体重300～350g，来源于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK（京）2012-0001；SD大鼠，雌雄兼用，体重200～250g，来源于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号SCXK（湘）2011-0003；新西兰兔，雌雄兼用，体重2.0～2.5kg，来源于广州市花都区花东信华实验动物养殖场，合格证号SCXK（粤）2009-0023。

1.2研究方法

1.2.1豚鼠全身主动过敏试验试验用Hartley豚鼠36只，按性别和体重随机分为6组，每组6只动物，雌雄兼用。设阴性对照组（0.9%氯化钠注射液）、阳性对照组（1%白蛋白溶液）、受试物高、低剂量组和同类上市对照品高、低剂量组。致敏期受试物高、低剂量分别为4.65、2.235mg/只（采用等效剂量折算，约相当于临床静脉注射日剂量6000mg的1/40和1/80倍），腹腔注射给药，给药体积为0.5mL/只，隔日1次，共3次。各组动物分别于末次腹腔给药后第10天进行静脉快速激发，给药体积1.5 mL/只，各组动物激发期剂量为致敏剂量的3倍，根据过敏反应发生率和发生程度判断其全身主动过敏性。

1.2.2大鼠被动皮肤过敏试验致敏期选取SD大鼠24只，按体重和性别随机分为6组，每组4只，雌雄各半，即阴性对照组（0.9%氯化钠注射液）、阳性对照组（1%白蛋白溶液）、受试物高、低剂量组和同类上市对照品高、低剂量组。受试物组致敏及激发剂量相同，高、低剂量分别为216、108mg/只（采用等效剂量折算，约相当于临床静脉注射日剂量6000mg的2和1倍）。各组腹腔注射佐剂及相应药物，给药体积为0.5mL/只，隔日1次，共3次。于末次腹腔给药后10d腹主动脉采血，制备抗体血清。试验激发期，另取SD大鼠48只，按体重和性别随机分为6组，每组8只，雌雄各半，并將各受试物抗体血清以1：2、1：4、1：8的稀释度稀释，依次在动物背部皮内注射各对应组的抗体血清0.1mL。被动致敏48h后进行单次静脉给药激发，30rain后处死动物，剪取背部皮肤，铺平后测量皮肤内层斑点直径的大小，直径在5mm以上者判定为阳性。

1.2.3家兔血管刺激性试验取12只健康新西兰兔，设2组，分别为受试物组和同类上市对照品组，每组6只，雌雄各半。采用同体左右侧耳自身对比法，其中动物左侧耳缘静脉给予受试物或同类上市对照品，给药浓度为95mg/mL（相当于临床静脉给药浓度），给药体积为3mL/kg，给药速度约3mL/min，右侧给予等体积的0.9%氯化钠注射液作对照。每天给药1次，共7d。末次给药后48h每组剖检3例动物。余下动物于末次给药后14d进行剖检。最终根据肉眼观察和病理检查的结果进行综合判断。

1.2.4家兔肌肉刺激性试验取12只健康新西兰兔，设2组，分别为受试物组和同类上市对照品组，每组6只，雌雄各半。各组动物左侧股四头肌分别给予受试物或同类上市对照品，给药浓度均为400mg/mL（相当于临床肌肉注射给药浓度），给药体积均为1.0mL/侧，右侧给予等体积的0.9%氯化钠注射液作对照，每天给药1次，共7d。末次给药后48h每组剖检3例动物，余下动物于末次给药后14d进行剖检。最终根据肉眼观察和病理检查的结果进行综合判断。

1.2.5溶血性试验

向盛有2%红血球混悬液的各支药液管中分别加入不等量的受试物，给药浓度为95mg/mL，混匀后置于恒温箱中温育，开始每隔15min观察一次，1h后，每隔1h观察一次，持续观察3h。结果判定：当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在3h内不产生溶血和凝聚，则受试物可以注射使用；若受试物管中的溶液在3h内产生溶血和（或）凝聚，则受试物不宜注射使用。

2.结果

2.1豚鼠全身主动过敏试验

试验期间，阴性对照组、阳性对照组、受试物高、低剂量组和同类上市对照品高、低剂量组的各例动物外观特征、行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常。

激发反应情况：阴性对照组，2/6例豚鼠出现排尿现象，余下4/6例未出现明显反应。阳性对照组，6/6例豚鼠出现竖毛、呼吸急促、排尿、排粪、呼吸困难、紫癜、步态不稳、喘息、痉挛和潮式呼吸等不同程度的反应症状，最后全部动物均死亡。受试物高剂量组，2/6例豚鼠出现排尿或排粪，2/6例豚鼠出现排尿和排粪现象，余下2/6例未出现明显反应。受试物低剂量组，2/6例豚鼠出现排尿、排粪现象，2/6例豚鼠排粪，余下2/6例未见明显异常。同类上市对照品高剂量组，2/6例豚鼠出现排尿、排粪，1/6例豚鼠排粪，余下3/6例未见明显异常。同类上市对照品低剂量组，2/6例豚鼠出现排尿、排粪，1/6例豚鼠排尿，余下3/6例未见明显异常。

单次静脉快速给药情况：激发时，受试物高、低剂量组和同类上市对照品高、低剂量组均选取2例未致敏豚鼠进行单次静脉快速给药。受试物高剂量组，1/2例豚鼠未见明显异常，1/2例豚鼠排尿。受试物低剂量组，1/2例豚鼠未见明显异常，1/2例豚鼠出现排尿、排粪。同类上市对照品高剂量组，1/2例豚鼠排尿，1/2例豚鼠未见明显异常。同类上市对照品低剂量组，1/2例豚鼠排粪，1/2例豚鼠未见明显异常。

2.2大鼠被动皮肤过敏试验

第一批动物，从致敏第4天起，肉眼可见各组动物均出现腹部胀大的现象，但各组动物的行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常；各组动物腹主动脉采血时可见腹部积液，肝、胃、脾、肾及肠有不同程度的相互粘连。第二批动物，各组动物的外观特征、行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常。详细试验结果如表1所示。

2.3家兔血管刺激性试验

试验期间各组每例动物外观特征、行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常。末次给药后14d，两组各例动物左右侧进针和给药部位血管轮廓较清晰，兔耳厚薄均匀，均未见明显改变。剖检的两组各例动物左右侧兔耳各段皮肤、附件和软骨结构完好，未见引起各组兔耳静脉血管及周围组织刺激性病理改变。

2.4家兔肌肉刺激性试验

试验期间各组每例动物外观特征、行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常。给药前、末次给药后24h、48h和14d分别对各例动物左右侧给药部位进行肉眼观察，均未见明显异常。

2.4.1第一批剖检动物（末次给药后48h）受试物组：3/3例动物（动物编号F1、F2、F3）左侧（给药侧）注射部位深层肌肉均出现一块暗红色斑块且质硬，其中F1还伴有乳黄色斑块，此异常现象的范围约为4.0era×1.5cm×0.8cm至6.0cm×1.7cm×1.0cm，肌肉刺激性分级均为3分；上述3/3例动物右侧（阴性对照侧）注射部位肌肉均未见明显异常变化，肌肉刺激性分级均为0分。镜检观察3/3例动物（动物编号F1、F2、F5）左侧异常部位肌肉，均出现局部肌组织损伤，肌纤维变细小，断裂不连续，排列疏松，间隙明显增宽，间质水肿伴大量炎细胞浸润，间质内亦可见红细胞，其中1例动物（F5）局部间质内可见嗜碱性颗粒物；上述3例动物右侧股四头肌注射部位未见异常变化。

同类上市对照品组：3/3例动物（动物编号G1、G2、G3）左侧（给药侧）注射部位深层肌肉均出现一块暗红色斑块且质硬，其中G1还伴有乳黄色斑块，此异常现象的范围约为3.0era×2.0era×].00re至5.0cm×1.5cm×0.9cm，肌肉刺激性分级均为3分；上述3/3例动物右侧（阴性对照侧）注射部位肌肉均未见明显异常变化，肌肉刺激性分级均为O分。镜检观察3/3例动物（动物编号G1、G2、G5）左侧异常部位肌肉，均出现局部肌组织损伤，肌纤维变细小，断裂不连续，排列疏松，肌纤维间隙明显增宽，间质水肿伴大量炎细胞浸润，间质内亦可见红细胞，其中2例动物（G1、G2）局部间质内可见红细胞及嗜碱性颗粒物；上述3例动物右侧股四头肌注射部位未见异常变化。

2.4.2第二批剖检动物（末次给药后14d）受试物组：3/3例动物（动物编号F3、F4、F6）左侧（给药侧）注射部位深层肌肉均出现一块乳黄色斑块，此异常现象的范围约为2.3cm×1.0cm×0.5cm至4.5cm×0.8cm×0.4cm，肌肉刺激性分级均为3分；上述3/3例动物右侧（阴性对照侧）注射部位肌肉均未见明显异常变化，肌肉刺激性分级均为0分。镜检观察3/3例动物（动物编号F3、F4、F6）左侧异常部位肌肉，均出现局部肌组织损伤，肌纤维变细小，断裂不连续，排列疏松，间隙明显增宽，间质内纤维组织增生伴大量炎细胞浸润，其中1例动物（F6）局部间质内可见嗜碱性颗粒物；上述3例动物右侧股四头肌注射部位未见异常变化。

同类上市对照品组：3/3例动物（动物编号G3、G4、G6）左侧（给药侧）注射部位深层肌肉均出现一块乳黄色斑块，此异常现象的范围约为1.8cm×0.6cm×0.4cm至2.3cm×0.9cm×0.4cm，肌肉刺激性分级均为3分；上述3/3例动物右侧（阴性对照侧）注射部位肌肉均未见明显异常变化，肌肉刺激性分级均为0分。镜检观察3/3例动物（动物编号G3、G4、G6）左侧异常部位肌肉，均出现局部肌组织损伤，肌纤维变细小，断裂不连续，排列疏松，间隙明显增宽，间质内纤维组织增生伴大量炎细胞浸润，间质内亦可见红细胞，其中2例动物（G1、G2）局部间质内可见红细胞及嗜碱性颗粒物；上述3例动物右侧股四头肌注射部位未见异常变化。

2.5溶血性试验

阴性对照管各支药液管在3h内均未见溶血或红细胞凝集现象。阳性对照管在15min内即出现溶血现象。受试物的各支药液管在3h内均未见溶血或红细胞凝集现象。同类上市对照品的各支药液管在3h内均未见溶血或红细胞凝集现象。详细试验结果如表2所示。

3.讨论

注射药物的安全性评价是药物临床试验的重要研究内容，本文对受试药物注射用头孢替坦二钠的溶血性、血管刺激性及過敏性进行了系统研究。并且，在文献报道的基础上，还增加了对家兔肌肉刺激性试验研究。研究结果表明：注射用头孢替坦二钠不会引起豚鼠全身主动过敏和SD大鼠被动皮肤过敏，也未见溶血或红细胞凝集现象，不会引起血管变形等刺激反应；虽然本品对家兔股四头肌产生一定的肌肉刺激反应，但与同类上市对照品的肌肉刺激性程度相当，并且在停药后会逐渐恢复。综上所述，注射用头孢替坦二钠在临床上可以静脉或肌肉给药的途径给患者用药。