富血小板纤维蛋白(PRF)对即刻负重种植体周围骨缺损的影响

余海云，张国荣，郭 静

(1.信阳市第一人民医院，河南 信阳464000；2.山西省中西医结合医院， 山西 太原030013)

随着口腔种植技术的发展与完善，为满足不同患者的需求，常将拔牙与种植同时进行，该技术又称即刻种植技术，只需一次切口即可替换牙齿[1]。富血小板纤维蛋白(PRF)是继富血小板血浆后第二代血小板浓缩制品，被定义为一个自体的白细胞和富血小板纤维生物材料，目前已广泛应用于口腔科、颌面外科、骨科、整形外科等用于创面的修复[2,3]。为探讨PRF对即刻负重种植体周围骨缺损的影响，本研究选取比格犬5只，将每只犬左右两侧下颌第四前磨牙牙位随机分为观察组和对照组，拔除后立即植入柱状螺纹纯钛种植体并即刻负重，探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对即刻负重种植体周围骨缺损的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

选取比格犬5只，约24月龄，体重12 kg-16 kg，所有动物咬合关系正常，牙体和牙列完整，拔除双侧下颌第四前磨牙，将每只犬左右两侧下颌第四前磨牙牙位随机分为观察组和对照组。观察组种植体周围骨缺损区采用PRF填充，对照组种植体周围骨缺损区不填任何填充物。

1.2 材料和设备

种植体、基台、Bio-oss骨粉、离心管、戊巴比妥钠粉剂、戊二酸溶液、锇酸、甲酸。

1.3 实验方法

1.3.1RPF制备 随机选取一只比格犬，将其固定在麻醉架上，将右下肢消毒后抽取静脉血，立即放入无菌离心管内，离心10 min后，除去上层液体和下层胶冻状物，留中间层物质，即为凝胶。将所得凝胶置于无菌纱布上，剪取中间(3×3)mm大小的组织放入福尔马林中，记为a标本，再剪(1×1)mm大小的组织浸入戊二酸中，记为b标本，存在冰箱12 h以上。

1.3.2拔牙方法 所有比格犬术前禁食12 h，禁水4 h，称重计算麻醉剂量，静脉推注麻醉药进行全身麻醉，推注速度不宜过快，要时刻注意比格犬状态，防止因麻醉过度导致死亡。检查比格犬口腔内状况，术前先用复方氯己定含漱液冲洗口腔，再用型安尔碘和酒精消毒，分离牙龈，参照术前X线根尖片，用润轮机裂钻将牙冠颊舌向完全剖开，成为两个独立的单根牙，拔除近、远中牙根。

1.3.3即刻种植方法 按照比格犬测量数据选择合适的种植体，沿牙槽峭顶行梯形切口，骨膜剥离器从沿梯形切口剥离牙龈，充分暴露牙槽嵴顶及颊侧骨面，根据种植体方向和深度后确定扩孔钻直径，采用机用携带体将种植体从种植体瓶中取出，安放于种植窝处,顺时针旋入种植体，其中观察组采用PRF填充，对照组不填任何填充物。

1.3.4骨量测量和标本种植切片制备 即刻种植3个月后，采取与拔牙相同的切口和翻瓣方式，以种植体颈缘中间最上方为标记处，用带刻度的牙周探测针测量两侧种植体颊侧缺损高度，同时记录数值。用超声骨刀切取左侧下颌部分组织后立即放入福尔马林溶液中进行固定，固定后,用脱钙液脱钙12 h，梯度乙醇脱水，石蜡浸透包埋使组织块变硬，将组织切片常规染色，在光学显微镜下观察。

骨性结合率=骨与种植体接触长度/种植体的总长度×100%，新骨生成率=缺损区新骨面积/缺损区原总面积×100%。

1.3.5能谱分析 所得切片标本采用能谱仪进行成分元素种类与含量分析，同时配合扫描电子显微镜与透射电子显微镜使用。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组种植体部位骨表表面Ca2+含量比较

观察组种植术后3个月种植体部位骨表面Ca2+含量明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组种植术后3个月种植体部位骨表面Ca2+含量

2.2 两组术后3个月种植体颊侧骨量增加高度、缺损面积等比较

观察组术后3个月颊侧骨量增加高度、骨性结合率和新骨生成率明显高于对照组(P<0.05)，而缺损面积明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组术后3个月种植体颊侧骨量增加高度、缺损面积等比较

2.3 两组光镜下骨组织形态

术后3个月，观察组种植体颊侧骨组织切片可见大量新生骨组织，骨小梁致密粗大，对照组新生骨质及成骨细胞数少于观察组，见图1。

HE染色×100，A：观察组；B：对照组

3 讨论

口腔种植体又称为牙种植体，还称为人工牙根，是通过外科手术的方式将其植入人体缺牙部位的上下颌骨内，待其手术伤口愈合后，在其上部安装修复假牙的装置[4]。口腔种植体按种植方式和植入部位分为骨内种植体、骨膜下种植体、根管内种植体和穿骨种植四类[5]。种植体的即刻负重是指在种植体植人后同期安装临时义齿，种植体即刻负重获得成功最重要的条件是种植体在承受负荷时保持稳定，过度的运动会造成纤维性愈合而导致种植失败[6]。种植修复义齿已成为一种较为成熟的口腔修复治疗手段，但具有骨量不足的缺点，而血液制品的基本成份是血小板，经过适当的处理可以浓缩成与成骨相关的纤维蛋白和多种细胞因子，有利于成骨[7]。

PRF为第二代血小板凝集物，它是一种具有粘性的富含各种生长因子和高浓度纤维蛋白原的血小板凝胶，富含血小板，这些血小板被激活后会产生多种生长因子，其中包括血小板衍生生长因子、转化性生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子和血管内皮生长因子等，这些生长因子可以通过不同方式来调控成纤维细胞、成骨细胞等成骨相关细胞的增殖、分化和凋亡，以促进组织的再生与修复[8-10]。而即刻种植中使用的Bio-oss骨粉作为一类具有多孔结构的可降解材料，不仅可以给细胞附着提供支持效果，还可增加膜的空间维持能力，而且这种复合材料具有良好的骨传导和骨诱能力，可以很好地促进骨组织的再生[11]。

人体中Ca2+含量低，会影响骨组织钙化，不利于骨组织再生，降低种植体部位骨量[12]。观察组种植术后3个月种植体部位骨表面Ca2+含量明显高于对照组，说明PRF通过激活多种生长因子促进骨表面钙化，有助于种植体周围骨再生。观察组术后3个月颊侧骨量增加高度、骨性结合率和新骨生成率明显高于对照组，而缺损面积明显低于对照组，说明PRF具有促进骨组织修复的效果，也证明了其良好的成骨能力，对口腔种植术后软组织的愈合和促进新骨形成有一定的作用。

成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化，人体骨组织不断地进行着重建，该过程中成骨细胞移动到被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨[13]。术后3个月，观察组种植体颊侧骨组织切片可见大量新生骨组织，骨小梁致密粗大，对照组新生骨质及成骨细胞数少于观察组。考虑可能与PRF填充有关，PRF的主要结构特点是由纤维蛋白构成的疏松的立体网状结构，其纤维蛋白网状结构是通过缓慢聚集作用产生的，与天然组织结构十分相似，所以，它具有诱导成骨细胞增殖、迁移及促进组织愈合的效果，增加新生骨质的形成[14]。

综上所述，即刻负重种植体周围骨缺损应用PRF可以有效促进种植体周围骨缺损的修复，值得在临床上推广使用。