日粮中铜水平对貉造血功能和肝脏铜浓度的影响

魏宇森 徐婷婷 郑淑强 魏 来 刘志平*

(1.东北林业大学野生动物资源学院，哈尔滨，150040；2.哈尔滨华隆蓝狐育种有限公司，哈尔滨，150070)

铜是动物维持机体正常代谢的必需微量元素，它与畜禽的造血功能有着密切的关系。在1949年张力等人的研究(下同)[1]表明断奶仔猪日粮中铜水平与血液中某些酶类在代谢上存在一定的相关关系，雷鸣等[2]发现饲粮铜水平对生长獭兔血清总蛋白、白蛋白含量有极其显著影响。李延鹏等[3]得出适宜铜含量对育成前期水貂的血清酶活性有明显促进作用的结论，肉鸡、鹅、山羊等畜禽日粮中添加高铜的研究也有不少报道，其结论较为一致，即高铜饲料对动物生长发育有显著影响，但日粮中铜含量超过畜禽需求量，畜禽会出现中毒症状，有研究发现，在家畜日粮中使用高铜和超高铜添加剂可显著增加肝脏和肌肉中的铜含量。添加过量的铜会增加肝铜的残留量，增加肝脏的负担，可能引起肝脏变性和中毒症状[4]。

但目前国内外关于貉(NyctereutesProcyonoides)对铜需求量的研究不够充分，缺乏貉营养需要标准。因此，本试验以硫酸铜作铜源，研究在貉冬毛期日粮中添加不同剂量铜，分析日粮中铜水平对貉机体造血功能和肝脏铜沉积的影响，为貉饲料添加适宜的铜元素提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

选取哈尔滨华隆蓝狐育种有限公司教学实习基地的6月龄体重相近健康公貉12只。

1.1.2 试验材料

饲料级硫酸铜，Cu含量≥25.0%(成都蜀星饲料有限公司)，真空采血管(江苏朗健医疗)，迈瑞2800 pet血球分析仪(迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，ICP-AES(美国安捷伦公司725)。

1.2 试验方法

1.2.1 分组与日粮配制

挑选12只健康公貉随机平分成4组，分别编号为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。Ⅳ组为对照组正常投喂基础日粮(基础日粮中铜为10 mg/kg)，每只貉的饲喂量为300 g/d。因杨赵伟等[5]对冀东地区貉饲料微量元素调查，发现铜的平均含量为63 mg/kg，已远远高于李光玉[6]所提出的建议量，故分别向Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组日粮中添加10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg的外源铜，用饲料搅拌机均匀混合。由专人负责饲养管理，每日11：00进行投喂(1次/d，连续30 d)。

1.2.2 血液样本采集

梁金强等[7]研究发现Beagle犬一天内血液学和血液生化指标会出现波动，因此采血时间固定于9：00—10：00。分别在试验的第1天、第8天、第15天、第22天采血3 mL(试验貉人工保定，用酒精棉在后肢处消毒，用无菌一次性注射器后肢静脉采血)，转移至采血管中保存待测。

山洪灾害防治是福建省一项长期而艰巨的任务。在总结山洪灾害防治县级非工程措施项目建设前期经验的同时，也应思考和分析山洪灾害防治建设和管理中存在的实际问题。例如，项目运行管理难度大，乡村防洪基础依然较薄弱，山丘区群众防灾减灾意识仍有待增强等。当前，福建省正在加快完成山洪灾害防治县级非工程措施项目建设任务，加强运行管理，不断提高山洪灾害防治水平。

1.2.3 血液样本检测

使用滴管将所取血液样本移入宠动物非真空EDTA抗凝采血管中，放入血球分析仪测定RBC、HGB、HCT。

1.2.4 肝脏铜含量测量

在第22天采血后将试验动物屠宰，摘取肝脏样品。采用盐酸微波消解法对肝脏样品预处理，将样品用蒸馏水清洗，称取一定量样品(1 g左右)于烧杯中，加入盐酸、硝酸、氢氟酸溶解样品并过滤，使用双蒸馏水将滤液定容至20 mL后采用ICP-AES测试肝脏中铜元素含量。

1.2.5 数据处理

采用SPSS 22.0软件对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均值±标准误”表示，采用单样本t检验对试验结果进行差异显著性分析。

2 结 果

2.1 血液参数

3项血液指标与日粮中铜元素含量及饲喂时间的关系(图1，图2，图3)。

图1 日粮铜水平对貉HGB的影响Fig.1 Effects of dietary copper level on HGB in racoon dog

图2 日粮铜水平对貉RBC的影响Fig.2 Effects of dietary copper level on RBC in racoon dog

图3 日粮铜水平对貉HCT的影响Fig.3 Effects of dietary copper level on HCT in racoon dog

由图1可知，Ⅰ组和Ⅱ组的HGB在饲喂初期呈现明显的上升(P<0.05)，随着试验时间的增加开始下降，Ⅲ组的HGB呈稳步上升；由图2可知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的RBC含量，在饲喂初期明显上升，Ⅱ组和Ⅲ组在末期显著下降(P<0.01)；由图3可知，Ⅰ、Ⅱ组缓慢下降，Ⅲ组在试验初期迅速上升而后下降。同时Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3组血液指标在试验后期都趋于相近水平，高于Ⅳ组，且差异显著(P<0.05)。

2.2 肝脏铜沉积量

图4 日粮铜水平对貉肝脏铜沉积的影响Fig.4 Effects of dietary copper levels on liver copper deposition of raccoon dog

由图4可知，Ⅰ组和Ⅱ组肝脏中铜的沉积量与日粮中铜的含量呈正相关增加，当日粮中铜元素含量超过30 mg/kg时肝脏铜沉积量迅速增加。

3 结 论

在貉冬毛期，向基础日粮(铜元素含量为10 mg/kg)中添加适量铜元素对貉的造血功能有促进作用；但日粮中铜元素水平高于30 mg/kg时铜会在貉肝脏中加倍沉积。

4 讨 论

4.1 机体造血

血液对维持动物机体正常的生命活动具有十分重要的意义，血液中的各种成分能比较客观地反映动物的代谢情况，因此，血液生化指标能直接指示动物的生理功能是否正常，是临床检验中非常有用的一个指标[8-9]。RBC、HGB、HCT三者结合可间接指示造血功能的强弱。健康状况下，RBC、HGB、HCT越高，说明造血功能越强。

资料显示，健康貉的血液参数与以下几种动物的各项血液生化值没有显著差异(表1)。

表1 健康貉的血液参数与其他动物的比较Tab.1 Comparison of blood parameters between healthy raccoon dog and other animals

注：引自梁金强等[7]、肖向红等[10]、吴学壮等[11]
Note：The quote LIANG Jinqiang et al[7]，XIAO Xianghong et al[10]，WU Xuezhuang et al[11].

本试验发现日粮铜水平对貉的RBC、HGB、HCT短期内具有影响，与吴学壮等[11]发现铜水平对水貂血红蛋白含量和血细胞比容回归分析和方差分析均无显著影响的结论有不同，其原因不得而知，由于条件所限，没有对貉的其他生理指标及生长发育情况予以监测统计，有待于进一步实验。

4.2 高铜饲料的毒性作用

高铜饲料条件下的IV组，出现厌食等轻微中毒症状，自从发现高铜饲料对断奶仔猪的生长性能具有促进作用以来[12]，高铜饲料被盲目使用，追求高效率，忽视了环境效益和动物福利。研究表明高铜会造成动物肝脏损伤[13-14]，因此研究貉的肝脏铜沉积量，对于貉饲料中铜适宜量的确定有十分重要的意义。

本试验基础日粮铜水平为10 mg/kg，图4表明，Ⅳ、Ⅰ、Ⅱ组肝脏铜沉积量与日粮铜水平呈线性增长，Ⅲ组肝脏铜沉积量迅速增加。张力等[1]和王建明等[15]提出当动物机体铜水平低于需要量时，肝脏铜沉积量会随着日粮的变化而变化，呈一定的相关性；当日粮铜明显高于动物机体需要量时，肝脏铜沉积量会成倍数增加，没有相关性。本试验所设铜浓度梯度Ⅰ、Ⅱ组在貉所需铜含量范围内，而Ⅲ组超过了貉的正常需求量。Aulerich 等[16]以CuSO4·5H2O 为铜源，水貂日粮铜元素浓度为50 mg/kg时水貂生长正常，所以不适宜用水貂饲料铜含量标准饲养貉。

在貉养殖方面，陈蓉[17]总结貉饲料中毒的措施，陈国发[18]系统介绍貉的饲养管理。因为动物体内铜的含量直接影响酪氨酸酶的活性，进而影响动物毛色[19-20]。貉作为珍贵的毛皮动物之一，随着人们对貉皮的需求量不断增加，确定貉饲料含铜量相当关键。由于本试验的周期较短，长期饲喂高铜饲料对貉的健康状况及皮张质量的影响有待于进一步研究。