不同pH值的PDA培养基和不同培养基对辣椒炭疽菌生长和产孢的影响
2019-08-22刘郑琦徐冬梅李焕秀黄海涛
张 杰,易 兰，文 静,刘郑琦，徐冬梅，李焕秀，黄海涛
(1.四川省绵阳市农业科学研究院，四川 绵阳 621023；2.四川农业大学园艺学院，成都 温江 611130)
辣椒炭疽病是辣椒生产中一种常发病害，主要为害果实，引起采前和采后的果实腐烂，也为害叶片，引起落叶，严重时可造成 30% 以上的减产[1]，“七五”期间曾被列为国家辣椒种质资源抗病性鉴定的主要病害之一。在南美洲、欧洲、澳洲和亚洲均有严重发生的报道[2-8]。
1 材料与方法
1.1 试验材料
马铃薯葡萄糖固体培养基(PDA)：300g马铃薯，20g葡萄糖，15g琼脂粉，氯霉素0.1g，加水配至1L。
V8培养基：200gV8(100%蔬菜汁饮料，美国金宝)，2g CaCO3，16g琼脂粉，加水配至1L。
胡萝卜固体培养基(CA):200g胡萝卜，20g琼脂粉，加水配至1L。
利马豆固体培养基(LA):60g利马豆，20g琼脂粉，加水配至1L。
燕麦固体培养基(OA):90g燕麦，20g琼脂粉，加水配至1L。
大豆固体培养基(BA):90g大豆，20g琼脂粉，加水配至1L。
黑麦固体培养基(RA):60g黑麦，20g琼脂粉，加水配至1L。
表1 不同pH值的PDA培养基对炭疽菌菌丝生长的影响及其菌落特征
1.2 试验方法
1.2.1 病原菌分离 炭病原菌，在无菌的条件下，将病原菌接种到PDA平板上，28℃、12h光照条件下培养，培养一段时间后，再次接到PDA平板上进行多次分离纯化，直至菌落生长整齐一致没有杂菌出现。
1.2.2 不同pH对炭疽菌菌丝生长和产孢数量的影响 用接种环挑取适量病原菌的菌丝于pH为5、6、7、8、9 、10、11的PDA 平板中央，黑暗条件下置于28℃恒温培养箱内，从第2天开始测量菌落直径。测量10d后，收集游动孢子悬浮液，血球计数板计数。
1.2.3 不同培养基对炭疽菌菌丝生长和产孢数量的影响 用接种环挑取适量病原菌的菌丝分别置于PDA平板、V8平板、CA平板、LA平板、OA平板、BA平板、RA平板中央，黑暗条件下置于28℃恒温培养箱内，从第2天开始测量菌落直径。测量10d后，收集游动孢子悬浮液，血球计数板计数。
2 结果与分析
2.1 不同pH对炭疽菌菌丝生长和产孢数量的影响
从表1可知，炭疽菌在pH值范围为5～11时均可生长，pH值低于5时，PDA培养基不凝固。pH值为6和7时，菌丝生长率最大，分别达到0.8075cm/d和0.8083cm/d，显著高于其他pH值。其次是pH值为8时，菌丝生长率为0.7758cm/d。长得最慢的是pH值为5、9、10、11，生长速度显著低于pH值为6、7、8时。因此，炭疽菌最适宜生长的PDA培养基pH值为6、7、8。
结果表明(图1)，炭疽菌在pH值范围为5～11时均可产孢。pH值为7时，产孢数量最多，明显高于其他pH值，为13.9000×106个/mL，其次是pH值为6、8、9时，pH值为5、10、11时，产孢数量最少。
图1 不同pH值的PDA培养基对炭疽菌产孢数量的影响
2.2 不同培养基对炭疽菌菌丝生长和产孢数量的影响
研究结果表明(表2)，炭疽菌在不同培养上均可生长，但在不同培养基上菌丝生长率仍存在极显著差异。供试的7种培养基中，CA、RA、V8、BA培养基菌丝生长率最快，生长率分别为0.72025、0.71725、0.7005、0.6990cm/d。其次是PDA和LA培养基，它们的菌丝生长率分别为0.65275和0.6335cm/d。长得最慢的是OA培养基，它的菌丝生长率为0.5035cm/d。
表2 不同培养基对炭疽菌菌丝生长的影响及其菌落形态特征
图2 不同培养基对炭疽菌产孢数量的影响
从图2可知，不同培养基对病原菌的产孢和对菌丝生长影响有较大差异，即在培养基营养条件不具备的情况下，菌丝虽然能够生长，但产孢能力大幅下降。RA培养基产孢量最多，为49.9500×106个/mL；其次是BA培养基产孢量，为43.4250×106个/mL；OA培养基产孢量最少，为3.1750×106个/mL。
3 讨论
不同pH值的PDA培养基对炭疽菌的生长和产孢数量影响不大，由试验可知，pH值7时，菌丝生长率和产孢数量皆为最高，pH值越低或越高，其菌丝生长率和产孢数量也越低，但是菌丝生长率和产孢量的下降幅度不一样。炭疽菌最适宜在中性环境生长。
不同培养基对炭疽菌的生长和产孢数量的影响是不一致的。从菌丝生长率来看，从高到低依次是RA、CA、V8、BA、PDA、LA、OA。从产孢量来，从高到低，依次是RA、BA、V8、PDA、LA、CA、OA。菌丝生长率和产孢量的变化规律并不相同。CA培养基的生长率高，但是其产孢量低。RA培养基的生长率和产孢量都是最高的，OA培养基的生长率和产孢量都是最低的。
