经阴道彩超联合血清miRNA系列检测对宫颈癌的诊断价值ROC曲线分析

匡 涌,王 燕,贾严珍

(青岛市立医院西院区,山东 青岛266002)

宫颈癌(CC)是妇科临床上一种常见的恶性肿瘤，严重的危害着女性的健康与生命安全，我的发病率目前呈现出逐渐上升趋势[1,2]。CC的尽早诊断是治疗与取得理想预后的关键基础。人类乳头瘤病毒(HPV)检测为CC的主要筛查方式，但其诊断效果欠佳[3]。病理学检验为本病诊断的金标准，但其属于有创性检查，无法作为早期筛查方式应用于临床[4]。在目前的无创检查手段中，经阴道彩色多普勒超声(TVCDS)能够详细观察肿块的位置、形态、大小等相关信息，并可观察血流状态，但其诊断受到人为主观因素等的影响，而致其准确率有待进一步提高。血清指标检测为诸多恶性肿瘤诊断的常用参考指标，但不同的恶性肿瘤血清标志物亦不尽相同，而患者间血清肿瘤标志物表达水平亦具有一定差异性。miRNA为存在于真核生物中一组具有调控功能的内源性非编码RNA。有研究认为，miRNA系列中的18a、92a在CC等诸多种恶性肿瘤患者的血清中可见高表达[5,6]。鉴于血清miRNA系列检测对于恶性肿瘤的诊断具有较高的灵敏度，而TVCDS的特异性尚良好，我们将两者联合应用于CC的临床诊断中，以期寻找到更为理想的无创检查手段，提升CC早期筛查的检出率。为研究TVCDS联合血清miRNA对CC的诊断价值，本院特开展本次回顾性研究，现将详细情况作详尽阐述。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取本院2017年1月-2018年1月间收治的98例宫颈癌患者作为CC组，选取同期本院收治的98例宫颈良性病变患者作为良性组。纳入标准：①在本院接受治疗且经病理学化验确诊的CC患者；②术前在本院均接受了TVCDS及血清miRNA-18a、miRNA-92a检查的患者；③本院相关资料完整的患者。排除标准：①合并其他恶性肿瘤的患者；②心脑血管事件急性期、创伤或重大手术后恢复期患者；③合并严重感染性疾病的患者；④妊娠期患者；⑤病理特征不明确、本院相关资料不完整的患者。

1.2 研究方法

1.2.1资料统计 收集全部患者的一般资料包括：年龄、体重指数(BMI)、吸烟史、酗酒史、绝经状态、高危型人类乳头瘤病毒(HR-HPV)感染史、其他性传播疾病史。吸烟史指有每日吸烟1支及以上，连续或累计6个月及以上。酗酒史指每日150 g及以上，连续或累计6年及以上。

1.2.2TVCDS检查 排空膀胱，患者取截石位，使用彩色多普勒超声诊断仪检查，使用经阴道腔内探头，频率设置为5-9 MHz，涂抹耦合剂后套2层隔离套，轻缓插入阴道，逐渐推进至阴道穹窿、宫颈部；行纵向、横向、斜向全方位扫查。仔细观察宫颈内、外口情况，宫颈整齐程度、宫颈管回声，详细观察宫体、宫旁组织与卵巢情况。随后以彩色多普勒血流显像(CDFI)观察宫颈血流的分布情况，测量缩峰值速度(PSV)、舒张末期最低速度和血流阻力指数(TMDV)，按：(PSV- TMDV)/PSV公式计算血流阻力指数(RI)；均测量3个稳定周期取均值。

1.2.3miRNA检测 采集患者空腹外周静脉血样5 ml，使用离心机于4℃下按3 000 r/min速度离心10 min，离心半径为10 cm，静置后再次按12 000 r/min速度离心15 min，取得血清，于-80℃下储存。取100-200 μl 血清，使用德国 QIAGEN公司出品的miRNeasy Mini Kit试剂盒提取RNA；RNA反转录使用美国 Gene Copoeia 公司生产的All-in-One miRNA q RT-PCR Detection Kit试剂盒，按q PCR 法测定血清中miRNA-18a、miRNA-92a水平，内参对照为U6。

1.2.4数据分析方法 对比两组患者一般资料、相关病史、TVCDS参数PSV、RI与血清miRNA-18a、miRNA-92a检测结果的差异性，以ROC曲线参数：曲线下面积(AUC)评估TVCDS参数、血清miRNA系列及二者联合对于宫颈癌的诊断价值，并计算其最佳诊断值。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 一般资料

CC组患者HR-HPV感染率高于良性组，差异有统计学意义(P<0.05)；两组患者年龄、BMI、吸烟史、酗酒史与其他性传播疾病史差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组一般资料对比

2.2 TVCDS参数

CC组患者PSV高于良性组，RI低于良性组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组患者TVCDS参数对比

2.3 血清miRNA系列表达

CC组miRNA-18a、miRNA-92a均高于良性组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 两组患者血清miRNA系列表达对比值)

2.4 ROC曲线分析

四项参数联合诊断宫颈癌具有最高诊断价值(AUC=0.981)，其与TVCDS参数RI、血清miRNA-18a及对宫颈癌均具有较高诊断价值(AUC>0.9，P<0.05)，TVCDS参数PSV、血清miRNA-92a对宫颈癌具有中等诊断价值(AUC>0.7，P<0.05)；TVCDS参数PSV诊断宫颈癌的最佳诊断值为7.455cm/s、此时敏感度为80.612%、特异度为81.633%，TVCDS参数RI诊断宫颈癌的最佳诊断值为0.605、此时敏感度为82.653%、特异度为90.898%；血清miRNA-18a诊断宫颈癌的最佳诊断值为2.040、此时敏感度为89.796%、特异度为92.857%，血清miRNA-92a诊断宫颈癌的最佳诊断值为2.040、此时敏感度为60.204%、特异度为90.816%，上述四项指标联合诊断宫颈癌的敏感度为97.959%，特异度为80.427%,见表4。

表4 各项参数诊断宫颈癌ROC曲线统计值明细

图1 各项参数及联合诊断ROC曲线

3 讨论

我国CC的发病率与病死率均位居女性恶性肿瘤的第二位，成为严重威胁女性健康与生命安全的生殖系统恶性病变[7-9]。CC早期多无显著、典型表现，其早期症状表现不典型，部分患者检出时病情已进展至中晚期，而失去最佳治疗时机。因此，寻找理想的无创筛查手段是CC临床诊断、治疗的重要基础。TVCDS属于医学影像学无创检查手段，能够对宫颈、管腔内血流、血管等情况进行详细观察，并可通过后处理软件减少人为主观因素的干扰，提高其诊断客观[10-12]。TVCDS具有操作便捷、无需充盈膀胱、重复性好等优势，适用于CC的临床筛查、诊断及疗效评估等诸多领域[13]。miRNA系列中miRNA-18a通过下调靶基因中表达，发挥促进肿瘤细胞生长的作用。miRNA-92a则具有促进肿瘤血管异常增殖的作用。miRNA系列在人体外周血液中的表达较稳定，有望成为肿瘤血清学的新型标志物。有诸多研究表明，其与诸多恶性肿瘤、疾病的形成、演进及不良预后具有相关性[14,15]。

本次研究结果表明，CC组患者中HR-HPV感染率高于良性组，这与既往临床认知一致，也是目前HR-HPV作为CC临床筛查手段的理论基础。两组患者其他一般资料无统计学差异，但这一结论有待于进一步大数据验证。

本次研究显示，CC的瘤体内部可见高速低阻血流状态，且血管丰富、走向复杂纷乱，彩色血流可见“火球”形、网状等表现。而良性组患者宫颈内部仅见极少或未见血流信号。虽然TVCDS能够获取肿瘤内部的典型血流信号表现，但仍需经验丰富的专科医师进行评估，从一定程度上限制了其临床应用。采用血流动力学数据进行判断则可有效提高检查的客观性。本次研究结果表明，CC组患者PSV高于良性组，而血流RI则低于良性组；CC组患者血清miRNA-18a、miRNA-92a表达均高于良性组；这种明确的差异性为PSV、RI与血清miRNA检测成为宫颈癌诊断数据参考提供了理论支持。这一结论与李旭霞等研究结论相符[16]。经ROC曲线分析TVCDS参数RI、血清miRNA-18a及对宫颈癌均具有较高诊断价值，TVCDS参数PSV、血清miRNA-92a对宫颈癌具有中等诊断价值，四项参数联合诊断具有最高的诊断价值；提示，四项参数联合应用时优势互补，可有效诊断的准确性、敏感度与特异度。TVCDS参数PSV诊断宫颈癌的最佳诊断值为7.455 cm/s、RI诊断宫颈癌的最佳诊断值为0.605，血清miRNA-18a与miRNA-92a诊断宫颈癌的最佳诊断值均为2.040；提示，患者TVCDS参数PSV高于7.455 cm/s、RI低于0.605，且血清miRNA-18a与miRNA-92a均高于2.040时，可作出宫颈癌诊断，如患者有HR-HPV感染史则可进一步提高宫颈癌的可能性，应尽快通过针吸活检等病理学化验明确诊断，尽早给予治疗。

综上所述，经阴道彩超联合血清miRNA检测对于宫颈癌诊断具有较高诊断价值，且具有无创、操作便捷、重复性好等优势，更加适用于宫颈癌的临床筛查、疗效评估及临床疗效等领域。