血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17的表达情况及与胃癌患者疾病特征的关系

杨光华，高冬冬

驻马店市中心医院肿瘤内科，河南驻马店463000

胃癌是全球第4大最常见的恶性肿瘤，病死率居全球第7位[1-2]。早期根治性手术治疗可延长胃癌患者总生存期，临床疗效较好。血清肿瘤标志物可为早期诊断胃癌提供参考，提高早期胃癌的临床疗效[3]。Dickkopf相关蛋白1（Dickkopf-related protein 1，DKK1）是WNT信号通路的重要调控因子，可增加胃癌上皮细胞DNA的突变风险，抑制肿瘤细胞分化，促进肿瘤细胞在胃组织中浸润[3]；糖类抗原 72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA72-4）是肿瘤细胞持续性扩增过程中释放的糖蛋白，可影响肿瘤细胞的自我扩增能力，并对其扩增速度进行评估[4]；促胃液素-17（gastrin-17，GAS-17）是胃底部腺体细胞分泌的胃肠道激素，胃黏膜上皮细胞异常病变和腺体细胞功能异常可以明显促进GAS-17的释放[5]。本研究旨在探讨血清DKK1、CA72-4和GAS-17水平及与胃癌患者基线特征的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年1月至2018年1月驻马店市中心医院收治的90例胃癌患者和90例胃溃疡患者。纳入标准：①年龄19～75岁；②胃癌的诊断符合中华医学会制定的胃癌诊断标准[6]；③均经胃镜活检确诊为胃癌或胃溃疡。排除标准：①转移性胃癌；②合并急性胃穿孔、大出血；③合并全身感染性疾病、风湿性疾病和结缔组织疾病；④精神及认知功能障碍；⑤既往接受过放化疗和免疫治疗。将90例胃癌患者作为胃癌组，90例胃溃疡患者作为溃疡组。胃癌组中男52例，女38例；年龄38～75岁，平均年龄为（56.8±12.8）岁；TNM分期：I期23例，Ⅱ期35例，Ⅲ期28例，Ⅳ期4例；分化程度：高分化22例，中分化47例，低分化21例；有淋巴结转移37例，无淋巴结转移53例。溃疡组中男47例，女43例；年龄35～75岁，平均年龄为（54.2±14.0）岁。同期选取同期90例健康体检者作为对照组，其中男44例，女46例；年龄33～75岁，平均年龄为（55.8±12.4）岁。3组受试者性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，所有受试者均对本研究均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

采集3组受试者静脉血3 ml，采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELI-SA）法检测血清学指标，包括DKK1、CA72-4和GAS-17水平。采用十字交叉法检测抗原浓度，采用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）进行稀释，加入至96孔的酶标板中，置于4℃冰箱过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，轻轻叩击酶标板甩干。每孔中加入5%的脱脂牛奶200 μl，置于4℃冰箱过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min。加入一抗（羊抗人DKK1、CA72-4和GAS-17抗体）5 ml，4℃放置过夜，PBS冲洗3次，每次5 min，加入二抗，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，每孔中加入100 μl的底物，显色后用酶标仪检测450 nm处的光密度（optical density，OD）值。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0软件对所有数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用t检验；计数资料以例数表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比较

3组受试者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。胃癌组患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均高于溃疡组患者和对照组受试者，且溃疡组患者血清CA72-4、GAS-17水平均高于对照组受试者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 3组受试者血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比较（± s）

表1 3组受试者血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比较（± s）

注：a与溃疡组比较，P＜0.05；b与对照组比较，P＜0.05

组别对照组（n=90）溃疡组（n=90）胃癌组（n=90）F值P值DKK1（ng/ml）3.36±0.75 3.59±0.77 6.52±1.80a b 190.666 0.000 CA72-4（U/ml）3.20±1.85 10.33±6.95b 37.83±17.94a b 241.681 0.000 GAS-17（pg/ml）13.20±3.11 16.48±2.79b 19.83±3.20a b 107.134 0.000

2.2 不同基线特征胃癌患者血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平的比较

TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者的血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均明显低于TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者，差异均有统计学意义（t=15.309、4.902、10.439，P＜0.01）。分化程度为中高分化胃癌患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均明显低于分化程度为低分化的患者，差异均有统计学意义（t=19.354、7.607、15.143，P＜0.01）。无淋巴结转移胃癌患者血清DKK1、CA72-4水平均明显低于有淋巴结转移的患者，差异均有统计学意义（t=8.602、2.860，P＜0.01）；但有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌患者血清GAS-17水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表2 不同基线特征胃癌患者的血清DKK 1、CA72- 4、GAS-17水平（ n=90）

3 讨论

幽门螺杆菌感染可引起胃黏膜上皮细胞病变，增加胃癌的发生风险，特别是合并慢性萎缩性胃炎或胃肠道上皮化生的患者[6-7]。早期诊断在胃癌的治疗中具有重要作用[8-9]。寻找有价值的血清学肿瘤标志物，对探讨胃癌的发病机制和胃癌的早期诊断有重要作用。

DKK1可激活WNT下游信号通路，上调基质金属蛋白酶的表达，降低肿瘤细胞间的黏附程度，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。研究显示，DKK1可通过提高肿瘤细胞的转录活性，提高肿瘤细胞纺锤体的复制和分裂速度，促进肿瘤细胞的持续性自我扩增[10]。在肿瘤细胞异常分裂或扩增过程中，部分凋亡的肿瘤细胞膜碎片可明显促进CA72-4的释放，使外周血CA72-4的水平升高[11]。研究发现，GAS-17在消化道肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用，GAS-17的异常表达可影响胃黏膜病变细胞的增殖活性和肿瘤细胞核的转录活性[12]。

本研究检测血清DKK1、CA72-4、GAS-17的表达情况，结果显示，胃癌组患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均高于溃疡组患者和对照组受试者，且溃疡组患者CA72-4、GAS-17水平均高于对照组受试者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。表明血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平升高可能会促进胃黏膜上皮细胞病变，这可能是因为DKK1水平升高不仅可激活WNT信号通路，还可提高胃黏膜上皮细胞的浸润能力和黏附能力，促进胃黏膜上皮病变细胞对基底膜组织的浸润[13]；CA72-4和GAS-17水平升高可导致细胞异常代谢，从而导致胃肠道激素分泌异常。谢海涛[14]研究发现，胃癌患者血清CA72-4水平平均可升高30%，而合并远处转移或高肿瘤负荷的患者，CA72-4浓度可进一步升高。本研究探讨血清DKK1、CA72-4、GAS-17的水平与胃癌患者基线特征的关系，结果显示，除有无淋巴结转移胃癌患者的血清GAS-17水平无明显差异外，临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化胃癌患者的血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平均明显高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为中高分化的胃癌患者，表明上述指标的水平变化均可能与胃癌的发生发展有关，这主要是因为DKK1、CA72-4、GAS-17水平升高可提高胃黏膜上皮细胞的黏附和浸润能力。

综上所述，胃癌患者血清DKK1、CA72-4、GAS-17水平较高，且可能与胃癌的临床分期、分化程度和淋巴结转移情况有关。