参苓全营养制剂改善荷瘤小鼠化疗后营养状况的实验研究

陈勇军，李武国，程翔燕，成金乐

1.中山市中智药业集团有限公司，国家中医药管理局中药破壁饮片技术和应用重点研究室，广东 中山 528437；2.中山大学附属第一医院，广东 广州 510080

参苓全营养制剂为依据GB 29922开发的肿瘤特定全营养配方食品。其在常规营养素搭配的基础上，根据中医药传统的养生、药膳等理论，特别添加了具有扶正固本、免疫调节功能的药食同源物质。化疗作为恶性肿瘤患者综合治疗中的一个重要手段，常会引起恶心、呕吐、造血系统受抑、免疫力低下等毒性反应，不但加重了患者营养状况的恶化，同时肿瘤患者的营养不良又会导致患者对化疗等抗肿瘤治疗的耐受力下降[1]。因此合理有效提供营养支持治疗对于肿瘤化疗患者而言非常重要。本研究旨在通过实验初步评价参苓全营养制剂对肿瘤化疗后营养状况的改善作用以及辅助治疗效果。

1 材料与方法

1.1 样品

参苓全营养制剂（规格：250 g/袋，批号：20160812）由中山市中智药业集团有限公司提供。临用时加灭菌注射用水配制成浓度为0.3 g·mL-1的均匀混悬液，作为供试品。

速愈素（规格：74 g/袋，批号：6039428200）为雀巢保健营养公司产品。临用时加灭菌注射用水配制成浓度为0.6 g·mL-1的均匀混悬液，作为对照品。

顺铂注射液（规格：6 mL∶30 mg（5 mg·mL-1），批号：160802）为江苏豪森药业股份有限公司产品。临用时加生理盐水配制成2.5 mg·mL-1的顺铂溶液，作为治疗用药[2]。

1.2 主要仪器与试剂

Thermo Multiskan FC型酶标仪；日立7020型全自动生化分析仪；灭菌注射用水（批号：1607183202，石家庄四药）；氯化钠注射液（批号：S1610077，上海百特医疗）；胎牛血清（批号：42G5550K）、DMEM培养基（批号：8116293）、0.25%Trypsin-EDTA（批号：1676922）均为gibco公司产品；PBS溶液（批号：AB10136405）为hyclone公司产品；多聚赖氨酸（货号：P1399）为sigma公司产品。小鼠前白蛋白（PA）ELISA试剂盒（批号：02/2017，上海酶联生物）。小鼠TNF-α ELISA试剂盒（批号：AK0017FEB07020，伊莱瑞特生物）。

1.3 实验动物

SPF级C57BL/6小鼠，雌性，体重为18～22 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证编号为SCXK（京）2012-0001，实验动物质量合格证编号为11400700199614。

1.4 瘤株

Lewis肺癌细胞（LLC）购自于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。LLC细胞用含20%FBS的DMEM培养基进行培养，37℃，5%CO2，2～3天传代一次。

1.5 方法

1.5.1 模型的建立 在每只雌性C57BL/6小鼠的背部右侧皮下注射含2×107个·mL-1的细胞悬液100 μL，培养11天后，选择精神状态良好、瘤体生长良好的荷瘤小鼠为实验动物。

1.5.2 分组及给药 将荷瘤小鼠随机分为4组，每组20只，分别设为模型组、参苓组、速愈素组、顺铂组。参苓组全营养制剂均匀混悬液每天灌胃两次，两次灌胃之间间隔5小时，其余三组每天灌胃一次，连续10天，各组灌胃剂量均为20 mL·kg-1BW。各组腹腔注射给予相应的溶液，注射剂量均为2.4 mL·kg-1BW，10天内注射3次，分别于开始灌胃后第1、5、8天分别注射一次。

1.5.3 观察指标与测定方法 ①小鼠一般情况观察：实验过程中定期观察小鼠的精神状态、饮食、毛发、自主活动、肌力、粪便性状及对外界刺激反应等情况。各组于灌胃前、后每天称重并记录体重。②肿瘤测量：于给药前、给药后第4、8、11天测量肿瘤的长和宽，通过公式计算肿瘤的大小（肿瘤体积=长×宽2/2）。③血清生化指标和细胞因子的检测：实验最后一天取小鼠眼眦静脉血，放置1 h左右，5 000 r·min-1离心10 min，取上清液，即得小鼠血清标本，全自动生化仪检测TP、ALB的含量；ELISA试剂盒检测血清中PA、TNF-α的含量。④抑瘤率测定：解剖小鼠取瘤体，称重，计算肿瘤生长抑制率：肿瘤生长抑制率=（1-给药组平均瘤重/模型组平均瘤重）×100%。

1.6 统计学处理

应用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析及组间t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠一般情况观察

模型组表现正常，其余三组化疗后均不同程度出现体重下降、精神欠佳、多尿等毒副反应（表1、表2）。

与模型组比较，化疗后小鼠均有不同程度的体重下降（P＜0.001）；与顺铂组比较，参苓组、速愈素组的小鼠体重减轻程度相对偏小（P＜0.01），而参苓组和速愈素组间差异无统计学意义（表2）。

2.2 肿瘤体积变化以及抑瘤率

开始灌胃后，模型组小鼠肿瘤仍然持续增长，其余三组小鼠肿瘤的生长都受到一定的抑制，顺铂组小鼠在给药第8天后甚至出现了肿瘤体积缩小的现象（表3）。

表1 小鼠一般情况

表2 各组小鼠体重变化情况（±s，n=20）

表2 各组小鼠体重变化情况（±s，n=20）

与顺铂组比较，①P＜0.01。

组别小鼠体重（单位：g）顺铂组19.48±0.59 18.77±0.60 18.52±0.77 18.37±0.87 18.22±1.03 17.24±1.04 16.87±1.03 16.46±1.36 15.21±1.17 14.85±1.18 14.55±1.09第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天模型组19.58±0.84 19.39±0.91 19.43±0.92 19.60±0.87 19.73±0.88 19.73±0.99 19.72±0.89 19.40±0.89 19.65±0.89 20.03±0.93 20.17±0.83参苓组19.23±0.74 18.57±0.72 18.45±0.56 18.58±0.43 18.66±0.51 17.78±0.58 17.26±0.68 16.88±0.66 16.11±0.82 15.79±0.9 15.41±0.92①速愈素组19.64±0.55 19.05±0.57 18.92±0.64 18.95±0.64 19.15±0.66 18.41±0.68 17.98±0.75 17.82±0.75 17.03±1.00 16.64±1.08 16.48±1.05①

2.3 小鼠血清TP、ALB、PA、TNF-α的含量

相对于模型组，其余化疗三组的TP、ALB值均有不同程度下降，但TNF-α值均较模型组更高（表5）。

表3 各组小鼠肿瘤体积变化情况（±s，n=20）

表3 各组小鼠肿瘤体积变化情况（±s，n=20）

与顺铂组比较，①P＜0.01；与模型组比较，②P＜0.01。

组别模型组参苓组速愈素组顺铂组平均肿瘤体积（mm3）第11天280.11±171.48 119.54± 68.62①②151.10± 124.84①②72.89±48.79②第1天58.76±36.02 50.82±22.07 39.79±25.30 46.19±23.21第4天89.83±75.10 76.86±39.09 62.55±39.47 68.54±37.05第8天202.98±171.15 114.01±59.56 122.62±91.56 83.03±50.17

表4 对小鼠Lewis肺癌抑瘤率的影响 （±s，n=20）

表4 对小鼠Lewis肺癌抑瘤率的影响 （±s，n=20）

与模型组比较，①P＜0.01；与顺铂组比较，②P＜0.01。

组别模型组参苓组速愈素组顺铂组抑瘤率（%）0 72.1 58.0 82.3瘤重（g）0.29±0.19 0.08±0.05①0.12± 0.09①②0.05±0.04①

3 讨论

3.1 从模型组小鼠体重增长正常、精神良好，外观、行为、饮食等正常可以看出，该阶段尚处于肿瘤早期阶段，该阶段机体尚未产生明显不适表现，但机体的内在生化指标已经出现了一些异常，同时该阶段瘤体生长迅速。即使是在身体条件较好的早期阶段即开始的化疗治疗，化疗在显著抑制肿瘤生长甚至使瘤体萎缩的同时，也使小鼠产生了消瘦、精神欠佳、多尿等严重不良反应。

3.2 从试验结果可以看出，化疗过程中，在肿瘤早期、身体素质尚好时开始营养支持治疗，不但有利于改善化疗的体重、精神等生存状态，减轻化疗的副作用，而且对化疗肿瘤抑杀效果没有太大影响，其收益大于风险。对肿瘤的治疗，实施营养干预的时机是越早越好[3]。

表5 各组小鼠血清中TP、ALB、PA的含量检测结果 （±s，n=20）

表5 各组小鼠血清中TP、ALB、PA的含量检测结果 （±s，n=20）

与模型组比较，①P＜0.05；与顺铂组比较，②P＜0.05（注：大多数样品TNF-α含量低于试剂盒最小检测限，因此TNF-α含量检测无结果。）

组别模型组参苓组速愈素组顺铂组含量（mg/L）TP 56.53±2.19 56.03±2.64②55.01±1.76②50.74±5.50①ALB 27.23±1.16 26.25± 1.26①②25.73±1.02①24.18±2.82①TNF-α 221.80±38.92 277.52± 49.56①②288.33±47.33①317.60±69.14①

3.3 参苓全营养制剂特别在常规营养素[4]之外，以破壁粉体形式添加了具有免疫调节功能的人参、茯苓和山药。破壁粉体的粒径分布控制在D90小于30 μm以下，粉体均匀细腻[5]，不但有利于改善粉体冲调时的可冲调性[6]，使粉体易于溶解和滑腻，而且也有利于提高吸收利用率[7]。试验结果表明参苓全营养制剂能减轻顺铂造成的小鼠体重下降程度，提高顺铂导致小鼠下降的总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）的含量，能减轻顺铂对Lewis肺癌荷瘤小鼠产生的副作用，在某些方面效果好于速愈素，扶正固本、免疫调节类药食同源物质的添加有其合理性和必要性[8]。